FS-2荧光分光光度计波长扫描模式使用指南

测试模式

波长扫描

波长扫描模式是用来测试发射，激发和同步波谱

波长扫描的测试流程：

1，在FluoroMaster Plus文件夹里点击“Wave Scan”来打开波长扫描软件

2，检查发射光栅运行完毕

3，在工具栏里点击新建“”，将出现下面的窗口，输入文件名并点击保存

4，创建新的实验对话框将显示如下。输入一个标题,客户和用户ID,然后单击OK。

▶信息窗口:

输入简短的信息关于这个实验或样品。

▶Title:

输入标题的实验。

▶Customer:

客户的输入信息

▶User ID:

应该设置用户ID来执行测量。

5，将会显示下面的窗口

6，设置测量条件

▶点击打开后加载之前使用的测试条件方案

▶保存当前测量设置,可以另存为

▶使用当前测量设置作为默认的设置,保存所有参数为默认方法

7，点击开始

在测试期间如果荧光强度超过65000会出现警告：

这种情况下，在工具栏，有一个图标，点击后可以阻止高荧光强度对PMT的伤害

8，测试完成后将会显示下面的信息，并且点击“OK”

9，光谱结果和数据都将会显示

10，点击可以打印出数据

测试设置

在波扫描模式下,发射,兴奋,和同步光谱测量数据是可用的。

1．发射光谱的测量

测量发射光谱,在扫描模式下选择“Emission”

A．General

a) Data Mode（数据模式）

按以下设置数据模式：

- Fluorescence:

测量荧光频谱，当样品接触到激发光束的时候光谱被测量出来

- Luminescence:

测量发光光谱如生物发光,化学发光。样品没有接触激发光束时发光光谱被测量。

- Phosphorescence:

磷光光谱测量。当磷光模式被选中时,接触时间(s)选项卡和磷光延迟(ms)选项

就被创建了。

- Light Exposure Time(s)

计算样品接触到激发光的时间

- Phosphorescence Delay(ms) :

在激发快门关闭之后测试开始之前来延迟时间。在点击Start键,样品接触

激发光的设置在发射开始波长和激发快门关闭。然后,在延迟的测量为设置时间,磷光强度测量。然后,测量磷光下一个波长以相同的顺序。

b) Auto Zero

在起始波长处设置荧光强度为“0”

c) Corrected Spectra

修正谱函数是用来补偿光谱的失真,可能是由于不同的反射,吸光系数、灵敏度等系统的每个组件作为PMT、光栅、镜子、透镜等。

d) Start Delay (s)

设置延迟时间测试样品(单位:秒)。

e) Repeat Number

设置重复数字测量。

f) Repeat Interval Time (m)

设置重复测量之间的间隔时间当重复号码设置超过2(单位:分钟)。

g) PMT Voltage (Volt)

输入PMT电压从100到1000伏特。更高的PMT电压设置可以提高强度,但它可能减少PMT寿命。如果强度超过65000项,PMT可能损坏或PMT寿命可能减少。

选择合适的PMT电压。

h) Scan Speed (nm/min)

选择扫描速度:1、10、60、300、600、1200、2400、6000 纳米/分钟,自动或用户定义的模式。随着扫描速度下降,信噪比率上升,但这需要更多的时间来测量。平均数量和发射间隔(nm)决心自动根据设置扫描速度。如果扫描速度设置“自动”,发射间隔设置1海里。如果扫描种子设置“用户定义”,发射间

隔和平均数量根据需要设置。

i) Integration Time (ms)

进入PMT积分时间:0.02到1250ms。积分时间设置的越长强度越高,但它会降低PMT寿命。如果强度超过65000项,PMT可能损坏或PMT寿命可能减少。

输入适当的PMT积分时间。

*扫描速度和积分时间组合

●如果在“扫描速度”中选择“自动”,扫描时间间隔设置为1纳米。

●如果在“扫描速度”中选择“用户定义”,积分时间、平均数字,扫描时间

间隔可以根据需要设置。

●小积分时间可能导致数据丢失，为了得到波长扫描模式和3 d扫描模式的

精确数据,集成超过20 ms是必要的。

●扫描速度取决于电脑和光谱的通信速率可以稍微有所不同。

j) Response Time (s)

确定数据处理速度得到测量光谱。在以下值中选择响应时

间:0.02,0.1,0.2,0.5,1.0,2.0,4.0和8.0秒。

k) Average Number

在单一波长处设置平均时间。只有扫描速度设置为“用户自定义”,平均数字

可以被设置为所需的。平均数量的增加,信噪比率会变得很高,但扫描速度变得

缓慢。

l) EX Slit (nm)

选择狭缝宽度对励磁单色仪:0.5、1、2.5、5、10、20纳米。随着狭缝宽度减

小,谱带宽度也减小,强度降低。每个狭缝宽度意味着FWHM (全宽半最大)的激

发或发射光谱。

m) EM Slit (nm)同EX Slit

n) EX Filter (nm)

选择过滤器激发单色仪。例过滤器是用来去除二阶辐射效应从激发光谱。短

的波长截止滤波器可以选择以下之一:空气(无过滤器),320 nm、435 nm和530

nm(其他过滤器是可选的)。

o) EM Filter (nm)同EX Filter

p) Apply

在进入实验参数,点击申请制作系统被应用到输入参数和准备好开始测量。B. Wave Setup