致病菌检验

致病菌检验

9.2检测方法

9.2.1有害物质的检测方法

9.2.1.1产品中砷含量的检测

方法：按照GB/T 5009.76—2003中的第一法：二乙氨基二硫代甲酸银比色法

原理：在碘化钾和氯化亚锡存在下，将样液中的高价砷还原为三价砷，三价砷与锌粒和酸产生的新生态氢作用，生成砷化氢气体，经乙酸铅棉花除去硫化氢干扰后，被溶于三乙醇胺一三氯甲烷中或吡啶中的二乙氨基二硫代甲酸银溶液吸收

并作用，生成紫红色络和物，与标准比较定量。试剂

硝酸

硫酸【（1+1）、（1mol/L）、65％浓硫酸】盐酸

20％氢氧化钠溶液

15％碘化钾溶液，贮于棕色瓶内（临用前配制）40%氯化亚锡溶液：称取20g氯化亚锡

（Sncl2·2H20)，溶于50ml盐酸

乙酸铅棉花：将脱脂棉浸于10％乙酸铅溶液中，2h后取出晾干

无砷金属锌

三氯甲烷

吸收液A：称取25g二乙氨基二硫代甲酸银，研碎后用适量三氯甲烷溶解。加人1.0mL一三乙醇胺，再用三氯甲烷稀释至100mL。静置后过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内备用。

酚酞：1％乙醇溶液。

仪器分光光度计。

试样处理

干灰化法：本法适合于含有有机物的试样。

取5.0g试样于瓷坩埚中，加10ml 15％硝酸镁溶液，加入1g氧化镁粉末，混匀，浸泡4h，于低温或水浴上蒸干，用小火加热置炭化完全，将坩埚移至高温炉中，在550℃以下灼烧至灰化完全，冷却后取出，加适量水湿润灰分，加人酚酞溶液数滴，再缓缓加人盐酸（(1十1)溶液至酚酞红色褪去，然后将溶液移人50mL容量瓶中（必要时过滤），用少量水洗涤增祸3次，洗液并人容量瓶中，加水至刻度，混匀。每10mL试样液相当于1. 0 g试样。取相同量的氧化镁、硝酸镁，按上述方法做试剂空白试验。

测定

定量测定

吸取25 ml.（或适量）试样液及同量的试剂空白液，分别置于砷发生瓶A 中，补加硫酸至总量为5m l ， 加水至50mL ，混匀。

向试样液和试剂空白液中各加3mL15％碘化钾溶液，混匀，放置5 min ，再分别加1mL40%氯化亚锡溶液，混匀，放置15min 后，各加人5g 无砷金属锌，立即塞上装有乙酸铅棉花的导气管，并使管B 的尖端插人盛有5.0 ml 吸收液A 吸收管中，室温反应1h ，取下吸收管，用三氯甲烷（吸收液A ）将吸收液体积补充到5.0 mL 。用1 cm 比色杯，于515 nm 波长（吸收液A ）处，用零管调节仪器零点，测其吸光度值。砷的标准曲线

y = 0.114x + 0.0320.000

0.050

0.100

0.1500.2000.250

0.300

0.00.5 1.0 1.5 2.0 2.5

砷含量（mg/kg）吸光度值A 砷标准曲线线性 (砷标准曲线)

根据以上标准曲线，由y=0.114x+0.032和试样液、空白液的吸光度值，可得样品中砷的含量。

9.2.1.2产品中铅含量的测定

方法：按照GB/T 5009.75—2003食品添加剂中铅的测定

原理：试样经处理加人柠檬酸铵、氰化钾和盐酸轻胺等，消除铁、铜、锌等离子干扰，在pH8.5～9.0时，铅离子与双硫腙生成红色络合物，用三氯甲烷提取，与标准系列比较做限量试验或定量试验。

试剂

硝酸

硫酸

氨水(1+1):如含铅，应用全玻璃蒸馏器重蒸馏。盐酸

三氯甲烷:不应含氧化物。

酚红指示液:1g/L乙醇溶液。

柠檬酸氢二铵;500g/L溶液

称取100g柠檬酸氢二铵，溶于100mL水中，加2滴酚红指示液，加氨水(1+1)调节pH至8.5～9.0(由黄变红，再多加2滴)，用双硫腙三氯甲烷溶液提取数次，每次10mL～20mL，至三氯甲烷层绿色不变为止，弃去三氯甲烷层，再用三氯甲烷洗涤两次，每次5mL，弃去三氯甲烷层，加水

稀释至200mL

盐酸羟胺:200g/L溶液。

称取20g盐酸羟胺，加40mL水溶解，加2滴酚红指示液，加氨水(1+1)调节pH至8.5～9.0(由黄变红，再多加2滴)，用双硫腙三氯甲烷溶液提取数次，每次10mL～20mL，至三抓甲烷层绿色不变为止，再用三氯甲烷洗两次，每次5mL，弃去三氯甲烷层，水层加盐酸(1+1)呈酸性，加水至100mL.

氰化钾:100g/L溶液（配置过程应在通风柜中进行）。

二苯基硫巴腙(双硫腙):0.05%三氯甲烷溶液，保存于冰箱中，必要时按下述方法纯化。称取0.5g研细的双硫腙，溶于50mL三氯甲烷中，如有残渣，可用滤纸过滤于250mL分液漏斗中，用氨水(1+99)提取三次，每次100mL，将提取液用棉花过滤至500mL分液漏斗中，用盐酸(1+1)调至酸性，将沉淀出的双硫腙用200,200,100mL三氯甲烷提取三次，合并三氛甲烷层为双硫腙储备溶液。

双硫腙使用液:吸取1.0mL双硫储备溶液，加9mL三抓甲烷，混匀。用1c m比色杯，以三氯甲

烷调节零点，于波长510nm处测吸光度(A)，用式(1)算出配制100mL双硫腺使用液(70%透光率)所需双硫腙储备溶液的毫升数(V)。

仪器

分光光度计

125mL分液漏斗

250mL三角烧瓶。

试样处理

干法消解:本法适用于适合含有有机物的试样。

称取5.0g试样于瓷坩埚中，加人适量硫酸湿润试样，小心炭化后，加2mL硝酸和5滴硫酸，小心加热，直到白色烟雾挥尽，移人高温炉中，于550℃灰化完全。冷后取出。加1mL硝酸(1+1)溶液，加热使灰分溶解，将试样液转移到50 mL 容量瓶中(必要时过滤)，并用少量水洗涤坩埚，洗液一并移人容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。每10mL溶液相当于1.0g试样。

取一坩埚，按上述方法做试剂空白试验。

测定

定量测定