脂肪酸甲酯化和定量分析方法

脂肪酸甲酯化和定量分析方法

三氟化硼甲酯化法

1 试剂

BF3－甲醇溶液

正己烷

2 两步法

（1）苯—石油醚（1：1）1ml溶解脂肪，加14％BF3－甲醇溶液2ml，水浴100℃，维持35min（主要甲酯化PC、PE、PI等），水浴前需充氮气保护

（2）取出，加入2ml苯＋2ml甲醇（主要融解胆固醇酯，游离脂肪酸），继续加热35min，同样需充氮气保护

3 提取脂肪酸甲酯

1～2ml正己烷，加蒸馏水平衡离心管重。充分振荡后离心，重复两次。3000转/min， 10min 4 加内标及浓缩

加入内标物（0.1g脂肪+0.3ml内标物），旋转蒸发浓缩样品。

注意:（1）1ml试剂融解4～16mg脂肪，本试验中最大体积6ml，脂肪不超过0.1g （2）水浴甲酯化时，特富龙管不能倾斜（否则会丢失甲醇，增加BF3浓度，从而破坏PUFA）

（3）加热时间过长，将导致PUFA被破坏

（4）适用于脂肪和冷冻干燥样品的分析

参考文献：Morrison W R and Smith L M, 1964 j.lipid research 5:600-608

酸法更适合于游离脂肪酸的分析

1％硫酸－甲醇酯化法

此方法适用于游离脂肪酸和脂肪及水分含量较高的样品进行直接分析（寇秀颖于国萍2005 脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究食品研究与开发 26（2）：46～48）

1 称取油脂或脂肪酸50mg，加入1％硫酸－甲醇2ml于80℃水浴60min

2 冷却后加入2ml正己烷，再加蒸馏水5ml，离心，后取出上清夜，再用1ml正己烷重复提取脂肪酸甲酯，再次离心，后合并上清夜，待测。

3 加内标及浓缩

加入内标物0.2～0.3ml（10mg/ml，0.1g脂肪加内标0.3ml），旋转蒸发至1ml左右

2.5mol硫酸－甲醇化法

称取油脂或脂肪酸50mg，加入2.5mol/L硫酸－甲醇1.0ml，于70℃水浴30min，加入2ml正己烷提取甲酯化产物，取出上清液，再次加入1ml正己烷洗涤，上清夜合并后待测参考文献同上