兔巴氏杆菌的分离与鉴定

2019年第8期 吉林畜牧兽医

51

·草食动物·

CaoShi DongWu

兔巴氏杆菌的分离与鉴定

马铁英1，王欣宇2，李昱洁2，邵洪泽2，丁世杰2，任 锐

2*

1.吉林省榆树市动物卫生监督所，吉林榆树 130400；

2.吉林省畜牧兽医科学研究院，吉林长春

130062

多杀性巴氏杆菌是引起畜禽（如兔、猪、牛、鸡等）巴氏杆菌病的病原菌，主要引起动物发生出血性败血症。兔巴氏杆菌病又称为兔出血性败血症，是严重危害养兔业的细菌性传染病之一。采集疑似病死兔病料进行了兔巴氏杆菌的分离鉴定。

1 临床症状

病兔呼吸道症状明显。表现为咳嗽、打喷嚏，鼻孔流出水样或黏液样分泌物，鼻部被毛湿润；严重者呼吸困难。病死兔鼻腔、气管充血，气管内有大量白色黏液；肺脏出血、肿大；肝脏、脾脏瘀血、肿大；肾脏瘀血；膀胱充满尿液。

2 细菌分离

采集病兔心血、肝脏、肺脏。将采集的样品涂布于血琼脂37 ℃培养18 h，挑取单个菌落进行革兰氏染色（结晶紫1 min →碘液1 min →脱色液30 s →复染液10 s），油镜镜检。结果从病死种兔的心肝肺均分离到基本相似的细菌菌落，革兰氏染色镜检为阴性菌。

3 生化鉴定

从新鲜的血琼脂平板上挑取3～5个鉴定为革兰氏阴性菌的菌落，用浊度计调整至0.5 McFarland 标准管。通过接种仪分别接种在美国赛默飞世尔革兰氏阴性菌鉴定板，37 ℃孵育 24 h。通过OptiRead 自动微生物鉴定分析系统进行生化鉴定，结果为FR1：阴性；木糖：阴性；FR3：阳性；麦芽糖：阴性；FR5：阴性；阿拉伯糖：阴性；FR7：阴性；丙二酸：阴性；尿素：阴性；FR12：阴性；海藻糖：阴性；FR4：阴性；果糖：阳性；赖氨酸：阴性；精氨酸：阴性；丙

酮酸：阴性；鸟氨酸：阴性；蔗糖：阳性；FR8：阳性；肌醇：阴性；七叶苷：阴性；TDA：阴性；FR6：阴性；枸橼酸盐：阴性；山梨醇：阳性；FR9：阴性；甘露醇：阳性；FR10：阴性； 阿糖醇：阴性；棉子糖：阴性；纤维二糖：阴性；胍丁胺/鲱精胺：阴性，生化鉴定为多杀巴氏杆菌。

4 分子生物学方法检测

参照农业标准[1]设计引物、样品处理、基因提取、反应体系和反应条件、凝胶电泳分析等操作步骤进行试验。

上游引物P1：5'- ATC CGC TAT TTA CCC AGT GG- 3'。

下游引物P2：5'-GCT GAT AAC GAA CTC GCC AC- 3'。

实验结果扩增产物电泳后通过凝胶成像系统观察，在460 bp 处有目的条带，证明为巴氏杆菌核酸阳性。

5 讨论

兔巴氏杆菌病临床上可表现为败血症、肺炎、鼻炎、结膜炎、中耳炎、脓肿等多种形式的一种传染病。可经呼吸道、消化道或皮肤、黏膜、伤口感染等多种途径传播，呈散发性或地方性流行。幼龄兔多发易发，其它兔在各种不良条件或应激刺激导致兔抵抗力降低时，也可引起发病，给养兔业造成巨大损失，是养兔业最应重视的传染病之一。吉参考文献：

[1] NYT 563-2016 禽霍乱(禽巴氏杆菌病)

诊断技术。

*通讯作者