大豆油(食用级)微生物限度检验操作规程

目的

制定大豆油（食用级）微生物限度检验操作规程，规范大豆油（食用级）微生物限度的检验，确保准确、及时的检验大豆油（食用级）微生物限度，确保检验的规范性与准确性。

范围

适用于大豆油（食用级）微生物限度的检验。

职责

QC主管：负责督促检验人员按本规程操作。

生化组组长：负责对检验人员的操作进行指导与监督。

生化组检验人员：负责严格按照本规程对大豆油（食用级）微生物限度进行检验。内容

1物料/产品代码、名称

1.1 代码：PYF057

1.2 名称：大豆油（食用级）

2标准依据

2.1 STP03-QS-205500“大豆油（食用级）质量标准”

2.2《中国药典》

3仪器、工具

3.1 锥形瓶500ml

3.2 培养皿90mm

3.3 刻度吸管、乳胶头1ml

3.4 量筒10ml

3.5 锥形瓶200ml

3.6 盐水瓶100ml

3.7 试管、试管架

3.8 接种环

3.9 酒精灯

3.10 试管塞

3.11 量杯、纱布

3.12 生化培养箱

3.13 电子天平

3.14 洁净工作台

3.15灭菌锅

3.16 水浴锅

3.17 剪刀

4试剂、试药

4.1 75%的乙醇溶液或0.1%新洁尔灭溶液或70%异丙醇

4.2胰酪大豆胨琼脂培养基

4.3沙氏葡萄糖琼脂培养基

4.4 胰酪大豆胨液体培养基

4.5麦康凯液体培养基

4.6麦康凯琼脂培养基

4.7聚山梨酯80

4.8pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液

5环境、健康和安全（EHS）

5.1微生物限度检查应在不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行。

5.2在操作中注意酒精灯的使用，酒精灯中酒精的量不能超过装量的2/3。

5.3由于酒精灯或是75%的乙醇溶液或是70%异丙醇着火时，切忌用水扑灭，应采用

窒息法使其熄灭。

6准备

6.1将纱布、量杯、滤杯用灭菌呼吸袋装好，经121℃ 20分钟湿热灭菌后，经紫外消毒

30分钟后，由洁净传递窗传入洁净区。应填写“仪器使用记录”

（SMP04-QC-00080001）、“紫外灯消毒记录”（SMP04-QC-00210001）。

6.2将量筒、培养皿、弯头镊子、垫片于160℃~180℃干热灭菌2小时后，经紫外消毒

30分钟后，由洁净传递窗传入洁净区。应填写“仪器使用记录”

（SMP04-QC-00080001）、“紫外灯消毒记录”（SMP04-QC-00210001）。

6.3将熔化的胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、

pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、待检大豆油（食用级）放入传递窗，经紫外消毒30分钟后传入洁净区。应填写“仪器使用记录”（SMP04-QC-00080001）、“紫外灯消毒记录”（SMP04-QC-00210001）。

6.4开启洁净工作台的紫外灯，对工作台表面紫外消毒30分钟。填写“紫外灯消毒记

录”（SMP04-QC-00210001）。

6.5 检查所用培养基、试剂应在使用有效期内。

7 操作

7.1 方法

7.1.1关闭洁净工作台的紫外灯，打开照明灯、风机，填写“洁净工作台仪器使用记录”

（SOP04-SB-00270001）。用消毒纱布擦拭洁净工作台。点燃酒精灯，开启电子天平，填写“仪器使用记录”（SMP04-QC-00080001）。

7.1.2 在工作台上放置3个胰酪大豆胨琼脂培养基平皿，监测洁净工作台的沉降菌。

7.1.3 将工器具、培养基、装有大豆油（食用级）的碘量瓶用消毒液擦拭后，移入到洁

净工作台上。

7.1.4取无菌聚山梨酯80，加入相应体积的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，置45℃

水浴，振摇，使溶解，制成含0.1%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。

取本品10ml，加入预热45℃含0.1%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，置45℃水浴，振摇，使溶解，制成1:10供试液。再吸取上述1:10供试液1ml，加入预热的稀释液至10ml，置45℃水浴，振摇，使溶解，制成1:100的供试液。

7.1.5需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数检查

7.1.5.1需氧菌总数检查

7.1.5.1.1分别吸取制备好的1:10、1:100的供试液各1ml，置直径90mm的无菌平皿中，

注入15ml~20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固，

倒置培养。每个稀释级每种培养基制备2个平皿。

7.1.5.1.2 阴性对照：取含0.1%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲

液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15ml~20ml温度不超过45℃熔化

的胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每种培养基制备2个平

皿。

7.1.5.2 霉菌和酵母菌总数检查

7.1.5.2.1分别吸取制备好的1:10、1:100的供试液各1ml，置直径90mm的无菌平皿中，

注入15ml~20ml温度不超过45℃熔化的沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，

倒置培养。每个稀释级每种培养基制备2个平皿。

7.1.5.2.2阴性对照：取含0.1%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲

液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15ml~20ml温度不超过45℃熔化

的沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每种培养基制备2个平皿。

7.1.5.3将环测平皿置30℃~35℃的培养箱中倒置培养2~3天，逐日点计菌落数，填写“沉

降菌测试记录”（STP04-QC-00590001）。将检查需氧菌总数平皿于30℃~35℃的培养箱中倒置培养5天，检查霉菌及酵母菌总数平皿于20℃~25℃的培养箱中倒置培养7天，逐日点计菌落数，填写“微生物观察标签”

（SMP04-QC-00220012）、“生化培养箱仪器使用记录”(SOP04-SB-00330001)。

7.1.6 控制菌检查（大肠埃希菌）

7.1.6.1 供试品组

7.1.6.1.1 取1:10的供试液10ml，接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30~35℃