实验 柱色谱--亚甲基蓝与荧光黄的分离
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验
柱色谱
--亚甲基蓝与荧光黄的分离
一 实验目的
• 学习并掌握色谱法的原理及其应用。 • 学习并掌握柱色谱的实验操作技能。
二实验原理
• 色谱法亦称色层法，层析法等，是分离，纯 化和鉴定有机化合物的重要方法之一。 • 色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某 一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不 同，或其它亲和作用性能的差异，混合物的 溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配 等作用，从而将各组分分开。
三实验步骤及注意事项
• （8）当蓝色溶液收集完后，等柱内的70%乙醇 溶液恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，加入适 量2%氨水作为洗脱剂。打开二通活塞收集黄绿 色的荧光黄溶液，直到其完全被洗出。 • （9）用量筒分别量取所分离出来的亚甲基蓝和荧 光黄溶液的体积后，倒入指定的回收瓶中。 • （10） 分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后 倒置，用吸耳球从活塞口向管内挤压空气，将吸 附剂从柱顶挤压出。使用过的吸附剂倒入垃圾桶 里，切勿倒入水槽，以免堵塞水槽。
三实验步骤及注意事项
• （4）加完吸附剂后，在吸附剂上再盖一张直 径大小合适的小滤纸。 • （5）当溶剂的液面刚好流至滤纸面时关闭二 通活塞，立即用移液管加入1mL亚甲基蓝和荧 光黄的乙醇混合液，尽量免待分离混合液粘附 在柱的内壁上。
三实验步骤及注意事项
• （6）打开二通活塞，等柱内的溶剂恰好流 到滤纸面时，关闭二通活塞，向柱内加入 70%乙醇，打开二通活塞进行洗脱。 • （7）用锥形瓶收集蓝色的亚甲基蓝溶液。 【洗脱时切勿使溶剂流干！ 】
柱色谱
• 柱色谱常用的有吸附 色谱和分配色谱类。 前者常用氧化铝或硅 胶为吸附剂。后者以 硅胶，硅藻土和纤维 素为支持剂，以吸收 大量的液体为固定相
柱色谱
• 当加入的洗脱剂流下时， 由于不同化合物吸附能 力不同，因而以不同的 速度沿柱向下流动，继 续洗脱时，吸附能力弱 的组分随溶剂首先流出。 在连续洗脱过程中，不 同组分或不同色带就能 分别收集，从而达到分 离纯化的目的。
色谱分离法的分类 （按操作条件的不同）
• 气相色谱 • 液相色谱 • 柱色谱 • 薄层色谱 • 纸色谱 • 流动相：气体、液体、超临界流体 • 固定相：液体、固体
色谱分离法的分类 （按组分在固定相中的作用原理不同）
色谱法的应用
• 色谱法在有机化学中的应用主要包括以下 几个方面： • （1）分离混合物 • （2）精致提纯化合物 • （3）利用比移值（Rf）鉴定化合物 • (4)跟踪反应进程
柱色谱
• 1 吸附剂 • 常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙， 活性炭 • 或纤维素粉。 • 选择吸附剂的首要条件：不与被分离物或展开剂 发生化学反应。 • 吸附能力与以下几点有关： • （1）吸附剂颗粒大小 • （2）吸附剂含水量
源自文库
柱色谱
• • • • 2 溶剂 通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活 性等来考虑。 先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中，从柱 顶流入柱中，依次增大溶剂的极性，将不同化合物依 次洗脱。 • 常用洗脱剂的极性： • 石油醚＜ 环己烷＜ 四氯化碳＜ 甲苯＜ 苯＜ 二氯甲 烷＜ 氯仿＜ 乙醚＜ 乙酸乙酯＜ 丙酮＜ 乙醇＜甲醇 ＜ 水＜ 乙酸
三实验步骤及注意事项
• （1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小 团脱脂棉花， • 注意松紧要适度。然后在棉花上铺一层粗硅 胶或石英砂。 • （2）将色谱柱垂直固定在铁架台上，往柱内 加适量70%乙 • 醇溶液，打开活塞，赶走气泡。
三实验步骤及注意事项
• （3）再向柱中倒入适量70%乙醇溶液，打开活塞， 控制滴 • 速为1滴／秒，用小锥型瓶承接，同时通过漏斗慢慢装 • 入5gAl2O3，使其逐渐沉入底部。 • 【在装吸附剂的过程中，应用质软的物体如试管夹、 • 吸耳球等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排除 • 气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面。】
柱色谱
--亚甲基蓝与荧光黄的分离
一 实验目的
• 学习并掌握色谱法的原理及其应用。 • 学习并掌握柱色谱的实验操作技能。
二实验原理
• 色谱法亦称色层法，层析法等，是分离，纯 化和鉴定有机化合物的重要方法之一。 • 色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某 一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不 同，或其它亲和作用性能的差异，混合物的 溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配 等作用，从而将各组分分开。
三实验步骤及注意事项
• （8）当蓝色溶液收集完后，等柱内的70%乙醇 溶液恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，加入适 量2%氨水作为洗脱剂。打开二通活塞收集黄绿 色的荧光黄溶液，直到其完全被洗出。 • （9）用量筒分别量取所分离出来的亚甲基蓝和荧 光黄溶液的体积后，倒入指定的回收瓶中。 • （10） 分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后 倒置，用吸耳球从活塞口向管内挤压空气，将吸 附剂从柱顶挤压出。使用过的吸附剂倒入垃圾桶 里，切勿倒入水槽，以免堵塞水槽。
三实验步骤及注意事项
• （4）加完吸附剂后，在吸附剂上再盖一张直 径大小合适的小滤纸。 • （5）当溶剂的液面刚好流至滤纸面时关闭二 通活塞，立即用移液管加入1mL亚甲基蓝和荧 光黄的乙醇混合液，尽量免待分离混合液粘附 在柱的内壁上。
三实验步骤及注意事项
• （6）打开二通活塞，等柱内的溶剂恰好流 到滤纸面时，关闭二通活塞，向柱内加入 70%乙醇，打开二通活塞进行洗脱。 • （7）用锥形瓶收集蓝色的亚甲基蓝溶液。 【洗脱时切勿使溶剂流干！ 】
柱色谱
• 柱色谱常用的有吸附 色谱和分配色谱类。 前者常用氧化铝或硅 胶为吸附剂。后者以 硅胶，硅藻土和纤维 素为支持剂，以吸收 大量的液体为固定相
柱色谱
• 当加入的洗脱剂流下时， 由于不同化合物吸附能 力不同，因而以不同的 速度沿柱向下流动，继 续洗脱时，吸附能力弱 的组分随溶剂首先流出。 在连续洗脱过程中，不 同组分或不同色带就能 分别收集，从而达到分 离纯化的目的。
色谱分离法的分类 （按操作条件的不同）
• 气相色谱 • 液相色谱 • 柱色谱 • 薄层色谱 • 纸色谱 • 流动相：气体、液体、超临界流体 • 固定相：液体、固体
色谱分离法的分类 （按组分在固定相中的作用原理不同）
色谱法的应用
• 色谱法在有机化学中的应用主要包括以下 几个方面： • （1）分离混合物 • （2）精致提纯化合物 • （3）利用比移值（Rf）鉴定化合物 • (4)跟踪反应进程
柱色谱
• 1 吸附剂 • 常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙， 活性炭 • 或纤维素粉。 • 选择吸附剂的首要条件：不与被分离物或展开剂 发生化学反应。 • 吸附能力与以下几点有关： • （1）吸附剂颗粒大小 • （2）吸附剂含水量
源自文库
柱色谱
• • • • 2 溶剂 通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活 性等来考虑。 先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中，从柱 顶流入柱中，依次增大溶剂的极性，将不同化合物依 次洗脱。 • 常用洗脱剂的极性： • 石油醚＜ 环己烷＜ 四氯化碳＜ 甲苯＜ 苯＜ 二氯甲 烷＜ 氯仿＜ 乙醚＜ 乙酸乙酯＜ 丙酮＜ 乙醇＜甲醇 ＜ 水＜ 乙酸
三实验步骤及注意事项
• （1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小 团脱脂棉花， • 注意松紧要适度。然后在棉花上铺一层粗硅 胶或石英砂。 • （2）将色谱柱垂直固定在铁架台上，往柱内 加适量70%乙 • 醇溶液，打开活塞，赶走气泡。
三实验步骤及注意事项
• （3）再向柱中倒入适量70%乙醇溶液，打开活塞， 控制滴 • 速为1滴／秒，用小锥型瓶承接，同时通过漏斗慢慢装 • 入5gAl2O3，使其逐渐沉入底部。 • 【在装吸附剂的过程中，应用质软的物体如试管夹、 • 吸耳球等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排除 • 气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面。】