CpG-ODN的免疫刺激作用

CPG诱导PBMC杀伤靶细胞
1. 收集CPG活化的PBMC 2. 细胞毒性实验：效应细胞为CPG活化的
PBMC；靶细胞为CFSE预染的K562细胞。 对照组效应细胞为未经CPG活化的PBMC。 3. 效：靶＝20：1，混合培养2h。流式细胞术 检测靶细胞死亡率。
CPG诱导PBMC杀伤靶细胞
CFSE染色靶细胞
谢 谢!
对照组
加CPG-ODN组
CpG提高B细胞表面MHC-Ⅰ、 MHC-Ⅱ的表达
MHC
2500
2000
1500
表
达 1000
量
（ 500
）0
* *
**
MFI
对照 CpG2006 CpG2216
对照 CpG2006 CpG2216
MHC-Ⅰ
MHC-Ⅱ *：与对照组比较，P<0.05
活化B细胞诱导CTL
1. 负载了抗原的活化B细胞与淋巴细胞混合培 养(含IL-2的RPMI1640培养液).
对照组
加CPG-ODN组
加CPG-ODN组
CpG提高B细胞表面CD80、 CD86的表达
80
CD80 CD86
70
、 60
50
表 40
达 率
30
（ 20
%
） 10
0
* *
* *
对照 Cp2006 CpG2216
对照 CpG2006 CpG2216
CD80
CD86 *：与对照组比较，P<0.05
B细胞MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达
CPG提高PBMC中Th1 、Tc1 细胞百分率
16
*
14
12
ຫໍສະໝຸດ Baidu
10
8
6
4
2
0 Th1
*
Tc1
Th2
对照 CPG-ODN
*：与对照组比较，P<0.05
CPG刺激BPMC分泌细胞因子
80 70
*
60
50
40
30
20
10
0 IFN-γ
IL-2
IL-4
IL-10
对照组 CPG-ODN组
*：与对照组比较，P<0.05
M1
Marker All M1
% Gated 100.00 41.34
活化B细胞负载核心抗原
荧光显微镜观察B细胞负载HBcAg18-27肽
APC与T细胞作用机制
CPG对B细胞抗原递呈相关分子的 作用研究
1. CpG2006、2216由上海生物工程技 术服务有限公司合成，全硫代化修饰
2. 对照组为含10%FCS的RPMI1640＋ 外周血PBMC，细胞量107/孔，37℃、 5%CO2、48小时
TOLL受体
TOLL受体在血细胞中的表达
活化B细胞负载核心抗原
1. 磁珠分选B淋巴细胞 2. CPG活化B淋巴细胞 3. 核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC 4. 流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载
状况
磁珠分选B细胞
分选前B细胞 7.89%
分选后B细胞 89.6%
活化B细胞负载抗原肽
结论
1. CpG能够活化B细胞，对T细胞无明显的作用 2. CpG能够提高B细胞表面抗原递呈相关分子的表达 3. CPG诱导PBMC产生高水平的IFN-γ 4. CPG诱导淋巴细胞向Th1、Tc1分化 5. CPG增强PBMC对K562细胞的杀伤作用 6. 通过B细胞介导, CPG可诱导特异性CTL
1. 浓度为5μmol/ L 的CFSE （2羧基荧 光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液
2. 取对数生长期的靶细胞浓度108/ L 3. 细胞悬液与等体积CFSE 工作液混合 4. 37 ℃孵育10 min。 5. 离心洗涤两次后 6. 悬浮细胞备用
CFSE染色靶细胞
实验结果
CpG活化PBMC对K562细胞的杀伤作用(N=5)
CPG活化PBMC 对照组
16.85±5.14 % * 8.62±2.83 %
*：与对照组比较，P<0.05
CIK细胞杀伤靶细胞
CIK细胞杀伤靶细胞
研究背景
通过主动免疫、过继特异性免疫、 过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙 肝患者体内残存的HBV，达到治疗效 果。
研究背景
B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质， 同时具有CpG-ODN受体：TLR-9。本研究 探讨CpG-ODN诱导B淋巴细胞成为高效 APC，使之具有类似于树突状细胞功能 的可行性。
3. 实验组加入CpG2006或CpG2216， 终浓度均为1umol/mL，余同上
CpG提高淋巴细胞CD69表达
CD69
35
30
25
表 达
20
率 15
（
10
）
5
0
* *
%
对照 CpG2006 CpG2216
对照 CpG2006 CpG2216
T淋巴细胞
B淋巴细胞 *：与对照组比较，P<0.05
B细胞CD80、CD86表达
2. 收集细胞,以五聚体技术检测HBV特异性CTL. 3. 实验组特异性CTL为0.50±0.19%，对照组
为0.20±0.10%。
特异性CTL诱导
Pro5TM MHC Pentamers检测对照组和实验组HBcAg18-27抗原特异 性CTL（Q2-1区）。前者为对照组（未加APC），后者为实验组（加 APC）。