血液肿瘤的分子检测ppt课件

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预后中等 预后不良
正常核型 +8 t(9:11) 其他未定义型
复杂核型 -5, 5q-, -7, 7q11q23: 不包括 t(9;11) inv(3), t(3;3) t(6;9) t(9;22)
来自百度文库
-
分子生物学异常
正常核型伴: NMP1突变 或CEBPA突变而且无 FLT3-IDT t(8;21), t(15;17),inv(16) or t(16;16): 伴c-KIT突变
基于PCR的方法:
PCR,Q-PCR, HRM
基因测序的方法:
Sanger’s
four-dye system
Chromato gram file
-
single-dye system
13
分子诊断:新的检测DNA改变的策略
微阵列
不能发现未知基因
二代测序:
不适合发现大的插入/缺失, 扩增, 易位
DNA microarrays
2 – 7 bp Repeats
DNA 水平上的改变 – 小的改变
点突变 缺失/插入
CCTGAGGAG
CCTGTGGAG
例如: 血红蛋白, β –镰刀形红细胞贫血病
GAATTAAGAGAAGCA
GAAGCA
例如: 表皮生长因子受体 – 肺癌
重复改变
TTCCAG…(CAG)5…CAGCAA TTCCAG…(CAG)60…CAGCAA 例如:亨廷顿蛋白 –亨廷顿病
血液肿瘤的分中国子医学检科学测院
血液病医院 汝昆
-
1
血液肿瘤的综合诊断
MI GM
形态学 免疫分型
遗传学 分子生物学
-
3
ALL中免疫分型和遗传学的相关性
CD9 CD10 CD15 CD24 CD34
t(12:21) t(4:11)
-
+
+
-
-
+
+
-
+
+
t(1;19)
+ + + -
t(9;22)
+ + + +
ASXL1
MPL
FLT3
AML
RUNX1
PTEN
IDH2
NPM1
DNMT3A
KIT
-
33
高通量基因测序时代到来-多基因检测
• 降低检测成本
• 通量大,灵活
• 同时检测多种基因 • 基因的全部外显子检测
• 深度测序 –突变MRD的监 测
• 检测速度快
-
34
血液病的“基因扫描” -外显子捕获测序
-
35
TET2 SRSF2
NRAS
TP53
SF3B1 IDH1
CBL EZH2
KRAS
Ordered arrangement of multiple sets of DNA on solid support
-
14
病理诊断:
•鉴别诊断 •预后判断
不同的肿瘤形态相似 同一肿瘤形态不同
-
15
normal
lymphoma
CLL/SLL SMZL
MCL LPL
小B细胞淋巴瘤之间的鉴别诊断
正常核型: 伴FLT3-ITD突变 伴c-kit突变
31
基因突变分布以及检测层面的意义
髓系 白血病
MDS
淋系 白血病
MPN
单基因单位点检测
单基因所有位点检测
所有疾病相关基因 的所有位点检测
-
32
基因检测,目前临床主要采用 Sanger测序和/或者PCR检测方法
局限性: 1. 费用高 2. 通量低 3. 费人力 4. 周期长
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19
病理诊断:
•鉴别诊断 •预后判断
不同的肿瘤形态相似 同一肿瘤形态不同
-
20
M0
-
23
-
24
病理诊断:
•鉴别诊断 •预后判断
不同的肿瘤形态相似 同一肿瘤形态不同
同一肿瘤遗传背景不同 (肿瘤的异质性)
-
26
弥漫性大B细胞淋巴瘤 -Un无s法u治p愈e率r:v6i0s%ed analysis
易位
22
9
-
Der 22
t(9;22)(q34;q11) – CML
Der 9
11
传统的检测DNA改变的策略
细胞遗传学(筛选):
大插入/缺失, 扩增, 易位 (5 Mb)
一名习惯性流产妇女发生t(6;15) 染色体变异
原位杂交(选择):
大插入/缺失,扩增, 易位
乳腺癌细胞扩增Her2基因
-
12
分子诊断:检测DNA改变的策略
-
4
1. 诊断DLBCL
2. CD10, Bcl-6 and MUM-1 染色
3. 结果分析
CD10+
CD10BCL6+
生发中心细胞 (GC) 表型
MUM-1MUM-1+
免疫表型预测
Non-GC 表型
生发中心与非生发中心亚型
-
5
特殊检查
蛋白水平:
• 免疫组化 • 流式细胞学 • 免疫荧光/电镜 • 蛋白质组学
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9
不同个体的基因组中大 概0.4%的基因是CNV。
Hg: alpha Amylase:6-15 copies Alu序列 Fragile X syndrome
DNA水平上的改变 – 大的改变
缺失/插入
扩增
22q11.2 region – DiGeorge 综合征
17q21.1 (ERBB2) – 乳腺癌
57个基因分为3组: 生发中心B细胞样DLBCL
t(14;18)异位(bcl-2) 染色体2p上的c-ref扩增 活化的B细胞样DLBCL
NF-B的活化
3 型DLBCL
NEJM 2002. 346:1937-47 Blood 2002. 99: 2285-90 J Exp Med 2001. 194: 1861-74
分子水平:
• 染色体水平 • 核酸水平 • 基因组学、表观遗传学
-
6
遗传变异的类型
每条染色体的
*
*
两个拷贝
*
*
1
A
1
2
G
2
序列多态性
单核苷酸多态性 (SNP)
长度多态性
串联重复
-
7
串联重复的两种类型
小卫星 或
数目可变串联重复序列 (VNTR)
8 – 80 bp Repeats
微卫星 或
短串联重复序列 (STR)
-
分子生物学异常
正常核型伴: NMP1突变 或CEBPA突变而且无 FLT3-IDT t(8;21), t(15;17),inv(16) or t(16;16): 伴c-KIT突变
正常核型: 伴FLT3-ITD 突变 伴c-kit突变
30
AML中影响治疗和预后的突 变
风险级别
遗传学异常
预后良好
t(8;21) t(15;17) inv(16) or t(16;16)
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AML中影响治疗和预后的突 变
风险级别
遗传学异常
预后良好
t(8;21) t(15;17) inv(16) or t(16;16)
预后中等 预后不良
正常核型 +8 t(9:11) 其他未定义型
复杂核型 -5, 5q-, -7, 7q11q23: 不包括 t(9;11) inv(3), t(3;3) t(6;9) t(9;22)
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