动物细胞培养和核移植技术
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12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂 就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。 13、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？ 将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后分瓶继续培养，
让细胞继续增殖。这样的过程叫做传代培养
14、如何理解原代培养和传代培养？ 上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养， 之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养
动物 细胞 工程 常用 技术
动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体
强调 其中动物细胞培养技术是
其他动物细胞工程技术的基础
(一）动物细胞培养
阅读44——47页第一段 思考回答下列问题 ： （与植物组织培养对比）
（1）动物细胞培养液成分 ？ （2）动物细胞培养过程？
（3）原代培养与传代培养、 细胞株与细胞系的区别？
▪ 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细
胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培
养，称为传代培养。
细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，
大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种
传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞
状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养 条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。
遗传物质 培养代数
细胞株和细胞系的区别：
细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的 特点，失去接触抑制，容易传代培养。
原代培养与传代培养的区别
原代培养： 分装之前，10代以前
传代培养： 分装后继续培养，10代以后
3.动物细胞培养条件：
1、无菌、无毒的环境
补充合成培养基 中缺乏的物质
（添加一定量的抗生素
定保期证更细换胞培顺养利液的
先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理 5、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质 是什么成份？ 胰蛋白酶水解蛋白质
细胞间的成份是蛋白质
６、细胞膜的主要化学成份是什么？ 蛋白质和磷脂 ７、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 能 ８、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散 成单个细胞要注意什么问题呢？ 注意时间的控制 ９、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？
不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白 酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。
１０、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼 龄动物的组织或器官，请解释原因？
胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛
11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？
易于培养细胞贴壁，进行生长增殖
胞遗传信息的单核
3、原理：细胞膜的流动性
细胞。
物理法：离心、振动、电激
4、诱导方式 化学法：聚乙二醇（PEG)
生物法：灭活的病毒
5、过程：与植物原生质体融合原理相同，方法类似。
动物细胞A 动物细胞B
（膜融合、质融合）
诱导，融合
2个完整的杂
有丝分裂（核融合）交细胞AB
❖ 细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核
（4）动物细胞培养的应用？
动物胚胎或幼龄动物的组
织、器官（取材）
剪碎？
胰蛋白酶 或胶原蛋白酶
动物组织细胞间隙中含有 （分解细胞间的蛋白质）
一定量的弹性纤维等蛋白单个细胞
质，将细胞网络起来形成 具有一定弹性和韧性的组
加培养液
织和器官。
细胞悬液
遗传物质 未改变
贴壁生长
接触抑制10代细胞 细胞株
原代培养
2.如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细 胞系？
随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖
细胞 悬浮 液
细胞株
细胞系遗传物质改变
10代 细胞
50代 细胞
无限传 代
原代培养
传代培养
多数组织细胞固定在表面
生长和分裂。
有关概念:
▪ 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细
胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代 细胞培养。
植物组织培养 动物细胞培养
原理
植物细胞的全能性
培养基性质 固体培养基
培养基特有 蔗糖、植物激素 成分
培养结果
植物体或组织
细胞增殖 液体培养基 葡萄糖、动物血清
细Hale Waihona Puke Baidu株、细胞系
培养目的
快速繁殖、培育无 病毒植株等
获得细胞 或细胞分泌蛋白
4、应用
▪ 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体）
思考
1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有 什么不同？
植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，
不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合； 动物细胞融合是两个体细胞直接融合。
诱导融合方法不同：动物细胞诱导融合所用的方法比植 物体细胞杂交多一类灭活的病毒诱导；
▪ 作为基因工程中的受体细胞 ▪ 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，
判断某种物质的毒性
▪ 用于生理、病理、药理等方面的研究， 为治疗和预防疾病提供理论依据
巩固
1、植物组织培养过程要将组织分散成单个细胞吗？ 没有 2、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞吗？ 是 3、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖 4、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？
50代细胞 传代培养
遗传物质 细胞系
已改变
无限传代
动物细胞培养不 能最终培养成生 物体
.动物细胞生长特性：
▪ 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，
称为细胞贴壁。 要求：
培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴 附。 细胞的接触抑制：
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞 就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑 制。
▪ 培养液和培养器具无菌处理 2、营养
生长增殖
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）
3、温度和PH
培养基的不同是动
36.5+（-）0.5度, 7.2物-7细.4胞培养和植物
4、气体环境：
组织培养最重要的 区别
O2和CO2（95%空气和5%
CO2
）与植物培养基
相比其特点?
液体培养基 含有动物血清
请同学们阅读课本P52动物细胞融合内容 并结合图2—23
问题：什么是动物细胞融合？它相当
于植物体细胞杂交过程的哪一步？它们的 过程、基本原理、诱导融合方法和意义是 否相同？
动物细胞融合（细胞杂交）
1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个
细胞的过程。
融合后形成的具有
2、结果：形成单核的杂交细胞— 原来两个或多个细
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂 就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。 13、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？ 将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后分瓶继续培养，
让细胞继续增殖。这样的过程叫做传代培养
14、如何理解原代培养和传代培养？ 上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养， 之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养
动物 细胞 工程 常用 技术
动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体
强调 其中动物细胞培养技术是
其他动物细胞工程技术的基础
(一）动物细胞培养
阅读44——47页第一段 思考回答下列问题 ： （与植物组织培养对比）
（1）动物细胞培养液成分 ？ （2）动物细胞培养过程？
（3）原代培养与传代培养、 细胞株与细胞系的区别？
▪ 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细
胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培
养，称为传代培养。
细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，
大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种
传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞
状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养 条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。
遗传物质 培养代数
细胞株和细胞系的区别：
细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的 特点，失去接触抑制，容易传代培养。
原代培养与传代培养的区别
原代培养： 分装之前，10代以前
传代培养： 分装后继续培养，10代以后
3.动物细胞培养条件：
1、无菌、无毒的环境
补充合成培养基 中缺乏的物质
（添加一定量的抗生素
定保期证更细换胞培顺养利液的
先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理 5、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质 是什么成份？ 胰蛋白酶水解蛋白质
细胞间的成份是蛋白质
６、细胞膜的主要化学成份是什么？ 蛋白质和磷脂 ７、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 能 ８、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散 成单个细胞要注意什么问题呢？ 注意时间的控制 ９、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？
不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白 酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。
１０、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼 龄动物的组织或器官，请解释原因？
胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛
11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？
易于培养细胞贴壁，进行生长增殖
胞遗传信息的单核
3、原理：细胞膜的流动性
细胞。
物理法：离心、振动、电激
4、诱导方式 化学法：聚乙二醇（PEG)
生物法：灭活的病毒
5、过程：与植物原生质体融合原理相同，方法类似。
动物细胞A 动物细胞B
（膜融合、质融合）
诱导，融合
2个完整的杂
有丝分裂（核融合）交细胞AB
❖ 细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核
（4）动物细胞培养的应用？
动物胚胎或幼龄动物的组
织、器官（取材）
剪碎？
胰蛋白酶 或胶原蛋白酶
动物组织细胞间隙中含有 （分解细胞间的蛋白质）
一定量的弹性纤维等蛋白单个细胞
质，将细胞网络起来形成 具有一定弹性和韧性的组
加培养液
织和器官。
细胞悬液
遗传物质 未改变
贴壁生长
接触抑制10代细胞 细胞株
原代培养
2.如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细 胞系？
随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖
细胞 悬浮 液
细胞株
细胞系遗传物质改变
10代 细胞
50代 细胞
无限传 代
原代培养
传代培养
多数组织细胞固定在表面
生长和分裂。
有关概念:
▪ 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细
胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代 细胞培养。
植物组织培养 动物细胞培养
原理
植物细胞的全能性
培养基性质 固体培养基
培养基特有 蔗糖、植物激素 成分
培养结果
植物体或组织
细胞增殖 液体培养基 葡萄糖、动物血清
细Hale Waihona Puke Baidu株、细胞系
培养目的
快速繁殖、培育无 病毒植株等
获得细胞 或细胞分泌蛋白
4、应用
▪ 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体）
思考
1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有 什么不同？
植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，
不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合； 动物细胞融合是两个体细胞直接融合。
诱导融合方法不同：动物细胞诱导融合所用的方法比植 物体细胞杂交多一类灭活的病毒诱导；
▪ 作为基因工程中的受体细胞 ▪ 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，
判断某种物质的毒性
▪ 用于生理、病理、药理等方面的研究， 为治疗和预防疾病提供理论依据
巩固
1、植物组织培养过程要将组织分散成单个细胞吗？ 没有 2、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞吗？ 是 3、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖 4、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？
50代细胞 传代培养
遗传物质 细胞系
已改变
无限传代
动物细胞培养不 能最终培养成生 物体
.动物细胞生长特性：
▪ 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，
称为细胞贴壁。 要求：
培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴 附。 细胞的接触抑制：
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞 就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑 制。
▪ 培养液和培养器具无菌处理 2、营养
生长增殖
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）
3、温度和PH
培养基的不同是动
36.5+（-）0.5度, 7.2物-7细.4胞培养和植物
4、气体环境：
组织培养最重要的 区别
O2和CO2（95%空气和5%
CO2
）与植物培养基
相比其特点?
液体培养基 含有动物血清
请同学们阅读课本P52动物细胞融合内容 并结合图2—23
问题：什么是动物细胞融合？它相当
于植物体细胞杂交过程的哪一步？它们的 过程、基本原理、诱导融合方法和意义是 否相同？
动物细胞融合（细胞杂交）
1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个
细胞的过程。
融合后形成的具有
2、结果：形成单核的杂交细胞— 原来两个或多个细