MSC无血清培养基说明书

NutriStem® MSC XF Medium 间充质干细胞无血清培养基 使用说明
1. 培养基组分 产品名称 NutriStem® MSC XF Basal Medium 间充质干细胞无血清基础培养基 NutriStem® MSC XF Supplement 间充质干细胞无血清营养添加物 NutriStem® MSC XF Basal Medium 间充质干细胞无血清基础培养基 NutriStem® MSC XF Supplement 间充质干细胞无血清营养添加物 注意: 作为完全的，即用型的培养基，不需要额外的添加物。两种组分不单独销售。 2. 产品描述 NutriStem® MSC XF Medium是无血清、不含异源动物成分(Xeno-free) 的人类间充质干细 胞培养基，可促进多种来源的人类间充质干细胞的生长，如骨髓（BM-hMSC）、脂肪组织 （AT-hMSC）、脐带（UCM-hMSC）。NutriStem® MSC XF Medium可促进人类间充质干 细胞的长期生长，同时还能保持多向分化潜能。NutriStem® MSC XF Medium和MSC间充质 干细胞促贴壁试剂（货号: 05-752-1）共同使用，细胞贴壁及增殖效果更好。 3. 特点       无血清、不含异源动物成分：所有成分都是明确的，且同种来源（人），包括蛋白质； 不含抗生素； 能够培养不同来源的人类间充质干细胞； 维持人类间间充质干细胞的长期生长，保留类纤维原细胞形态； 极低的背景分化率； 维持间充质干细胞的自我更新及多向分化潜能，可分化为骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞。 货号 05-200-1A 05-201-1U 05-200-1B 05-201-1-06 规格 500 ml 3 ml 100 ml 0.6 ml 储存条件 4°C -20°C 4°C -20°C
4. hMSCs对NutriStem® MSC XF Medium的适应性 若之前使用血清培养法，转换至NutriStem® MSC XF Medium间充质干细胞无血清培养，可 能会面临细胞适应的问题，需要逐步适应，并优化培养方案，建议从原代开始使用。 注意：如同任何培养体系的转换，在新的培养体系下细胞会损失一部分并需要一定过程适应。
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5. 注意事项和免责声明 5.1 如果观察培养基中有可见的沉淀物，不能再使用 5.2 超过标签上的截止使用日期，不得再使用 5.3 所有组分均应避光保存 6. 完全即用型培养基的准备   冻存的NutriStem® MSC XF Supplement间充质干细胞无血清营养添加物需要在室温或 2-8°C解冻，避免重复冻融。 完全的NutriStem® MSC XF Medium：将0.6ml的NutriStem®间充质干细胞营养添加物 加进100ml的NutriStem®间充质干细胞基础培养基中（同样的，将3ml的NutriStem®间充质 干细胞营养添加物加到500ml的NutriStem®间充质干细胞基础培养基中），2-8°C避光保存， 混合完全的NutriStem® MSC XF Medium在2-8°C直到14天都是稳定的。 7. MSC贴壁试剂（货号: 05-752-1）的包被培养皿的准备工作 7.1 使用无菌的DPBS溶液（货号: 02-023-1，不含Ca2+ and Mg2+），将MSC促贴壁试剂稀释 100倍，用移液管轻轻搅拌混合； 7.2 用稀释过的MSC贴壁试剂涂层培养皿； 7.3 使用合适的量以涂层培养孔或板，使用量参照表1； 7.4 轻轻摇动培养皿，用保鲜膜包裹涂层的培养皿，然后在2-8°C孵育过夜； 7.5 或者在CO2培养箱（36-38°C）至少孵育30分钟； 7.6 接种前，用DPBS轻轻冲洗培养器皿。 表 1 涂层过程中贴壁试剂建议使用量 培养器皿 96 孔板 24 孔板 12 孔板 6 孔板 T25 瓶 注意： 1. 长时间用MSC贴壁试剂孵育(至72hr)不会降低细胞贴壁和扩散性能。 2. 涂层的培养皿需在无菌条件下2-8°C储存，需在一周内使用。 表面积 cm2/孔或瓶 0.3 1.9 3.8 9.4 25 稀释 100 倍后的 MSC 贴壁试 剂/孔或瓶 0.1 ml 0.40 ml 0.8 ml 2 ml 5.5 ml
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8. 培养hMSCs 8.1 复苏冻存的hMSCs 8.1.1 取5-10ml NutriStem® MSC XF Medium完全培养基，放入50ml的圆锥管中，37°C水 浴槽预热； 8.1.2 将一管冻存的hMSCs直接放在37°C水浴槽快速解冻，并轻微搅拌； 8.1.3 慢慢将细胞滴加到预热的培养基中； 8.1.4 常温下，细胞在300-400xg离心4-5分钟； 8.1.5 除去上清，然后用0.5-1ml的完全培养基重新悬浮细胞； 8.1.6 进行活细胞计数（如:台盼蓝拒染实验或XTT）； 8.1.7 加一定量的NutriStem® MSC XF Medium完全培养基； 8.1.8 将细胞转移到用MSC贴壁试剂包被过的培养皿中，接种密度需要计算（见表2）； 8.1.9 CO2培养箱孵育(36-38°C) 注意： 不建议直接离心解冻复苏之后的hMSCs。 在这种情况下， 最好跳过步骤4和5， 直接将解冻复苏的细胞加到MSC贴壁溶液涂层的培养皿里， 另外加一定量的NutriStem® MSC XF Medium完全培养基。 8.2 接种hMSCs NutriStem® MSC XF Medium适用于多种来源的hMSCs优化增殖。 MSC来源的多样性和捐赠者的不同会影响MSC增殖速率。为优化hMSCs在NutriStem® MSC XF Medium的增殖，建议接种浓度为5000-6000 cell/cm2（表2），然后每2-3天用新鲜的完 全的NutriStem® MSC XF Medium喂养细胞，当达到80%融合时(confluence -即细胞聚集生 长面积达到80%的培养皿面积)，进行传代。 注意： 下面的培养方案是基于使用间充质干细胞消化分离溶液(植物酵素)（货号：03-075-1）。另外， 也可以使用其他hMSC消化分离试剂，如间充质干细胞消化分离溶液(非酶法)（货号： 03-077-1）。在这种情况下，请按照相应的使用说明书进行操作。 接种说明书 8.2.1 开始前，将 MSC 消化分离试剂（货号：03-075-1）预热到室温； 8.2.2 移去培养皿中培养基，用不含 Ca, Mg 的 DPBS 浸洗一次； 8.2.3 将 1-3ml 的 MSC 消化分离试剂加入到 T25 培养瓶中（分离试剂加样量取决于培养面积 大小，以浸没细胞为宜）；
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