高中生物《原生质体的分离》最新PPT课件

4、原生质体活力测定和计数
形态识别：形态完整、富含细胞质、颜色新 鲜的正常球形，放入低渗溶液中，可正常膨大。
FDA(荧光素二乙酸)染色法：FDA本身无极 性，无荧光，可自由出入细胞。但在活细胞中 经过酯酶的催化，转化为荧光素。荧光素是荧 光极性物质，不能自由出入细胞，在细胞内积 累，而死细胞则不产生荧光素，不发出荧光。
2、原生质体分离
分离方法分为机械分离法和酶解分离法。 机械分离法：使细胞处于高渗溶液环境下，待其发生轻微质
壁分离，原生质体收缩成球形后，磨碎组织，使原生质体从伤口 处流出。同时改变溶液浓度，使原生质体复原。
酶解分离法：植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质 组成，利用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶降解细胞壁成分，除 去细胞壁，即可得到原生质体。
原生质体的分离，融合，培养及复壁
细胞
细胞是多层次非线性的复杂结构体系 细胞具有高度复杂性和组织性
细胞是物质（结构）、能量与信息过程精巧结合的综合体 细胞完成各种化学反应； 细胞需要和利用能量； 细胞参与大量机械活动； 细胞对刺激作出反应；
细胞是高度有序的，具有自组装能力与自组织体系 细胞能进行自我调控； 繁殖和传留后代；
原生质体存活率＝活的原生质体数/观察的原生质体总数
4、原生质体活力测定和计数
产量测定一般用血球计数板法。 让滴出的原生质悬液凭毛细管作用吸入计数室内，刚好 充满计数室为宜(图8－3)。静置2min后计数，先用低倍镜观 察，不均匀则抛弃。计数时用虹彩、集光器、反光镜等调 节入射光角度和强度，认清计数室位置。 采用“由上至下，由左至右，顺序如弓”的顺序，对压 边线细胞采取“数上不数下，数左不数右”的原则(图8～4) 。
4、原生质体活力测定和计数
伊文斯蓝染色法：完整细胞膜的排斥，没活力或者受损的细胞显 蓝色，有活力的细胞不吸收染料为无色。 CFW(酚藏花红)染色法：红色的为死的原生质体，活的原生质体 不着色。 观察胞质环流法：显微镜下观察具有胞质环流者为代谢旺盛的原 生质体。 氧电极法：用氧电极检测放氧速率来代表呼吸代谢，光合作用活 力。
5、影响原生质体数量和活力的因素
（1）供试材料及预处理方法。根据不同材料的不同性质，确定 相应的预处理方式。 （2）离心条件：离心次数、离心速度、离心时间。 （3）酶解条件：酶质量、组合、浓度、pH、渗透压、光照和温 度、持续时间等。
5、影响原生质体数量和活力的因素
（3） 酶解条件：酶质量、组合、渗透压、pH、浓度、光照和温 度、持续时间等。
易摄取DNA，染色体，细胞器，病毒等外源遗传物物快质速。繁殖、植物
2、开辟杂种新途径：是获得细胞无性系和选育远突缘变遗体传的重优组良、起转
基因以及品种改良
始材料，还可通过诱导形成杂种细胞。
和创造新品种等方
3、定向培养：将纯化后的原生质体转移到适当面条具件有下广，阔使的原应生用
质体适合于遗传转化、细胞融合、生理研究、体前胚景发。生、器官
3、原生质体纯化
原生质体纯化方法主要有离心沉淀法、漂浮法、界面法 等，其原理都是利用原生质体和杂质比重不同而进行分层。
沉降法利用比重原理，在一定的渗透压溶液内低速离心，使 完整的原生质体沉于试管底部。
漂浮法用较原生质体比重大的渗透压较高的溶液，使原生质 体漂浮于溶液表面。
界面法用两种比重不同的溶液，使健康和完整的原生质体处 于两液相的界面之中。
材料的预处理可以改变细胞的生理状态，增加细胞膜的强 度，达到提高分离的效率和减少原生质体损伤等。如在酶解前 预先发生质壁分离，因为此时原生质体收缩封闭了胞间连丝， 避免了细胞内容物的流失。
1、材料选择和预处理
用黑暗处理、低温处理和不同光质照射等方法，可提高 某些材料原生质体的产量和活力。 ☆ 龙胆试管苗的叶片用4℃处理较好。 ☆ 甘蔗植株在黑暗下培养12 h后分离的原生质体才能分裂。 ☆ 马铃薯试管苗叶片在黑暗下处理48 h后分离原生质体才能 获得高产量。
细胞是： • 构成有机体的基本单位 • 具有自我复制的能力，是有机体生长发育的基础；(有机体都是由细胞构成） • 代谢与功能的基本单位，具有完整的代谢和调节体系，不同的细胞执行不同
的功能； • 遗传的基本单位，具有发育的全能性； • 没有细胞就没有完整的生命
生物分类系统
三界系统 Haeckel 1894
2、原生质体分离
原生质体分离方法优缺点比较
优缺点 分离方法
优点
缺点
避免酶制剂对原生
机械分离法 质体的破坏作用
获得量较少；能够用此法产生原 生质体的植物种类受到限制。 （细胞较大，高度液泡化）
酶解分离法
Biblioteka Baidu
操作简单，获得量大，商 酶、品酶过制氧剂化均物含酶有以核及酸酚酶类、物蛋质白，
适用广泛
会影响所获原生质体的活力
原生生物
植物 动物
五界系统 Whittaker 1959
原核生物
原生生物 真菌 植物 动物
六界系统
Woese 1977 真细菌 古细菌 原生生物 真菌 植物 动物
三类生物 Woese 1990
细菌 古细菌
真核生物
原生质体定义
《辞海生物学分册》定义原生质：任何细胞和非细胞形态的 生活物质都是由具有相似的基本组成成分和特性的“原生质” 构成。
发生等操作。
实验原理介绍
1、材料的选择和预处理 5、影响原生质体数量和活力的因素
2、原生质体分离 3、原生质体纯化
6、原生质体培养方法
人
教
7、影响原生质体培养的因素 版
4、原生质体活力测定和计数 8、原生质体融合再生过程 选 修
三
1、材料选择和预处理
起始材料及生理状态对原生质体的制备和其活力有很大影 响。叶片可以大量获取并且能得到比较均一的原生质体，为最 佳材料。此外，也会选用花期短的花瓣、根尖、茎尖、嫩叶及 对数生长期的愈伤组织为实验材料。
原生质体一词来源于原生质，即由质膜包围的裸露细胞，又 称原生质球 。
植物细胞：脱去细胞壁、获得的裸露细胞，即其原生质体。 动物细胞：一个动物细胞就是一小团原生质体。
Sheen lab提取拟南芥原生质体 暴露于5%NaCl溶液中的发生质壁分离的植物细胞
原生质体作用
1、遗传转化的理想受体：由于没有细胞壁，原原生生质质体体可培相养对在容植