硅对杜仲愈伤组织诱导及增殖培养的影响

［］ ８ 高国训．植 物组 织 培养 中 的褐 变 问题 ［ ］ Ｊ ．植 物生 理 学通 报 ，
１９ ，５ ６ ５ １—５６ ９ ９ ３ （ ）：０ ０．
［］ ９王
栋 ， 合木提 ・克衣木 ， 买 玉永雄 ．植 物组织培养 中的褐化现
象及其防止措施 ［ ］ 生物技术 ， ０ （ ）７ Ｏ Ｊ． ２ ８ １ ： —１ ． ０ ［Ｏ 黄丹莹 ， １］ 江贵波 ． 植物组织培养褐变产生的 因素及 对策［ ］ 广 Ｊ．
摘要 ：以杜仲幼茎为外植体 ， 进行 杜仲愈伤组织诱导 、 增殖试 验 。在 已经筛选 出 的最 适再 分化培 养基 中， 添加 不 同浓 度的硅进行分化培养试验 ， 以确定诱导 、 增殖培养基 中的最佳硅 浓度 。结 果表明 ： 适度增加硅 浓度 ， 明显提 高杜 可 仲愈伤组织 的诱导和增殖 ， 并能改善愈伤组 织的生长状态 ， 增加 愈伤 组织增殖生长量 ； 的最 佳添加浓度为 ８ ｇ Ｌ 硅 ０ｍ ／ 。
农 业 ，０ ５ ４ ：０— １ ２０ （ ）４ ４ ．
（ 接第 ３ 上 ６页 ）
染率 明显高 于春季外植体 污染率 ， 能是冬季 取材的茎段 较 可 老熟 ， 表面粗糙 且蜡质较厚 ， 内生 菌消毒不彻底 导致 的结果 。
［］ ４ 单雪禅 ．木薯 组 织培 养繁 殖技 术 的研 究 ［ ］ Ｊ ．广 西 热作 科技 ，
１９ （ ） ３ ３ ． ９ ３ ４ ： ２— ４
但从整个试验结果来看 ， 春季腋 芽萌发率 高于冬 季腋芽 的萌 发率 ， 表明春季取材较适合木薯 Ｇ ９ １ Ｒ １ 腋芽萌发的诱导 。
本试验从不 同的消毒剂、 外植体 的选 择、 Ａ 和维 生素 Ｃ Ｇ 浸泡处理外植体等 方面对 木薯 Ｇ ９ １ 芽萌 发 的影 响进行 Ｒ１ 腋
２２ 不 同 浓度 硅 对杜 仲 愈 伤 组 织增 殖 的影 响 ．
表明， 硅可以通过沉积在质外体来提高植物对病害、 虫害和倒 伏 的 抵 抗 力 』保 护 植 物 免 受 各 种 生 物 和 非 生 物 逆 境 危 害 。 ， 硅能促进植物生长发育 ， 提高作 物对非生物胁 迫和生物胁 迫
渭南师范学院校 园栽 培的一年 生杜 仲嫩枝条 。
１ ２ 试 验 方 法 ．
转接的为质地相当的淡黄绿 、 较疏松 、 有光泽、 生长 旺盛 的愈伤 剪取一 年生杜仲嫩枝条 ， 放入 组织块 ， 每瓶接种 ４块 ，２ （ ２±１ ）℃、 光照度 １５０～２０ ０ｌ ０ ０ ｘ 条件下光照 １ ／ ，０ｄ后统计愈伤组织生长情况 ， ３ｈ ｄ ２ 以愈伤组
３ ％蔗糖脯氨 酸 ５０ ｍ ／ ０ ｇ Ｌ＋水 解酪 蛋 白 ３ ０ｍ ／ ０ ｇ Ｌ＋ｌ Ｐ Ｐ ％ Ｖ
上 （ １ ，４～２ 图 ）２ ６℃条 件下 暗 培养 ， 导愈 伤组 织形 成 （ 诱 图 ２， ） ３周后统计诱导率 ， 并观察愈伤组织生长状态。 １ ２２ 杜 仲愈伤 组 织 的增殖 ．． 茎 段在 培 养基 上诱 导 ２ １ｄ 后 ， 愈 伤组 织小 心 切下 ， 将 继代 于增 殖 培养 基 ＭＳ＋６一Ｂ Ａ
物 酶 和 多 酚氧 化 酶 活 性 ， 两 种 酶 被 认 为 在 植 物 的抗 病 中起 这
图 ５表明 ， 当增加增殖培养基 中硅浓度 ， 适 对杜 仲愈 伤组
织 的相对生长量 的提高有 明显促进 作用 ， 并且愈 伤组织生 长 状态也有 所改善 ， 变得结构更 疏松 、 富有光泽呈奶 油色 ， 生长 旺盛 ， 生长量大。其中以添加 ８ ｍ ｌＬ的硅时 ， ０ｍ ｏ ／ 相对生 长量 最高 ， ７ ８ 达 ． 。但 当硅浓度增 大到 １０～２０ ｍ ｏ Ｌ时 ， ０ ０ ｍ ｌ ／ 杜仲 愈伤组织 的相对生长量没有增加而有所下降。
系 统 研 究 ， 得 了 良好 的效 果 。 取
参 考文 献 ： ［］ １ 罗兴 录． 广西木薯产业 化发展 战略思 考 ［ ］ Ｊ ．作物 与栽培 ，０ １ ２ ０
（ ：９— １ ４）５ ６ ．
［］ ５杭
玲， 陈丽娟 ， 蔡炳 华 ， 等．木薯 离体培养 与快速 繁殖 ［ ］ 亚 Ｊ．
织相对生长量为指标 ， 确定继代 培养基最 适硅浓度 。愈 伤组 织增殖每 ３周继代 １次 ， 每个试验重复 ３次 。
相对生长量 ＝（ 培养后重 一培养前重） 培养前重 ／
２ 结 果与 分 析
年度科学研究计 划（ 编号 ：９Ｋ ３ ） 渭南师 范学 院研 究生科研 基 ０Ｊ４４ ；
金 （ 号 ：９ Ｋ ０ ２ 。 编 ０ Ｙ Ｚ ）
２ ９ —２８ ７ ３．
［］ ４ 魏海燕 ， 张洪程 ， 戴其根 ， 水稻硅素营养研究进展［ ］ 等． Ｊ ．江苏农
业科 学 ，００（ ）：２ ２ １ １ １１—１４ ２．
［ ］ ａ ｊＮ， ｉ ｔｉ Ｍａ ．Ａｔ ｎｐｒ ｒｅｕａｉｇｓｉ ｎｄｓｉｕ ５ Ｙ ｍａｉ Ｍ ｔｎ ａ Ｎ， Ｆ Ｊ ｒ ｓｏ ｅ ｇｌｔ ｉｃ ｉｒ — ａ ｔ ｒ ｎ ｌｏ ｔｂ
１２ １ 杜仲愈伤组织的诱 导 ． ．
烧 杯中 ， 加入适量洗衣粉 ， 自来水下 冲洗 ２ ｈ左右 ， 用蒸 在 再 馏水 冲洗 ５ ｉ ， ａ ｒ ｎ 置于超净工作台 内， 先用 ７ ％ 乙醇处理 ３ ， ５ ０Ｓ
收稿 日期 ：０ １—０ ２ １ ４—１ １ 基金项 目： 国家 自然科 学基 金（ 编号 ：１０ ４ ０ ； ３０ ０ １ ） 陕西省教 育厅 ２０ ０９
、－ ，
改善愈伤组织 质地及提高分化率 。但硅提高杜仲愈伤组织 分
化 率 及 生 根 率 的 具 体 机 制 目 前 还 不 清 楚 ， 待 于 进 一 步 有
的研究。 参考 文献 ：
［］ １李 琰， 姜在 民 ， 唐 锐．杜仲 叶片愈伤组织诱 导的激素优化研
＿ 【 ｉ ｌ 卜
蜷
工作量大且 效率 低 ， 以满足生 产发展 的需要 ， 难 因此 ， 组织 培 养方法成为 目前获 取杜 仲资 源 的主要手 段… 。本 研究 对杜 仲愈伤组织进行诱导及增殖培 养 ， 通过在 培养基 中添 加不 同
浓度的硅进行筛 选试 验 ， 以确定最适于杜仲愈伤组织诱导、 增
殖的硅浓度。 １ 材 料 与 方 法 １ １ 试 验 材 料 ．
Ｎａｕ ｅ ２ ０ ４ ｔ ｒ ， ０ ６，４０： ８ ６ ８—６ ． ９１
［ ］ ｔｎ Ｎ， Ｆ， ａｈａＴ ｄ ｎｉｃｔｎｏ ｌｏ ｏ ｉ ｔｅｘ — ３ Ｍｉ ｉ ＭａＪ １ ｓｉ ．Ｉｅ ｔｉ ｉ ｆｓｉ ｎｆｒ ｎ ｈ ｙ ａ ｗ ｔ ｆａ ｏ ｉｃ ｍ ｌｍ ｓｐｏ ｒ ｅ ＯｙａｓｔａＬ ） Ｊ ．Ｐａｔ ｅｌ ｈ ｓ ｌ２ ０ ，６： ｅ ａ ｆ ｃ （ ｒｚ ａｉ ［ ］ ｌ ｌ Ｐ ｙｉ ，０ ５ ４ ｉ ｖ ｎＣ ｏ
一
重要 的作用 ， 它们通过将酚类化 合物聚合形 成坚 固的屏障并 形成 木质 素 ， 或通过在酚类物质 的前体 小分子形成木 质素过 程中诱发 产生 的植保素 而增 强植物 对病原 菌的抵抗能力 。 酚类物质是杜仲愈伤组 织褐化 的主要原 因， 减少 酚类物质 能
１Ｏ Ｏ ８ Ｏ ６ ０
２１ 第 ４ ０ ２年 ０卷 第 ２期
图２ 杜仲愈伤组织诱导
图３ 杜Hale Waihona Puke Baidu愈伤组织增殖
在茎接触培养基的一端开始 看到愈伤 组织 ； 培养过 程 中茎段 不断膨大 ， ２周左 右茎段基部开始完全愈伤组织化 ， 质地较疏 松 、 色淡黄绿 、 颜 有光泽 、 生长旺盛 。如 图４所示 ， 随着硅浓度 的提高 ， 杜仲愈伤组织 诱导率 呈现先 升高后 降低的趋势 。其 中以硅浓度为 １０ｍ ｌＬ诱导率最高 ， 以达 到 １０ Ｏ ２ ｍｏ ／ 可 ０ ． ％。
作者 简介 ： 云香 （ ９ Ｏ ） 硕士 ， 师， 袁 １８ 一 ， 讲 研究 方 向为植 物分 子遗 传
学 。Ｅ—ｍａ ：ｕｎ ｕｘａ ｇ０６ １６ ｃｒ。 ｉ ｙａｙ ｎｉ ２０ ＠ ２ ．ｏ ｌ ｎ ｎ
２ １ 不 同 浓度 硅 对 杜 仲 愈 伤 组 织 诱 导 的 影 响 ．
幼嫩茎段在诱导 培养基上培养 ５ｄ开始膨大 ， 周左右能 １
关键词 ：杜仲 ； ；愈伤组织 ； 殖 硅 增 中图分类号 ：Ｓ６ ． ９ ．３ ５７ １ ０ ４ 文献标志码 ：Ａ 文章编号 ：０ ２— ３ ２ ２ １ ）２— ０ ７— ２ １０ １０ （０ ２ ０ ０ ３ ０
杜仲是名贵的中药材 ， 近年来大量研究表 明， 其次 生代谢 产物也具有多种药用功 能。 由于杜 仲常规育 种方法耗 时长 、
的抗 性 。袁 云 香 等 在 培 养 基 中加 入 适 量 硅 ， 现 适 量 的 发
硅可 以提高水 稻愈 伤组 织 的再 生植 株频 率 。本试 验结 果
表明： 在培养基中适度增加硅 ， 能够有效 地提 高愈伤组织胚性 状态 ， 同时诱导率 及增殖生长量也 明显提高 ， 但浓度过大则影 响诱 导及增殖 。这可能是 由于硅处理能提高植株体 内过氧化
热带植物科学 ， ０ ， （ ）２ — ６ ２ １３ １ ： ２ ． ０ ０ ４
［］ ６ 李瑞 梅 ， 胡新文 ， 郭建春．木薯外植体 快速高效消 毒的简易方法 ［］ Ｊ ．基 因组学和应用生物学 ，０ ９，８ ４ ：７ ２０ ２ （ ）７ ５—７ ８ ７． ［］ ７ 李如升 ， 韦玲敏 ， 思广．赤霉素处理 打破虎眼万年青休 眠的研 路 究［ ］ Ｊ ．北方园艺 ，０ ０ １ ） ８ ８ ． ２ １ （ ２ ：６— ７
０ ５ｍｇＬ＋Ｎ Ａ０ ５ｍ ／ ０ ７ 琼 脂 ＋３ 蔗 糖 ＋脯 氨 酸 ． ／ Ａ ． ｇ Ｌ＋ ． ％ ％
５ ０ｍｇＬ＋水解酪蛋 白 ３０ｍ ／ ０ ／ ０ ｇ Ｌ上 （ ３ ， 图 ） 培养基中添加硅
浓 度 分 别 为 ０ ２ 、０ ６ 、０ １０ １０ １０ １０ ２ ０ｍ ｏ Ｌ 、０ ４ 、Ｏ ８ 、０ 、２ 、４ 、６ 、０ ｍ ］ 。 ／
４ ０
蟋
２ ０
铤 ０ ０ ２０ ４ ６ ８ １ ０ ２ ４ ｌ Ｏ ２ ０ ０ ０ Ｏ ０ ｌ Ｏ １ ０ ６ ０
硅浓 度 （ ｍｍｏ／ ｌ Ｌ） 图４ 不同浓度硅对杜仲愈伤组织诱导率 的影响
究［ ］ Ｊ ．植物研究 ， ０ ， （ ） １ １６ ２ ６ ２ ２ ：８ ８ ． ０ ６ ２— ［ ］ ａ ，ａ ａ ， ａ ￣ ｅ ａ ｉ ｏ ａｓｏ ｅ ｉ ｒ ｅ Ｊ ． ２ Ｍ Ｆ Ｔ ｍ ｉ Ｙ ｍ ｉ ｔ １ ｓｉ ｎｔ ｎｐｒ ｒ ｎｉ ［ ］ Ｊ Ｋ Ｎ， ．Ａ ｌ ｒ ｃ ｔ ｃ
西轻 工 业 ，０ ６ ５ ３ ２０ （ ）：１—３ ． ２
［］ ２沈
光． 广西木薯产 业 的发 展前景 与对策 ［ ］ 热 带农业 科学 ， Ｊ．
２０ （ ）：４—２ ． ０１２ ２ ７
［］ ３ 叶剑秋 ， 李开绵 ， 陈丽珍 ， 木 薯高产栽 培技术 ［ ］ 等． Ｊ ．中国热带
江 苏农 业 科 学
江苏农业科 学
２１ ０ ２年第 ４ 卷第 ２期 Ｊ Ｄ
一 ３ ７一
袁 云香．硅对杜仲愈伤组 织诱导及增殖培养 的影响 ［ ］ Ｊ ．江苏农 业科 学，０２ ４ （ ） ３ ３ ２１ ， ２ ： ｏ ７— ８
硅对 杜仲愈伤组织诱 导及增殖培养 的影 响
袁 云香
（ 渭南 师范学 院环境 与生命科学 系， 陕西渭南 ７ ４ ０ ） １０ ０
再 用 ０ １ Ｈ Ｃ： ． ％ ｇ ｌ 处理 １ ｉ， ２ｍｎ 最后用无菌水 冲洗 ５～６次 ， 将 幼嫩茎段切成 长约 １ ． ｍ小段作为外植体 ， ～１ ５ｃ 接种 于诱导 培养基 ＭＳ＋ ６一Ｂ ｇ Ｌ＋Ｎ Ａ ０ １ｍ ／ Ａ １ｍ ／ Ａ ． ｇ Ｌ＋０ ７ ． ％琼 脂 ＋