HPLC法测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍的含量

HPLC法测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍的含量

目的通过HPLC方法测定二甲双胍在盐酸二甲双胍片剂中的含量。方法在色谱条件：选择Hypersil CN （200 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，流动相：乙腈：0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调至pH=3.5）（30：70），检测波长：232 nm，进样量10 μl，1.0 ml/min为流速，柱温为30℃条件下进行检测。结果二甲双胍在 1.14 ug/ml～57.00 ug/ml范围内线性关系良好，线性方程为：Y=46657X-341531（r=0.9993），平均回收率为100.12%，RSD为1.4%。结论采用高效液相色谱方法，可有效评估盐酸二甲双胍片剂中二甲双胍的含量，本法简单、灵敏度高、结果准确。

标签：HPLC法；盐酸二甲双胍；含量

二甲双胍是治疗2型糖尿病的首选药物，该药可通过多种作用机制控制空腹及餐后血糖，且能改善患者血脂代谢[1]，目前主要用于饮食和运动控制血糖不满意的2型糖尿病患者，尤其是胰高血糖素和肥胖患者[2-5]。此类药物的质量控制对于临床用药安全至关重要，本文由此出发，考察高效液相法在盐酸二甲双胍片剂含量测定中的应用，结果报道如下。

1材料与方法

1.1仪器与试药

岛津LC-2010CHT 型高效液相色谱仪；超声波清洗器；乙腈（色谱纯，霍尼韦尔贸易（上海）有限公司）；磷酸（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）、磷酸二氢钾（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；盐酸二甲双胍对照品（中国药品生物制品检定所，批号：151113-160117）；盐酸二甲双胍片（华润双鹤药业股份有限公司，国药准字H11020541，规格：0.25 g，批号为：151223、160316、160721）。

1.2方法

1.2.1方法学验证

1.2.1.1色谱条件色谱柱选择Agilent C18 （150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：乙腈-0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（加磷酸调至pH=3.5）（30∶70），检测波长：232 nm，进样量10 μl，1.0 ml/min流速，柱温为室温（30℃）。

1.2.1.2溶液的制备①供试品溶液的制备：精密称取20颗盐酸二甲双胍片，研细后混匀，采用十万分位天平精密称定0.100 g供试品，转移入50 ml容量瓶中，加入20 ml流动相后，加盖超声至澄清，放置室温后加流动相至对应刻度后，用0.25 um有机滤膜过滤，取续滤液待用。②对照品溶液的制备：精密称定10.19 mg盐酸二甲双胍对照品，转移入20 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀

至澄清即得。

1.2.1.3高效液相色谱法①精密度试验：于“1.2.1.1”项色谱条件下，取对照品溶液重复进样（n=6），进样量均为10 ul，测定每次峰面积，结合所得数据计算RSD，结果RSD=1.3%<2.0%，达到药典规定[6]，提示本法精密度良好。②重复性试验：取同批次二甲双胍胶囊6份，根据“1.2.1.2①”项下供试品制备方法制备供试品溶液，采用“1.2.1.1” 項色谱条件，每份样品进样10ul，采集每次峰面积，结合所得数据计算RSD，结果RSD=1.2%<2.0%，达到药典规定，提示本法重复性良好。③稳定性试验：于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h分别取“1.2.1.2①”项供试品与“1.2.1.2②”项对照品溶液，采用“1.2.1.1” 项色谱条件，测定不同时间点的色谱峰面积，结合所得峰面积计算不同时间供试品浓度变化，结果RSD=1.2%<2.0%，达到药典规定，提示对照品及供试品溶液在24 h内较为稳定。

④回收率考察：采用5 ml移液管精密量取5 ml供试液（n=3），保存至3个锥形瓶内，依次加盐酸二甲双胍对照品2.17 mg、5.46 mg和10.19 mg，根据“1.2.1.2①”项步骤制备供试品溶液，进样10 ul，测定对应样品的峰面积，结合所得浓度计算回收率，所得回收率分别为：100.18%、100.22%和99.97%，平均100.12%，RSD 1.4%，达到药典规定[3]。

1.2.1.4线性关系考察采用对应刻度移液管分别量取“1.2.1.2②”下对照品溶液0.20 ml、0.50 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml于10 ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用0.25 um有机滤膜过滤，取对应续滤液即为系列标准溶液。采用“1.2.1.1”项色谱条件，进样10 ul，测定系列标准溶液色谱峰面积，并以峰面积为横坐标和浓度纵坐标绘制标准曲线，得到方程为：Y =46657X-341531（r=0.9993），提示，盐酸二甲双胍浓度在1.14ug/ml～57.00ug/ml范围内与峰面积存在良好的线性关系。

1.2.2样品中盐酸二甲双胍含量测定采用“1.2.1.1项”下色谱条件，分别测定盐酸二甲双胍对照品溶液与3批供试品溶液含量，并通过自身对照法对供试品中相关含量进行测定。

2结果

结果显示，HPLC测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍平均含量（与标识量比较）为（101.55±0.47）%，见表1。

3讨论

盐酸二甲双胍（C4H12ClN5）属双胍类降糖药物，目前在糖尿病疾病控制中应用广泛，其含量监测一直备受医药工作者所重视。本文选择232 nm为检测波长，其一是因此波段吸收系数大，吸光度强，其二是因此波段经色谱分离后，无杂峰干扰，检测准确；而选择缓冲盐作为流动相则是因为本药物属盐类物质[7-8]，在色谱柱分配过程中多存在多种离子形式共存，而存在双头或拖尾现象，加入缓冲盐，可让其pH稳定，保持酸碱平衡状态，进而利于测量准确，经分析可知，上述检测条件下，C4H12ClN5色谱峰形良好，分离度高。

通过本文结果我们可知，HPLC法准确性高、精密度好、重现性和相关性均符合相关要求，HPLC法通过色谱柱的分离作用，将盐酸二甲双胍制备过程中的有关物质、杂质等干扰有效分离，故而能方便的定位主要成分含量，从而更好的用于此类物质的质量控制，确保用药安全。

参考文献：

[1]邵雪力，侯森.高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片的含量[J].中国中医药咨讯，2011，03（12）：116-117.

[2]王长丹，臧恒昌，左艳红.二甲双胍格列吡嗪片中盐酸二甲双胍含量测定方法改进[J].药学研究，2015，34（10）：574-576.

[3]孟梅，马维青，陶存武，等.肥胖初发2型糖尿病患者早期降糖治疗对血胰高血糖素、C肽的影响[J].中日友好医院学报，2013，27（1）：21-24.

[4]李晗，高宏凯，胥阳，等.胃转流术后非肥胖2型糖尿病患者血清胰高血糖素样肽-1浓度变化的研究[J].中华临床医师杂志：电子版，2012，06（7）：119-121.

[5]李晗，高宏凯，胥阳，等.胃转流术后非肥胖2型糖尿病患者血清胰高血糖素样肽-1浓度变化的研究[J].中华临床医师杂志：电子版，2012，06（7）：119-121.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2010.附录XIX194.

[7]周平，童卉琦，白金，等.RP-HPLC 测定盐酸二甲双胍肠溶片的含量[J].中国执业药师，2014，11（12）：34-36.

[8]宋新康，曾玉梅.高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍缓释片中盐酸二甲双胍的含量和释放度[J].中国医院用药评价与分析，2016，16（6）：801-803.编辑/高章利