肠道致病菌检验简述

三、沙门氏菌食物中毒
（一）、引起食物中毒最常见的沙门氏菌：
鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌
（二）、易引起沙门氏菌中毒的食品 肉、蛋、乳类食品
行业关注：美国两种花生酱含沙门氏菌
(三)、中毒原因
1、食用病畜禽的肉制品食品 2、病畜禽、带菌人和动物使食品受污染 3、用不洁净水外理食品
（四）、临床病状（所致病菌）
（三）、生化反应
1 、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺 氏菌外，均不发酵乳糖。 2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3 、不产生 H2S ，不分解尿素， V-P试验阴性， 不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。
（四）、抗原结构
1、抗原构成： O抗原： 群特异性抗原：A、B、C、D K抗原：除B群外，一般有K抗原
甘露醇 －
+
鸟氨酸 脱羧酶 -
A
B
1～6 1a、1b、2a、 x、y变种 2b、3a、3b 3c、4a、4b 1 ～ 15 1
鲍 氏 菌 宋内氏菌
C D
+ +
＋
葡萄糖+
甘露醇乳糖甘露醇+ 乳糖+
靛基质-
靛基质+
靛基质-
靛基质+
靛基质-
痢疾志贺 氏菌1、3、 4、5、6、 9、10型
痢疾志 贺氏菌 2、7、 8型
二、志贺氏菌的致病性与食物中毒
（一）流行病学
传染源
• 食物、病人、粪便、苍蝇等
（二）志贺氏菌的致病性 致病因素： 侵袭力、菌体内毒素、外毒素
（二）临床症状
A、急性细菌性痢疾： • 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾： • 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。
三、微生物检验
一、概况 （一）沙门氏菌的发现与食物中毒 （二）沙门氏菌的命名 根据所致疾病命名 根据菌的发现地区命名 以发现者的名字命名 （三）沙门氏菌的抵抗力 60 ℃ 30′可杀死
（四）沙门氏菌的分类地位及定义
1、地位：是肠杆菌科、埃希氏菌族、沙门氏 菌属中的细菌 2、定义 是肠杆菌科中形态和培养特征，生化反应及 抗原结构相似，被O1噬菌体裂解的一群革兰 氏阴性杆菌。
（一）检验步骤（程序） 检样→样品处理→增菌培养→ SS 、 EMB平板分离培养→初步生化鉴定→最 后血清学鉴定→报告
（二）检验操作要点
志贺氏菌在常温中生存的时间较短，应尽快进 行试验。 • 如24h内不能检验，样品应在冰箱内 • 长时间不能检验，放在低温冰箱内。
5 、沙门氏菌哪几个菌型具有 Vi 抗原， Vi 抗原对 O 抗 原血清涟试验有何影响，对含Vi抗原菌，如何做O 抗原血清学试验。 6 、沙门氏菌在 SS 平板， TSI 培养基上生长的现象如 何，说明其原理。 7 、分离纯化后怎样选用最少的生化试验方法初步鉴 定检验菌是否是沙门氏菌属的细菌。 8、如何进行沙门氏菌的血清学试验。
三、抗原类型
O抗原 H抗原 K抗原 也称菌体抗原，细胞壁脂肪糖，耐热100℃不 被破坏 也称鞭毛抗原，鞭毛蛋白，不耐热，60℃ 30′可破坏 也称表面抗原（荚膜抗原），多糖，具有阻抑 O抗原发生凝集的现象，加热60℃30′可消除 抑阻作用
菌毛抗原
四、 致病性
（一）、致病物质 1、内毒素：能引起机体发热，白细胞减少，低血糖，血 压降低，严重者休克。 2、外毒素：对小肠粘膜细胞具有物殊毒害作用，引起腹 泻。
1、肠热病：伤寒与副伤寒病，为慢性发热的菌血病。 由伤寒与副伤寒菌引起，潜伏期7~20天 2、急性肠胃类：主要症状：头痛、发热、恶心、呕吐、 腹泻、出冷汗、及全身不适，病程2~3天 3、败血病：高烧、寒战、厌食、局部发炎、由猪霍乱沙 门氏菌等引起
四、微生物检验
（一）、基本步骤（程序） 检样→增菌（前增菌）→分离培养→生化 试验初步鉴定→血清学反应最后鉴定→报告
3、H抗原（鞭毛抗原）
耐热性差：60℃15′或酒精处理可破坏 沙门氏H抗原有两种： 第 1 相：特异相，用英文小写字母表示 a 、 b 、 c……z z1~z55 第 2 相：非特异相，用阿拉伯数字表示 1 、 2 、 3…… 其 中也有用小写字母a、n、x等表示。
4、表面抗原：
沙门氏菌有三种：Vi、M、5抗原、K抗原 Vi抗原位于菌体的最表层，包围了O抗原，可阻碍O抗原的血清 学凝集试验。破坏Vi抗原：60℃ 30′，100 ℃ 5′ 含有Vi 抗原的沙门氏菌： 伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌
2、志贺氏菌的分群与血清型
志贺氏菌分为四群： A群（痢疾志贺氏菌）：1~10型 B群（福氏志贺氏菌）：1~6型+X、Y两个变种， C群（鲍氏志贺氏菌 ）：1~15型 D群（宋内氏志贺氏菌） ：1个型
志贺氏菌Biblioteka Baidu抗原的分类
菌 名
血 清 分 类
生 化 特 性
群 志贺氏菌
福 氏 菌
型 1 ～ 10
亚 型
（3）、典型沙门氏菌的五项生化反应及其检验的利用
A、典型五项生化反应：A1 H2S（+） 靛基质（-） PH7.2尿素酶（-） KCN（-） 赖氨酸脱羧E（+）
B、利用五项生化反应鉴定沙门氏菌的最简单方案 a、对于H2S阳性菌，利用五项生化反应试验可判别沙 门氏菌和柠檬酸杆菌。 b、对于H2S阴性菌，查到B1时即： H2S（-） 靛基质（-） PH7.2尿素酶（-） KCN（-） 赖氨酸脱羧E（+），补做ONPE试验，可判定沙门 氏菌属和埃希氏菌属（ ONPE （ - ）为沙门氏菌， ONPE（+）大肠艾希氏菌
5、血清学试验（最后鉴定）
（1）、沙门氏菌诊断血清的种类： 10种组合血清：主要用于伤寒和副伤寒沙门氏菌鉴 定 26种组合血清：常见致病菌的定群与分型 57 种组合血清：常见定型，初步鉴定 A—F 群以外 的菌型 144种组合血清：全套装
（2）、血清学检验步骤
• 抗原准备→ → A—F多价血清检验（判定是否是 沙门氏菌）→ →群特异性抗体血清（如O2、O4、 O3 、 O7 、 O8 、 O9 、 O10 、 O11 （判定 O 群别） → →O单因子血清检查 → →H因子血清检查（分型） → →报告
二、生物学特性
（一）、形态与染色： 革兰氏染色阴性，无荚膜，无芽胞，多数 有鞭毛，有动力，短小杆菌。 （二）、培养特性 1 、 需 氧 或 兼 性 厌 氧 ， 最 适 温 度 37℃ ， PH7.2~7.4。
(沙门氏菌（红色）侵入人体细胞
2、对营养要求不高，在普通培养基生长良好， 37 ℃，24h，能形成菌落中等大小，直径2～ 3mm，圆形或卵形，表面光滑湿润，无色半 透明，边缘整齐的菌落 3 、在液体培养基中，呈均匀混浊性生长，无 菌膜。
福氏6型， 鲍氏1、2、 3、4、5、 6、8、10、 12、14型
福氏痢疾菌 （1、2、3、4、 5型）鲍氏5、 宋氏志 7、9、11、13、 贺氏菌 15型
3、属内外抗原关系
（1）群内抗原关系： A群：2与10型，具有密切关系 C群：1与4和11型，10与11相关 B群：群抗原是B群各型之间的共同抗原 （2）群间抗原关系： C群17型与A群3型相关 C群18型与A群11型相关
第三节、志贺氏菌的检验
一、生物学特性 （一）、形态与染色 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛
2~3um*0.5~0.7um
（二）、培养特性
1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH7.2~7.4 2 、在普通琼脂和 SS 平板上，能形成圆形、微凸、 光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小 的菌落 3 、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁 平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。 4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
1、前增菌：用无选择性的培养基使处于濒死状态的 M 恢复活力; 2、选择性增菌：使沙门氏菌优势繁殖，基它细菌变到 抑制; 3、选择性平板分离培养：分离出所需的细菌; 4、生化试验：鉴定分离出来的细菌是否符合所检项目 的细菌; 5、血清学鉴定：进一步鉴定。
（二）、检验操作关键点
1、增菌：使待检菌复壮，抑制杂菌生长，提高检出率。 前增菌：用于加工过的食品，37℃，4~8h 或18~24h，长有杂菌。 增菌培养基：增菌液一般用MM和SC两种，如可能是伤寒沙门 氏菌用TTB，用42℃培养。
五、检验结果的报告
1、凡血清学鉴定与生化反应均符合者，报告 发现沙门氏菌。 经检验，×××食品发现有沙门氏菌 2、凡血清学鉴定与生化反应均不符合者， 报告未发现沙门氏菌。
思考题：
1、典型沙门氏菌的五项生化试验结果如何？ 2、沙门氏菌的形态特征，培养特性是什么？ 3 、沙门氏菌检验时为什么要进行前增菌和增菌？ 4、沙门氏菌有哪些抗原？各有何特点？O、H抗 原如何表示，A—F群沙门氏菌中，代表每群O 特异性抗原的独特因子是什么？
（二）、所致病疾 1、伤寒和副伤寒 2、食物中毒 3、细菌性痢疾
五、微生物检验的基本程序
检样→处理→增菌培养→分离培养→ 生化试验→血清学鉴定→报告
思考题
1、肠道致病菌具有哪些生物学特性? 2、肠道致病菌具有哪些抗原？又称为什么？有 什么特点？ 3、写出肠道致病菌检验的基本程序
第二节、沙门氏菌检验
2、平板分离
选择性培养基：BS、DHL、HE、WS、SS BS中最好，DHL、HE、WS很好，SS最差 一般要用：BS和WS/SS两个平板，BS主要用 于伤寒沙门氏菌的分离
DHL上的菌落
BS上的菌落
SS上的菌落
3、五项生化试验
H2S、靛基质 、 PH7.2尿素酶、KCN 、 赖氨酸脱羧酶
（1）三糖铁培养的培养
（3）属外抗原关系： 志贺氏菌与艾希氏菌属的 O抗原关系 非常密切，除A群9型和D群宋氏菌与埃氏 希菌的 O 抗原关系未见报道外，每一个型 都与一定的艾希氏菌的O抗原有关。
4、K抗原对O抗原血清学试验的影响
可阻碍O抗原的血清学凝集试验，煮沸 处理即可。
（五）志贺氏菌的抵抗力
• 志贺氏菌属在外界环境中的生存力，以宋内氏最强，福氏菌次之，志 贺氏菌最弱。 • 一般在潮湿土壤中能存活34天，37℃水中存活20天，在粪便内 （室温）存活11天。日光直接照射30分钟，56-60℃10分即被杀死，对 高温和化学消毒剂很敏感，1%石炭酸中15-30分钟即被杀死，对氯霉 素、磺胺类、链霉素敏感，但易产生耐药性。
第一节 概述
一、食品中常见的肠道致病菌
• • • • •
沙门氏菌 志贺氏菌 大肠艾希氏菌 变形杆菌 耶尔森菌
二、生物学特性
1、形态与染色 均为革兰氏阴性杆菌，中等大小，无芽胞，多数具有周身鞭毛 能运动，志贺氏菌属无鞭毛无动力。 2、培养和生化反应 （1）、需氧或兼性厌氧，菌落中等大小，表面光滑，液体培 养基混浊生长。 （2）、肠道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多能分解乳 糖、葡萄糖产酸或产酸产气。 （3）、可还原硝酸盐为亚硝酸盐。
（3）沙门氏菌中的主要菌群及其群特异性抗原 A群----O2 B群----O4 C群----O6 C1群----O7、 C2群---- O6 O8 、 C3群----O8 、 C4群----O6 O7 O14 D群----O9 F群----O11 E群----O3 E2群----O3、 O10族 E3群----O3、 O15 E4群----O1 、O3 、O19
典型沙门氏菌在三糖铁培养上的特征： 表面（-）粉红色、底层（+）黄色、 H2S （+）底层有黑色、有动 力。 在TSI培养基中：表面（+）黄色、 H2S （-）的培养物可排除，其 它培养物均有可能是沙门氏菌。
（2）其余四项生化实验
靛基质 PH7.2尿素酶 KCN 赖氨酸脱羧酶
反应序号：A1、A2多见，B1少见
（三）、生化特性 1 、发酵 GLU ，甘露醇，山梨醇产酸产气（伤寒鸡伤 寒沙门氏菌少数不产气） 2、不发酵乳糖，蔗糖，侧金黄花醇 3、多数产生H2S（+），不产靛基质（-），不分解尿 素（-），不产生乙酰甲基甲醇（V—P）（-）， 4、能还原硝酸盐为亚硝酸盐（+） 5、在KCN培养基中生长（-），苯丙氨酸脱氨酸（-）
（四）、抗原结构 主要两种： A、O抗原 B、H抗原 C、表面抗原（K抗原） D、菌毛抗原
2 、O抗原 （1） O抗原的表示方法 共有58种，用字母O和阿拉伯数字标记：O1 、 O2 、O3、 O4 如： 伤寒杆菌： O9 、O12
（2）沙门氏菌的分群及表示方法 用大写字母及相关符号表示： A、B、C、D、E、F ……Z、 O51 ~O63、 O65~ O67