丹参酮_A的提取与分离

致。因此可以断定其 樱红色针 状结晶 为丹参 酮 2 5 紫外分光 光度法
取少量样品用甲 醇溶解 ( 分析 纯 ) 并 稀释后 进行紫 外扫 描。用 UV - 1 型三用紫 外分析仪测 得丹参酮 收峰在 267 nm 处。结果见图 1 。 A 的 最大吸
图 1 紫外光谱图 2 6 高效液相 法 精密称量 1 mg 样品 , 用甲醇 ( 色谱纯 ) 溶于 5 m l的容量 瓶中定容 , 即得样品溶液。检 测波长 = 267 nm。流 动相为 甲醇 - 水 ( 85 15), 流速 : 1 000 m l/m in。结果见图 2 。
丹参为唇形 科植物 丹参 ( Salvia m iltiorrh iza Bge ) 的 干燥 根及根茎 , 为多年 生草 本植物。 主产于 四川、 安 徽、 江苏、 山 西、 河北等省。根茎 极短 , 顶端 有时 带有残 留茎 基。表 面棕 红色 或暗棕红 色 , 粗糙 , 有不 规则纵沟 , 常 呈鳞片 状剥落 , 味 微苦涩。丹参酮 A 具 有增 加冠脉 流 量 , 改善 心肌 功能 , 降 低血小板聚集的功能 , 临床上治疗冠心 病 , 心 肌梗死有效 , 此 外还具有保护红细胞不被破坏 等多种药理作用 [ 1] , 也是一种 新的有效的 细 胞内 脂质 过 氧化 物与 DNA 相 互作 用 的抑 制 剂 [ 2] 。丹参酮 A 具有多方面的药 理活性 , 国内外 的学者对 丹参的提取分离 以及 结构鉴 定进 行了大 量的 研究 工作。丹 参酮 的提取、 分离 方法比 较多 , 主要 有乙醇回 流法 , 渗漉 法 , 醇超声波法 , 二氧化碳 超临 界萃 取法 , 微波 提取 法等提 取技 术 [ 3] ; 氧化铝层析、 分段切割法 , 硅胶柱层析配合制 备型薄层 分离法和多次柱层析 , 大 孔吸 附树 脂法等 [ 4] ; 用 于检测 药材 中丹参酮 II A 质量的 方法 主要 有 : 薄 层层 析 , 紫外 分光 光度 法 , 薄层扫描法和 高效 液相层 析法。在 前人 工作的 基础 上 , 根据实验条件 , 设计了一套比较 简便的 丹参酮 IIA 的 提取与 分离方法。
参考文献 : [ 1 ] 梁勇 , 杨明, 袁淑兰 丹参酮药理作用 及临床应用研究 进展 [ J] 中草药 , 2000 , 31 ( 4) : 304 - 306 [ 2 ] 王庆伟 , 杨频 , 张 立伟 [ 3 ] 吴 立军 , 吴 继洲 384 [ 4 ] 宋小妹 , 唐志书 中 药化学成 分提取分 离与制备 [ M ] 北京 : 人 民卫生出版社 , 2004: 136- 138 丹参酮 的有 效分离 [ J] 山西 大学 学报 (自然科学版 ) , 1994 , 17( 3 ) : 294- 298
第 8 卷第 3 期 2010 年 9 月
延安大学学报 ( 医学科学版 ) Journal o fY anan U niversity (M ed Sc i)
Vo . l 8 No . 3 Sep . 2010
丹参酮
张
A 的提取与分离
迎, 李 萌
( 延安市药品检验所 , 陕西 延安 716000)
摘 要 : 目的 建立丹参中有效成分丹参酮 II A 的提取与分离方法。 方法 用乙醇 作为溶剂中
2 结果
2 1 水分测定 将称量 瓶置于干 燥箱中干燥 至恒重 , 精密称 重 w 0, 取少 量樱红色针状 结晶于称量瓶 , 精密称重 w1 , 置 于干燥箱 60 干燥至恒重后 , 精密称重 w 2, 含水量为 ( w 1 - w 2 ) /( w 1 - w 0 ), 经测定樱红色针状结晶 的含水量为 0 。 2 2 熔点测定 取少量樱红 色针状 结晶 于载玻 片上 进行熔 点测 定。测 得熔点为 199 0~ 201 0 。 2 3 浓硫酸显色 反应 取少量樱红色 针状 结晶 , 置于 试管 中 , 加 适量 无水 乙醇 溶解 , 滴加浓硫酸 , 颜色由鲜红色 变为绿色。 67
展开剂 中的 R f值 = 0 683 展开剂 中的 R f 值 = 0 680
( 2) 丹参酮 参酮
A 是热 敏物质 , 加 热时 很不稳 定 , 所以 , 实
展开剂 较高。
和展开 剂
中樱红色斑点的 比移值 Rf 基本一 A, 且 纯度
验过程中尽量 控制 温度 , 不宜 过高。且 应避 光保存 , 以 防丹 A 因见光或遇空气中的氧气而降解。 ( 3) 干法上柱拌样时 , 要混合均匀 , 遇到小块状固体必须 压碎。装柱时要轻轻敲击硅胶柱外 壁 , 保 证硅胶装柱 时密度 均匀一致 , 以达到较好的洗脱效果。 ( 4) 热水洗涤时 用玻璃 棒不断搅 拌 , 以加快 脂溶性 成分 的析出。过滤时 脂溶性 物质 附着于 滤纸 表面 , 应趁 热过 滤 , 及时更换滤纸。 ( 5) 分离单体时 采用二 次干法 上柱。第 一次上 柱时 , 洗 脱液流速比较快 , 主要为了除去部分杂 质。第二次上 柱时预 先在柱子底部装了一段 20 c m 左右 的硅胶 , 起到很好 的分离 效果 , 与湿法上柱相比较 , 缩短了 实验时间。
的脂溶性有效成分总丹参酮进行了提取 , 然后利用硅胶柱层析技术对总丹参酮进行了分离 , 得到了其中三种有效成分丹参酮 I 、 丹参 酮 II A 和隐丹参酮结晶。 结果 经浓硫酸显色反应和薄层色谱定性鉴定 ; 紫外光谱和高效液相法确定了丹参酮 II A 的纯度。 结论
此方法制得的丹参酮 II A 纯度较高 , 且简单易行 , 是适用于工业化生产的有效方法。 关键词 : 丹参 ; 丹参酮 II A; 提取 ; 分离 中图分类号 : R 284 2 文献标识码 : A 文章编号 : 1672- 2639 ( 2010 ) 03- 0067 - 02
1 材料与方法
1 1 仪器 F z- 102 微 型 植物 试 样 粉碎 机 ( 河 北黄 骅 市 新 兴电 器 厂 ) ; DHG - 9123A 型电热恒温鼓风干燥箱 ( 上海精 宏实验设 备有 限 公 司 ); HANGP I NG FA 2004 电 子 天平 ( 上 海 精 科 天 平 ) ; 760CRT 双光束紫外可见分光光度计 ( 棱光牌 ) ; X - 6 型 显微熔点测定仪 ( 北京 泰克仪器 有限公 司 ), 旋转 蒸发器 RE - 520( 上海亚荣 生化仪 器厂 ); SH B循环 水式 多用 真空 泵 ( 郑州长城科二贸有限公司 ); 数显 恒温水浴锅 HH - 2( 常 州国华电器 有 限 公司 ); KQ - 500DE 型数 控 超声 波 清洗 仪 ( 昆山市超声仪器有限公司 ); UV - 1 型三 用紫外 分析仪 ( 上 海顾村 电 光 仪 器 厂 ) ; HPLCPUM PK - 1001 ( BFRL ); UVDETECTORK - 2501( BFRL ) 。
1 2 试药 丹参饮片 ( 西安市药材站 ), 甲醇 ( 色谱 纯 ), 其它 均为分 析纯。 1 3 方法 将丹参药材 干燥 ( 60 , 4 h) , 粉 碎得 粗粉 , 乙 醇超 声提 取 ( 60 , 20 m in), 提取 液用纱 布过 滤 , 滤 液再 进行 抽滤 , 所 得滤液浓缩成浸膏 , 用热水洗 , 得脂溶性成 分 ( 总丹参酮 ), 此 成分用苯回流 6 h, 抽滤 , 滤 液减压 浓缩 得膏 状物质 , 再 用甲 醇溶解膏状物质与 层析硅 胶搅拌 混合 , 干法上 柱 ( 除 杂 ), 先 用氯仿洗脱 , 再用氯仿 - 甲醇 ( 8 2) 进行洗 脱。将所得 洗脱 液用薄层色谱法点 样观 察 , 展开剂 为纯 氯仿 , 直 到樱红 色点 消失为止 , 将所收集的洗脱液于圆底烧瓶 中减压蒸馏 并蒸干 溶剂 , 得到固体膏 状物。用 少量苯 溶解 固体 膏状物 , 取 已活 化的硅胶与之 拌样 , 混合 均匀 后 , 装柱。在 柱子底 下塞 一小 块棉花 , 将硅胶装高 20 c m 左 右 , 再将拌 好样 的硅 胶倒 入柱 中 , 进行干法上柱 ( 分 离 ) 。用 苯 : 乙酸 乙酯 ( 30 1) 洗脱 , 收 集深红色洗脱液 , 蒸干 , 用少量苯 溶解 , 放置 , 过滤 , 沉 淀用无 水乙醇重结晶 , 得樱红色针状结晶。
苯: 己烷: 甲醇 = 5 1 5 0 9 二氯甲烷: 己烷: 甲醇 = 10 0 2 0 1
、 中展开 , 取出 , 晾
图 2 H PCL 图
3 讨论
( 1) 实验在传统 的丹参 提取方法 上进行 改进 , 采用 乙醇 超声提取法 , 避免了因高温回流对丹参药 材中有效成 分的破 坏 , 缩短了提取时间 , 提高了提取 率。
2 4 薄层色谱 法 分别配制两种三循环系统 展开剂 , 进行薄层 层析。展开 剂 I : 苯 - 己烷 - 甲醇 ( 5 1 5 0 7) ; 展开剂 II : 二氯 甲烷 - 己 烷 - 甲醇 ( 10 0 2 0 1) 。将两 种展开 剂分 别置 于展开 缸中 饱和 30 m in。取少量樱红色针状结晶 , 溶 解于一定 量的无水 乙醇中 , 用毛细管分 别吸 取溶 液点 于硅 胶 板 ( GF254) 上 , 多 次点样 , 吹干溶剂后 , 分别置于 展开剂 干。结果有樱红色斑点呈现。
天然 药物化 学 [ M ]
人民 卫生出 版社 , 2003 :
[ 收稿日期
2010- 06- 05 ; 责任编辑
徐文梅 ]
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