淀粉总量检测试剂盒

Megazyme淀粉总量检测试剂盒

产品编号：K-TSTA（100次）

(淀粉葡糖苷酶/α-淀粉酶方法)

AOAC法996.11 /AACC法76.13改进版

1.简介

淀粉测定方法分为酸水解法和酶分析法。酸水解只能应用于纯淀粉样品。酶分析方法在前处理步骤，淀粉凝胶化、液化和糊化，糊精水解成葡萄糖、葡萄糖测定步骤等方面存在不同。AACC 76-11法采用淀粉在高压蒸汽灭菌锅中及含水的条件下凝胶化，并用淀粉葡糖苷酶将淀粉转化为葡萄糖，再测定葡萄糖含量。采用AACC 76-11法会导致许多样品和材料中（包括高直链淀粉玉米淀粉和谷物制品）淀粉含量检测结果偏低。目前，许多方法采用在淀粉凝胶化结束后立即加入耐热α-淀粉酶处理。对于难以凝胶化的样品如高直链淀粉玉米淀粉，用氢氧化钠或DMSO处理。在膳食纤维的测定方法中为确保淀粉完全溶解，Englyst和Cumming（1988）加入了淀粉脱支化酶，普鲁兰酶。

为了满足极端样品中总淀粉含量定量测定的需要，Megazyme公司研发出一种使用耐热α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶的淀粉总量检测试剂盒。该方法已被AOAC和AACC采用。

近来，我们将检测方法进行了改进，使耐热α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶可以在相同的pH(pH 5.0)下进行孵育，这样简化了测定步骤，并将麦芽酮糖生成的可能性降到最低。

Megazyme淀粉总量试剂盒可测定大部分食品、饲料、植物和谷物制品（天然或加工过的）。对于大部分样品（如小麦粉），样品中的淀粉在孵育中（大约100℃，并加入耐热α-淀粉酶）会完全溶解。

含有大量抗性淀粉的样品（如高直链玉米淀粉），需用2M KOH或热DMSO进行预溶解。含有可溶性淀粉或麦芽糊精的样品，不需要用耐热α-淀粉酶处理。

2.产品性能

●特异性：可用于测定α-葡聚糖（包括淀粉、糖原、植物糖原和非抗性麦芽糊精）。

●灵敏度：最小吸光度差异为0.10吸光度单位。这相当于当样品体积为1.00 mL时，D-葡萄糖的浓度

为1.0mg/L或淀粉浓度为0.9 mg/L。

●检测限：2.0 mg D-葡萄糖（1.8 mg淀粉）/L（在最大样品体积为1.00 mL，吸光度差异为0.020

时得到）。

●检测范围：5-100 ug D-葡萄糖，重复检测同一样品溶液,其吸光度值会有0.005-0.010吸光度单位的

差异，这相当于样品体积为1.00 mL时，样品溶液中D-葡萄糖浓度0.05-1.0 mg/L。如果样品经过稀释，计算结果时需要乘以相应的稀释系数(F)，如果在样品制备阶段，样品称量时，如10g/L，可能会产生0.02 -0.05 g/100 g 的差异。

3.检测原理

耐热α-淀粉酶将淀粉水解为可溶性有支链和无支链的麦芽糊精(1)

如果需要（如含大量抗性淀粉的样品），可向样品中加入的2M KOH 并搅拌，在4℃下使抗性淀粉预溶解，然后用醋酸钠缓冲液中和，再用α-淀粉酶处理(2)。也可在100℃下，用的DMSO 溶解。

淀粉葡糖苷酶（AMG ）将麦芽糊精定量水解成D-葡萄糖(3)

D-葡萄糖被氧化成D-葡萄酸盐，并释放一摩尔H 2O 2，再用过氧化物酶催化H 2O 2反应，产生的昆亚胺染料含量用比色法测定。

如果样品中含高水平的D-葡萄糖和麦芽糊精，可在测定前用含水乙醇（80% v/v ）处理。一个样品可以在70分钟完成。2小时内可以完成20个样品检测。 4.试剂盒组成

(1) 淀粉 + H 2O

麦芽糊精

(α-淀粉酶，pH7.0或5.0，100℃)

(5) 2H 2O 2+对羟基苯甲酸+ 4-氨基安替比林 昆亚胺染料+ 4 H 2O

(过氧化物酶)

(4) D-葡萄糖+O 2+ H 2O

D-葡萄糖酸盐 + H 2O 2

(葡萄糖氧化酶)

(3) 麦芽糊精

D-葡萄糖

(AMG)

(2) 抗性淀粉 + H 2O

麦芽糊精

(KOH 再中和 +α-淀粉酶)

5.试剂溶液/悬浮液的制备

1)瓶1：用30 mL 100 mM醋酸钠缓冲液（pH 5.0，试剂盒中没有提供，制备方法见6）稀释1.0

mL瓶1中的内容物。稀释的酶溶液要冷冻保存。可以分装于聚丙烯管中，-20℃保存，在使用

过程中尽可能保持低温。-20℃保存，稳定性>3年。

注：如果样品根据AOAC官方方法996.11（案例b），此酶需用MOPS缓冲液稀释（50 mM, pH

7.0；制备方法见6）。

2)瓶2：瓶2中的产品可直接使用。该溶液有黏性，因此应用容积式移液器分装。4℃保存，稳定

性>3年。

3)瓶3：用蒸馏水稀释瓶3（GOPOD试剂缓冲液）至1L，即为溶液3，立即使用。

注：如果GOPOD 试剂缓冲液保存于-20℃，可能会形成结晶盐，当缓冲液用蒸馏水稀释至1L

时，结晶盐会完全溶解；此浓缩缓冲液含有叠氮化钠（0.4%W/V），请注意。

4)瓶4: 取20mL溶液3溶解瓶4中的产品，全部转移至装有剩余溶液3的瓶子中，混匀（~1L）。

用铝箔封盖瓶子以遮光保存，即为葡萄糖测定试剂（GOPOD试剂），在2-5℃可以保存3个月，

在-20℃下可以保存一年。如果-20℃储存时，应分装后再冻存。如果是新鲜制备的试剂，应是

浅黄色或浅粉色。在4℃储存2-3个月会变成深粉色。当以蒸馏水为对照时，该溶液的吸光度应

小于0.05。

5)瓶5&6：瓶5或6中的产品可直接使用。室温下稳定性>5年。

6.其他试剂制备(试剂盒不提供)

试剂1 醋酸钠缓冲液(100 mM, pH 5.0) 加氯化钙(5 mM)

1)加5.8 mL冰醋酸（1.05g/mL）至900 mL蒸馏水中。滴加1M氢氧化钠溶液（4g/100mL）

调节pH值至5.0（约需要30mL）。4℃保存稳定性约2个月。

2)加入0.74g二水氯化钙并溶解。定容至1L，4℃保存，稳定性约6个月。

3)可加入叠氮化钠增加此缓冲液的稳定性（0.2g叠氮化钠/L缓冲液）。室温保存稳定性约2年。

注: pH调节完毕后，再加叠氮化钠。叠氮化钠在酸化条件下会释放有毒气体。

试剂2 醋酸钠缓冲液(1.2M, pH 3.8)

加69.6mL的冰醋酸（1.05g/mL）至800 mL蒸馏水中。滴加4M氢氧化钠溶液调节pH值至3.8，用蒸馏水调节体积至1L，室温保存稳定性约12个月。

试剂3 氢氧化钾溶液（2M）

加入112.2g KOH至900mL去离子水中，搅拌溶解。调节体积至1L。密闭容器中保存。室温保存稳定性>2年。

试剂4 MOPS 缓冲液(50 mM, pH 7.0) 加氯化钙(5 mM) 和叠氮化钠(0.02 % w/v)，只有在样品制备案例（b）的检测中需要此缓冲液。

用900 mL蒸馏水溶解11.55 g MOPS (钠盐，Sigma 货号M-9381)，用1 M (10 % v/v) HCl (大约需要17 mL) 将溶液的pH调至7.0。加0.74 g 二水氯化钙和0.2 g 叠氮化钠并溶解。定容至1 L。

4°C保存，稳定性为6个月。

试剂5 醋酸钠缓冲液(200 mM, pH 4.5) 加叠氮化钠(0.02 % w/v) ，只有在样品制备案例（b）的检测中需要此缓冲液。

将11.6 mL 冰醋酸(1.05 g/mL)加入900 mL 蒸馏水中。滴加1 M(4 g/100 mL)氢氧化钠溶液（大约需要60mL）将pH调至4.5 。加0.2 g 叠氮化钠，溶解。定容至1 L。4°C保存，稳定性为6个月。