2.4 核酸的理化性质

核酸的理化性质

核酸的紫外吸收

Pyrimidine Purine

嘌呤和嘧啶环中含有共轭双键，对260nm左右波长的紫外光有较强的吸收

A260的应用

DNA 或RNA 的定量 1 判断核酸样品的纯度

2 50μg/ml 双链DNA

40μg/ml 单链DNA （或RNA ）

20μg/ml 寡核苷酸

DNA 纯品: A 260/A 280 = 1.8

RNA 纯品: A 260/A 280 = 2.0 A 260=1.0相当于

定义

方法

在某些理化因素作用下，DNA 双链解开、氢键断裂，这种现象称为DNA 的变性。 温度、pH 、离子强度等

DNA 变性的本质是双链间氢键的断裂

热变性

DNA的增色效应

增色效应

DNA变性时其溶液260nm处吸光度增加的现象

DNA的解链曲线

热变性解链曲线

如果在连续加热DNA的过

程中，以温度对A260值作

图，所得的曲线称为解链

曲线。

DNA 的Tm 值

50%的DNA 分子发生变性时的温度 Tm 热变性

Tm

通常将核酸加热变性过程中，紫外光吸收值达到最大增加值50%时的温度称为核酸的解链温度或融解温度(melting temperature, Tm )

DNA 的复性与分子杂交

DNA 复性(renaturation)的定义

减色效应

在适当条件下，变性DNA 的两条互补链重新配对，恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 DNA 复性时，其溶液OD 260降低。

DNA 的变性和复性

加热

缓慢冷却

热变性的DNA 经缓慢冷却后即可复性， 这一过程称为退火(annealing)

将热变性的DNA 骤然冷却至低温时，DNA 不可能复性

核酸分子杂交

◆不同来源的变性核酸，在复性时依照碱基互

补配对的原则，形成互补双链的过程称为核

酸分子杂交(hybridization)

◆杂交可以发生于DNA与DNA之间，也可以

发生于RNA与RNA之间和DNA与RNA之间

DNA 复性和杂交示意图

升温 缓慢降温

DNA1-DNA2 DNA1 DNA2 DNA2 DNA1 图a 图b 图c

核酸分子杂交的应用

常见的几种分子杂交

Southern 杂交（Southern bolting）:DNA杂交Northern 杂交（Northern bolting）:RNA杂交Western 杂交（Western bolting）:蛋白杂交

小结

1

核酸分子在260nm处有强烈的紫外吸收

2

核酸分子在一定条件下，可以变性和复性。3

变性的核酸可以复性或形成杂交双链

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