钩端螺旋体(3)

钩端螺旋体（3）
作者：赵瑜
来源：《国外畜牧学·猪与禽》2017年第02期
猪钩端螺旋体病的诊断是一项挑战性的工作。

最常见的诊断方法可以分为直接法和间接法。

直接法注重于该菌的检测和/或鉴定，而间接法则利用血清学方法检测该菌的抗体。

中图分类号：S855 文献标识码：C 文章编号：1001-0769（2017）02-0005-02
1 直接法
钩端螺旋体的分离和鉴定，利用银染或暗视野显微镜目测钩端螺旋体，通过荧光抗体试验（Fluorescent Antibody Test，FAT）或免疫组化试验检测钩端螺旋体抗原，或检测猪组织、体液中的钩端螺旋体DNA，可以对出现急性钩端螺旋体病临床症状的动物进行诊断。

胎儿组织样本的相同检测结果也可对钩端螺旋体流产进行确诊。

1.1 病原体的分离和鉴定
组织分离和鉴定钩端螺旋体可以对钩端螺旋体病做出明确的诊断，而且可以鉴定感染菌的血清型。

该方法对钩端螺旋体病的诊断具有较高的灵敏性和特异性。

细菌培养通常只能在参考实验室进行，但对流行病学分析仍然很重要。

最后，细菌培养对测定它的抗菌素敏感性是绝对必要的。

1.2聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）
该方法是基于检测细菌中普遍存在的不同特定基因或致病性钩端螺旋体的专有基因。

PCR 试验的主要优点是可以进行早期诊断，而且不需要活的钩端螺旋体就可以得到阳性PCR结果。

最后，确诊是利用PCR方法诊断动物的钩端螺旋体病最重要的未决事项。

1.3 免疫染色技术
免疫荧光（Immunofluorescence，FAT）和免疫组化试验适用于胎儿样本或高度自溶的死亡动物，因为这些样本的病原菌分离可能会很困难。

此外，当需要进行快速诊断时，这些方法也非常实用。

这些方法的主要缺点是其正确性取决于样本中存在的钩端螺旋体数量。

因此，这些方法不适用于对处于慢性携带状况的动物进行诊断，因为这种动物体内的细菌数量可能非常低。

1.4 组织病理学和暗视野显微镜检
银染技术的优点是其可以应用于甲醛固定的组织样本，而且还可以是组织病理学诊断方法的一个有效辅助手段。

然而，组织学技术缺乏灵敏性和特异性，而且不能确定病原体的血清型。

暗视野显微镜检法已被用于检测感染钩端螺旋体的动物和胎儿的尿液或体液样本。

但是，该技术具有较低的灵敏性和特异性，因为许多组织的伪影可能会被误认为是钩端螺旋体。

2 间接法
血清学试验是确认临床诊断最常用的方法。

虽然已经推出了许多血清学试验方法，但仅显微镜凝集试验（Microscopic Agglutination Test，MAT）和酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）是兽医实验室常用的方法。

血清学方法只在两种情况下对个体动物具有诊断价值：第一，当急性期且间隔为 14 d～21 d的配对血清样本确定为血清转换时；第二，当在免疫功能正常的胎儿血液和/或胸腔液中或未采食初乳的仔猪血清中检测到抗体时。

在动物水平上对流产病例进行诊断时，血清学试验在偶发血清型或波莫纳型的感染病例中可能具有诊断价值。

然而，如果在塔拉索维型感染以及主要为澳洲群的适应性血清型感染上，血清学试验的诊断价值非常有限。

2.1显微镜凝集试验（Microscopic Agglutination Test，MAT）
MAT是诊断钩端螺旋体病应用最广泛的方法，而且是标准的血清学试验。

由于其通常不与其他细菌的抗体发生交叉反应，使其特异性很好。

然而，疫苗以及钩端螺旋体血清型和血清组之间的交叉反应可能会干扰MAT的结果分析。

MAT不能用来明确确定个体感染或群体感染的血清型。

另外，不同血清型（包括免疫接种后两个月的疫苗）的抗体滴度可能会维持在显著较高的水平上。

2.2 酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）
基于外膜蛋白构建的ELISA具有较低的特异性，可以检测所有致病性钩端螺旋体的抗体。

此外，该方法对适应性血清型感染灵敏性低。

更适用于对非适应性血清型感染的诊断。

基于脂多糖构建的ELISA具有血清组特异性，这对流行病学研究非常有用。

主要缺点是，在主要为布拉迪斯拉发型感染中，其灵敏性可能会低于50%。

同MAT一样，ELISA试验不能区分野毒感染和接种感染的动物。