兔巴氏杆菌的分离与鉴定
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2019年第8期 吉林畜牧兽医
51
·草食动物·
CaoShi DongWu
兔巴氏杆菌的分离与鉴定
马铁英1,王欣宇2,李昱洁2,邵洪泽2,丁世杰2,任 锐
2*
1.吉林省榆树市动物卫生监督所,吉林榆树 130400;
2.吉林省畜牧兽医科学研究院,吉林长春
130062
多杀性巴氏杆菌是引起畜禽(如兔、猪、牛、鸡等)巴氏杆菌病的病原菌,主要引起动物发生出血性败血症。兔巴氏杆菌病又称为兔出血性败血症,是严重危害养兔业的细菌性传染病之一。采集疑似病死兔病料进行了兔巴氏杆菌的分离鉴定。
1 临床症状
病兔呼吸道症状明显。表现为咳嗽、打喷嚏,鼻孔流出水样或黏液样分泌物,鼻部被毛湿润;严重者呼吸困难。病死兔鼻腔、气管充血,气管内有大量白色黏液;肺脏出血、肿大;肝脏、脾脏瘀血、肿大;肾脏瘀血;膀胱充满尿液。
2 细菌分离
采集病兔心血、肝脏、肺脏。将采集的样品涂布于血琼脂37 ℃培养18 h,挑取单个菌落进行革兰氏染色(结晶紫1 min →碘液1 min →脱色液30 s →复染液10 s),油镜镜检。结果从病死种兔的心肝肺均分离到基本相似的细菌菌落,革兰氏染色镜检为阴性菌。
3 生化鉴定
从新鲜的血琼脂平板上挑取3~5个鉴定为革兰氏阴性菌的菌落,用浊度计调整至0.5 McFarland 标准管。通过接种仪分别接种在美国赛默飞世尔革兰氏阴性菌鉴定板,37 ℃孵育 24 h。通过OptiRead 自动微生物鉴定分析系统进行生化鉴定,结果为FR1:阴性;木糖:阴性;FR3:阳性;麦芽糖:阴性;FR5:阴性;阿拉伯糖:阴性;FR7:阴性;丙二酸:阴性;尿素:阴性;FR12:阴性;海藻糖:阴性;FR4:阴性;果糖:阳性;赖氨酸:阴性;精氨酸:阴性;丙
酮酸:阴性;鸟氨酸:阴性;蔗糖:阳性;FR8:阳性;肌醇:阴性;七叶苷:阴性;TDA:阴性;FR6:阴性;枸橼酸盐:阴性;山梨醇:阳性;FR9:阴性;甘露醇:阳性;FR10:阴性; 阿糖醇:阴性;棉子糖:阴性;纤维二糖:阴性;胍丁胺/鲱精胺:阴性,生化鉴定为多杀巴氏杆菌。
4 分子生物学方法检测
参照农业标准[1]设计引物、样品处理、基因提取、反应体系和反应条件、凝胶电泳分析等操作步骤进行试验。
上游引物P1:5'- ATC CGC TAT TTA CCC AGT GG- 3'。
下游引物P2:5'-GCT GAT AAC GAA CTC GCC AC- 3'。
实验结果扩增产物电泳后通过凝胶成像系统观察,在460 bp 处有目的条带,证明为巴氏杆菌核酸阳性。
5 讨论
兔巴氏杆菌病临床上可表现为败血症、肺炎、鼻炎、结膜炎、中耳炎、脓肿等多种形式的一种传染病。可经呼吸道、消化道或皮肤、黏膜、伤口感染等多种途径传播,呈散发性或地方性流行。幼龄兔多发易发,其它兔在各种不良条件或应激刺激导致兔抵抗力降低时,也可引起发病,给养兔业造成巨大损失,是养兔业最应重视的传染病之一。吉参考文献:
[1] NYT 563-2016 禽霍乱(禽巴氏杆菌病)
诊断技术。
*通讯作者