大肠杆菌培养基的优化及发酵罐操作

分离单菌落
涂布
稀释梯度为0.1 0.01 0.001 0.0001 0.00001 0.000001 0.0000001 0.0000001
吸取0.2ml进行平板涂布
以上操作Βιβλιοθήκη Baidu在超净台下完成
四区划线
接种环蘸取母液在酒精灯的无菌区 打开平板 盖画第一区，第一区尽量 小一些。 灼烧接种环，旋转平板90度画第二 区，第二区一定要与第一区有接触。 画第三区同第二区。 画第四区时可以不灼烧接种环，直 接划线
300ml培养基
250ml制平板
40ml制种子
5ml斜面
高压灭菌
• 盛有250ml培养基的锥形瓶 • 盛有40ml培养基的锥形瓶 • 10支试管：两支盛有5ml培养基的试管、一支盛有10ml蒸
馏水、七支盛有9ml蒸馏水，塞好棉塞。 • 7支1ml的移液管 • 14个平板 • 7个涂布器 • 全部用报纸包好放入高压蒸汽锅中灭菌30min
大肠杆菌培养基的优化及摇瓶种 子制备
第五组 小组长：陈晓 小组成员：张立燕 王竞竞 王怡丹 支 甜甜 张静 王健
目录
LB培养基配方
LB培养基的制备
生长优曲化线接种量 制作详细过程分离单菌落
操作过程及注意事项
观察结果
操作中的失误
种子制备
观察结果及分析
操作中得失误
培养基的优化
摇瓶种子的制备
培养基的优化
次操作在超净台下进行
• 将制作好的平板放入恒温箱中培养24至48 小时，温度控制在37摄氏度。
观察结果
种子制备
• 挑取单菌落至种子瓶 • 放入摇床上培养12小时，设置温度为37摄
氏度，转速为180r/min。
操作中得失误
平板未刷洗干净直接用报纸包好灭菌， 导致平板上有污垢影响培养基的质量
生长曲线
谢谢观赏
4% 1.6ml
8% 3.2ml
• 将配置好的种子瓶放置在摇床上培养12至 24小时，设置摇床转速为180r/min，温度 为37摄氏度
• 注意：在放置时，不要将摇瓶卡的太紧， 防止摇瓶在摇床运转过程中破裂。
操作中得失误
用100ml的锥形瓶盛装种子液
摇瓶种子制备
LB培养基的制备
• 配置300ml培养基 • Nacl 3g • 蛋白胨 1.5g • 酵母浸粉 3g • NaOH调PH为7.4
LB培养基配方
10g/L
5g/L
10g/L
根据需要
加入2%的琼 脂
优化接种量
1% 2% 4% 6%
操作过程及注意事项
准备四个250mL的锥形瓶，分别加入40mL的蒸馏水、 0.4gNacl、0.2g酵母浸粉、0.4g蛋白胨。用NaOH调PH为7.4
接种量
1%
菌液体积 0.4ml
2% 0.8ml