第6章- 高效毛细管电泳
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聚酰亚胺层 弹性熔融石英 内腔
毛细管横切面示意图
23
聚酰亚胺层的作用：
增加弹性，不易折断。
为了降低温度差，可采取以下措施：
① 减小毛细管内径，常用25 ~75μm。不能太小，否 则会对进样和检测带来困难，并且易造成柱堵塞。 ② 增加壁厚（375μm）。
③ 降低聚酰亚胺涂层的厚度。
④ 降低缓冲溶液的浓度。 ⑤ 采用冷却系统。
（2）改变电渗流的大小和方向可改变分离效率和选择性，
如同改变LC中的流速；
（3）电渗流的微小变化影响结果的重现性；
在HPCE中，控制电渗流非常重要。
1.电场强度的影响 电渗流速度和电场强度成正比， 当毛细管长度一定时， 电渗流速度正比于工作电压。 2.毛细管材料的影响 不同材料毛细管的表面电 荷特性不同，产生的电渗流大小 不同；
35
四、毛细管电色谱（CEC）
电泳 两种机理： 色谱 根据组分在流动相和固定相中分配系数 的不同和自身电泳淌度的差异进行分离。
五、非水毛细管电泳（NACE）
解决了一个问题：样品溶解问题； 条件：有机溶剂中须加入电解质，选择上比较困难；
比水溶液体系可承受更高的操作电压产生的高电场，因而会有更高的分 离效率。
电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的5～7倍；
各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为：
ν+ =ν电渗流+ ν+ef 阳离子运动方向与电渗流一致；
ν- =ν电渗流- ν-ef 阴离子运动方向与电渗流相反；
ν0 =ν电渗流中性粒子运动方向与电渗流一致；
（1）可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离；
●与施加的电场强度有关；
●与毛细管内径有关； 内径越小，自热就越小，（常用25 ~75μm）。
●与介质的浓度有关。
当
Edc
13
1500
自热造成的柱效降低较小
c：介质的浓度
22
自热如何产生的呢？
… …
自热是如何影响柱效的呢？ 由于焦耳热通过管壁向环境散热，因此在毛细管内 形成径向温度梯度。
温度径向梯度将会导致缓冲溶液的径向粘度梯度， 从而产生离子迁移速度的径向不均匀分布，破坏了扁平 型塞子流的形状。
27
－定性和定量：保留时间和峰面积（峰高）
Hale Waihona Puke Baidu
色谱过程动力学之塔板理论
第三节 毛细管电泳的主要分离模式
• 毛细管区带电泳(Capillary Zone Electrophoresis， CZE) • 毛细管胶束电动色谱(Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography，MEKC，MECC) • 毛细管凝胶电泳（Capillary Gel Electrophoresis， CGE） • 毛细管等电聚焦（Capillary Isoelectric Focusing， CIEF） • 毛细管等速电泳（Capillary Isotachorphoresis， CITP）毛细管电动色谱（Capillary Electrokinetic Chromatography，CEC）
传统电泳与毛细管电泳的区别： 传统电泳：受到焦耳热的限制，只能在低电场强 度下进行电泳操作，分离时间长，效率低。 毛细管电泳：毛细管电泳 (CE)又称高效毛细管电泳 (HPCE) ，是指离子或带电粒子以毛细管为分离室 , 以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间 淌度上的差异而实现分离的液相分离分析技术。由 于毛细管内径小，表面积和体积的比值大，易于散 热，因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产生，这是 CE和传统电泳技术的根本区别。
6
（二）毛细管电泳的分类 按毛细管中填充物的性质分类： 自由溶液 毛细管内填充物为pH缓冲的电解质 溶液。如：毛细管区带电泳（CZE）。 非自由溶液 毛细管内填充物为凝胶或其他筛 分介质。如：毛细管凝胶电泳（CGE）。 按分理机制分类： 电泳型: 色谱型: CZE、CGE、NACE（非水） 胶束电动毛细管色谱（MECC） 微乳液电动毛细管色谱（MEECC） 电泳/色谱型:毛细管电色谱（CEC）
μef f
α γ μ
i i i
ep
ueff μeff E
i 溶质分子的 i 级离解度； i 离子的活度系数。
综上所述： 荷电粒子在电场中的迁移速度，除与电场强度和介质 特性有关外，还与粒子离解度、电荷数以及粒子的大小和 形状有关。
11
当固体与液体接触时，固体表面带一种电荷，因静 电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形 成双电层。 当液体两端施加电压时，就会发
σ：标准偏差 D：溶质的扩散系数（随分子量的增加而降低） tm：迁移时间。
毛细管长度 影响迁移时间的因素 （参数） 外加电压 缓冲溶液的种类 等
26
吸附 熔融石英内壁表面对溶质分子的吸附作用。
解决办法： 内壁涂层（或键合）
如：聚乙烯亚胺（PEI）涂层 甲基硅烷化键合： Si－O－H Si－O－Si－C 或Si－C
位时间内定向移动的距离。
或：单位电场强度下的电泳速度。
9
电泳淌度
εζ i ep 4πη
ζ:粒子的Zeta电势；与粒子表面的电荷密度有关，近似正比于Z/M2/3 ； η:介质的粘度。 ε:介质的介电常数；
10
有效淌度μeff 、有效电泳速度ueff ：
考虑实际溶液中，溶质分子的离解程度，离子的活度 系数对离子淌度的影响。
36
第四节 毛细管电泳仪
基本结构： 高压电源、进样、填灌/清洗、毛细管 温控、检测、记录/数据处理
毛细管电泳仪示意图
37
一、高压电源 包括：电源、电极、电极槽
0~±30kV,精度1%
一、毛细管区带电泳（CZE）
毛细管自由溶液区带电泳
应用实例1：
31
应用实例2：
32
蛋白质分析：
蛋白质
酶切 CZE
肽片段混合物
分离
特征性肽图
微 量 制 备
CE
整个蛋白质 的一级结构
分别测定各片段的氨基酸序列
33
二、胶束电动毛细管色谱（MEKC）
溶质
缓冲溶液
胶束（假固定相）
34
三、毛细管凝胶电泳（CGE）
（1）溶液pH的影响 对于石英毛细管，溶液pH增高时，表面电离多，电荷 密度增加，管壁zeta电势增大，电渗流增大，pH=7， 达到最大； pH<3，完全被氢离子中和，表面电中性， 电渗流为零。分析时，采用缓冲溶液来保持pH稳定。 （2）阴离子的影响 在其他条件相同，浓度相同而阴离子不同时，毛细管 中的电流有较大差别，产生的焦耳热不同。 缓冲溶液离子强度，影响双电层的厚度、溶液黏度和工 作电流，明显影响电渗流大小。缓冲溶液离子强度增加， 电渗流下降。
H 2 D/u
D：组分的扩散系数
毛细管电泳无固定相，所以不存在涡流扩散相和传质阻抗相，只有纵向扩 散相。
n Ld /H Ld u / 2 D
n ap ELd / 2 D
理论塔板数与电场强度成正比。
E 越高越好？？
21
2. 自热 电流通过缓冲溶液时将会产生焦耳热（或称自热）。 自热过大将会破坏扁平型塞子流，使柱效降低。 自热与哪些因素有关呢？
生液体相对于固体表面的移动， 这种现象叫电渗现象。 电渗现象中整体移动着的液体叫 电渗流（electroosmotic flow ，简 称EOF）。
石英毛细管柱，内充液 pH >3时，表面电离成SiO-，管内壁带负电荷， 形成双电层后，电渗流 方向为由正极到负极。
Si－O－
电渗流形状：平头塞状
在电场中，液体相对毛细管内壁的移动均为向 负极方向的移动，电渗速度是电泳速度的 5 ～ 7 倍， 因此无论是正离子、负离子还是中性分子，都将随着 电渗流朝着一个方向移动。 电渗与电泳作用的对象不同: 电泳——荷电粒子 电渗——溶液（缓冲溶液，pH>2）
一、电泳和电泳淌度（mobility） 电泳：在电场作用下，带电粒子在缓冲溶液中的定向移动。
uep V μep E μep L
E：电场强度；L：毛细管长度； V：毛细管两端施加电压
电泳速度（uep
距离。
cm/s）： 在单位时间内，带电粒子在毛细管中定向移动的
电泳淌度（μep
cm2/(V.s) ）：带电粒子在毛细管中，单位电场强度下、单
7
（一） 基本概念 毛细管总长度(L, cm) 毛细管有效长度(l, cm) 毛细管的入口端到检测窗口
的距离；
迁移时间(t, min) 带电粒子在电场作用下做定向移动 的时间； 电泳速度（v cm/s） 在单位时间内，带电粒子定向 移动的距离； 电场强度(E, V/cm) 电场强度/毛细管总长度； 电泳淌度（μ cm2/(V· s) ）带电粒子在毛细管中定 向移动的速度与所在电场强度之比；
4
同：均为液相分离分析方法。 可用相同的理论来描述（差速迁移），一些色谱名词概念，如： 塔板理论、速率理论、保留值等仍可使用。 异：分离原理不同； 仪器构造有很大的差异。
HPLC示意图
CE示意图
5
三、毛细管电泳的特点和分类
（一）毛细管电泳的特点 1、毛细管电泳柱效更高，塔板数可达 105~106/m，（又称高效毛细管电泳，HPCE）； 2、分离速度更快； 3、溶剂、试样消耗极少，（纳升级）； 4、仪器成本低，（不需要高压泵）； 5、选择性高。通过选择操作模式和缓冲溶液的成 分以达到对性质不同的成分的有效分离。 6、应用广泛。特别适用于氨基酸、多肽、蛋白质 和核酸等生命科学领域的测定，以后逐渐被广泛应用 于生物，化学，医药，环保等领域。与HPLC互相补充， 共同成为分析化学中重要的分离分析技术。
24
不同内径毛细管的管壁温度
及其轴心与管壁的温差
内半径（μm） 25 50 75 100 125 壁温度（K） 299.0 301.2 304.2 307.7 311.6 温差（K） 0.53 1.39 3.14 5.58 8.72
25
3. 扩散与吸附 扩散
纵向扩散：
2 2 DLd /u 2 Dtm
1937年，瑞典科学家蒂塞利乌斯 （Tiselius）设计了世界上第一台电泳仪， 建立了移界电泳法，用于牛血清中分离 血清蛋白、α-、β-和γ-球蛋白，并于 1948年荣获诺贝尔化学奖。 多年以来，电泳技术围绕制胶、电泳、染 色三个技术环节，不断改进，以实现下 列目标：
•
1、提高分辨率及灵敏度。
2、简化操作，缩短电泳时间。
毛细管内温度的升高，使溶液的黏度下降，电渗流 增大。温度变化来自于“焦耳热”； 焦耳热：毛细管溶液中有电流通过时，产生的热量； CE中的焦耳热与背景电解质的摩尔电导、浓度及电 场强度成正比。 温度每变化1，将引起背景电解质溶液黏度变化2%～ 3%；
5.添加剂的影响
（1）加入浓度较大的中性盐，如 K2SO4，溶液离子强度增大，使溶液 的黏度增大，电渗流减小。 （2）加入表面活性剂，可改变电 渗流的大小和方向； 加入不同阳离子表面活性剂可控制 电渗流。 加入阴离子表面活性剂，如十 二烷基硫酸钠（SDS），可以使壁 表面负电荷增加，zeta电势增大， 电渗流增大； （3）加入有机溶剂如甲醇、乙腈， 使电渗流减小。
3、扩大应用范围。
• 各类电泳技术已广泛应用于生命科学
• 毛细管电泳(CE)又称高效毛细管电泳(HPCE)，
是指离子或带电粒子以毛细管为分离介质，以 高压直电场为驱动力，依据样品中各组分之间 淌度和分配行为上的差异而实现分离的液相分 离分析技术。 • 采用了0.05 mm内径的毛细管； • 采用了高达数千伏的电压。
（二）谱带展宽 影响谱带展宽的原因有两类： ① 毛细管柱内的溶液和溶质。包括：自热、扩散和吸附。 ② 仪器系统。包括：进样系统和检测系统。
1. 电渗流型
a ㈩ ㈠
b 高压
低压
HPCE（a）和HPLC（b）柱 中溶液流型的比较
20
电渗流型的特点： 扁平型的塞子流。是毛细管电泳高柱效的重要原因。 毛细管电泳的速率方程：
综合了CE和平板凝胶电泳的优点，是当今分离度极 高的一种电泳分离技术，特别适用于蛋白质、多肽、寡 核苷酸、 DNA 等的分离分析，特别是与激光诱导荧光 （ LIF）检测技术结合，成为 DNA 快速序列分析的优选 方案，在人类基因工程计划中发挥重要作用。
电泳
两种机理： 分子尺寸 聚丙烯酰胺凝胶（PAG）（交联和非交联） 凝胶种类 琼脂糖、甲基纤维素及其衍生物 葡聚糖、聚乙二醇等 原则上是按照分子大小分离
毛细管横切面示意图
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聚酰亚胺层的作用：
增加弹性，不易折断。
为了降低温度差，可采取以下措施：
① 减小毛细管内径，常用25 ~75μm。不能太小，否 则会对进样和检测带来困难，并且易造成柱堵塞。 ② 增加壁厚（375μm）。
③ 降低聚酰亚胺涂层的厚度。
④ 降低缓冲溶液的浓度。 ⑤ 采用冷却系统。
（2）改变电渗流的大小和方向可改变分离效率和选择性，
如同改变LC中的流速；
（3）电渗流的微小变化影响结果的重现性；
在HPCE中，控制电渗流非常重要。
1.电场强度的影响 电渗流速度和电场强度成正比， 当毛细管长度一定时， 电渗流速度正比于工作电压。 2.毛细管材料的影响 不同材料毛细管的表面电 荷特性不同，产生的电渗流大小 不同；
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四、毛细管电色谱（CEC）
电泳 两种机理： 色谱 根据组分在流动相和固定相中分配系数 的不同和自身电泳淌度的差异进行分离。
五、非水毛细管电泳（NACE）
解决了一个问题：样品溶解问题； 条件：有机溶剂中须加入电解质，选择上比较困难；
比水溶液体系可承受更高的操作电压产生的高电场，因而会有更高的分 离效率。
电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的5～7倍；
各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为：
ν+ =ν电渗流+ ν+ef 阳离子运动方向与电渗流一致；
ν- =ν电渗流- ν-ef 阴离子运动方向与电渗流相反；
ν0 =ν电渗流中性粒子运动方向与电渗流一致；
（1）可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离；
●与施加的电场强度有关；
●与毛细管内径有关； 内径越小，自热就越小，（常用25 ~75μm）。
●与介质的浓度有关。
当
Edc
13
1500
自热造成的柱效降低较小
c：介质的浓度
22
自热如何产生的呢？
… …
自热是如何影响柱效的呢？ 由于焦耳热通过管壁向环境散热，因此在毛细管内 形成径向温度梯度。
温度径向梯度将会导致缓冲溶液的径向粘度梯度， 从而产生离子迁移速度的径向不均匀分布，破坏了扁平 型塞子流的形状。
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－定性和定量：保留时间和峰面积（峰高）
Hale Waihona Puke Baidu
色谱过程动力学之塔板理论
第三节 毛细管电泳的主要分离模式
• 毛细管区带电泳(Capillary Zone Electrophoresis， CZE) • 毛细管胶束电动色谱(Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography，MEKC，MECC) • 毛细管凝胶电泳（Capillary Gel Electrophoresis， CGE） • 毛细管等电聚焦（Capillary Isoelectric Focusing， CIEF） • 毛细管等速电泳（Capillary Isotachorphoresis， CITP）毛细管电动色谱（Capillary Electrokinetic Chromatography，CEC）
传统电泳与毛细管电泳的区别： 传统电泳：受到焦耳热的限制，只能在低电场强 度下进行电泳操作，分离时间长，效率低。 毛细管电泳：毛细管电泳 (CE)又称高效毛细管电泳 (HPCE) ，是指离子或带电粒子以毛细管为分离室 , 以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间 淌度上的差异而实现分离的液相分离分析技术。由 于毛细管内径小，表面积和体积的比值大，易于散 热，因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产生，这是 CE和传统电泳技术的根本区别。
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（二）毛细管电泳的分类 按毛细管中填充物的性质分类： 自由溶液 毛细管内填充物为pH缓冲的电解质 溶液。如：毛细管区带电泳（CZE）。 非自由溶液 毛细管内填充物为凝胶或其他筛 分介质。如：毛细管凝胶电泳（CGE）。 按分理机制分类： 电泳型: 色谱型: CZE、CGE、NACE（非水） 胶束电动毛细管色谱（MECC） 微乳液电动毛细管色谱（MEECC） 电泳/色谱型:毛细管电色谱（CEC）
μef f
α γ μ
i i i
ep
ueff μeff E
i 溶质分子的 i 级离解度； i 离子的活度系数。
综上所述： 荷电粒子在电场中的迁移速度，除与电场强度和介质 特性有关外，还与粒子离解度、电荷数以及粒子的大小和 形状有关。
11
当固体与液体接触时，固体表面带一种电荷，因静 电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形 成双电层。 当液体两端施加电压时，就会发
σ：标准偏差 D：溶质的扩散系数（随分子量的增加而降低） tm：迁移时间。
毛细管长度 影响迁移时间的因素 （参数） 外加电压 缓冲溶液的种类 等
26
吸附 熔融石英内壁表面对溶质分子的吸附作用。
解决办法： 内壁涂层（或键合）
如：聚乙烯亚胺（PEI）涂层 甲基硅烷化键合： Si－O－H Si－O－Si－C 或Si－C
位时间内定向移动的距离。
或：单位电场强度下的电泳速度。
9
电泳淌度
εζ i ep 4πη
ζ:粒子的Zeta电势；与粒子表面的电荷密度有关，近似正比于Z/M2/3 ； η:介质的粘度。 ε:介质的介电常数；
10
有效淌度μeff 、有效电泳速度ueff ：
考虑实际溶液中，溶质分子的离解程度，离子的活度 系数对离子淌度的影响。
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第四节 毛细管电泳仪
基本结构： 高压电源、进样、填灌/清洗、毛细管 温控、检测、记录/数据处理
毛细管电泳仪示意图
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一、高压电源 包括：电源、电极、电极槽
0~±30kV,精度1%
一、毛细管区带电泳（CZE）
毛细管自由溶液区带电泳
应用实例1：
31
应用实例2：
32
蛋白质分析：
蛋白质
酶切 CZE
肽片段混合物
分离
特征性肽图
微 量 制 备
CE
整个蛋白质 的一级结构
分别测定各片段的氨基酸序列
33
二、胶束电动毛细管色谱（MEKC）
溶质
缓冲溶液
胶束（假固定相）
34
三、毛细管凝胶电泳（CGE）
（1）溶液pH的影响 对于石英毛细管，溶液pH增高时，表面电离多，电荷 密度增加，管壁zeta电势增大，电渗流增大，pH=7， 达到最大； pH<3，完全被氢离子中和，表面电中性， 电渗流为零。分析时，采用缓冲溶液来保持pH稳定。 （2）阴离子的影响 在其他条件相同，浓度相同而阴离子不同时，毛细管 中的电流有较大差别，产生的焦耳热不同。 缓冲溶液离子强度，影响双电层的厚度、溶液黏度和工 作电流，明显影响电渗流大小。缓冲溶液离子强度增加， 电渗流下降。
H 2 D/u
D：组分的扩散系数
毛细管电泳无固定相，所以不存在涡流扩散相和传质阻抗相，只有纵向扩 散相。
n Ld /H Ld u / 2 D
n ap ELd / 2 D
理论塔板数与电场强度成正比。
E 越高越好？？
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2. 自热 电流通过缓冲溶液时将会产生焦耳热（或称自热）。 自热过大将会破坏扁平型塞子流，使柱效降低。 自热与哪些因素有关呢？
生液体相对于固体表面的移动， 这种现象叫电渗现象。 电渗现象中整体移动着的液体叫 电渗流（electroosmotic flow ，简 称EOF）。
石英毛细管柱，内充液 pH >3时，表面电离成SiO-，管内壁带负电荷， 形成双电层后，电渗流 方向为由正极到负极。
Si－O－
电渗流形状：平头塞状
在电场中，液体相对毛细管内壁的移动均为向 负极方向的移动，电渗速度是电泳速度的 5 ～ 7 倍， 因此无论是正离子、负离子还是中性分子，都将随着 电渗流朝着一个方向移动。 电渗与电泳作用的对象不同: 电泳——荷电粒子 电渗——溶液（缓冲溶液，pH>2）
一、电泳和电泳淌度（mobility） 电泳：在电场作用下，带电粒子在缓冲溶液中的定向移动。
uep V μep E μep L
E：电场强度；L：毛细管长度； V：毛细管两端施加电压
电泳速度（uep
距离。
cm/s）： 在单位时间内，带电粒子在毛细管中定向移动的
电泳淌度（μep
cm2/(V.s) ）：带电粒子在毛细管中，单位电场强度下、单
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（一） 基本概念 毛细管总长度(L, cm) 毛细管有效长度(l, cm) 毛细管的入口端到检测窗口
的距离；
迁移时间(t, min) 带电粒子在电场作用下做定向移动 的时间； 电泳速度（v cm/s） 在单位时间内，带电粒子定向 移动的距离； 电场强度(E, V/cm) 电场强度/毛细管总长度； 电泳淌度（μ cm2/(V· s) ）带电粒子在毛细管中定 向移动的速度与所在电场强度之比；
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同：均为液相分离分析方法。 可用相同的理论来描述（差速迁移），一些色谱名词概念，如： 塔板理论、速率理论、保留值等仍可使用。 异：分离原理不同； 仪器构造有很大的差异。
HPLC示意图
CE示意图
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三、毛细管电泳的特点和分类
（一）毛细管电泳的特点 1、毛细管电泳柱效更高，塔板数可达 105~106/m，（又称高效毛细管电泳，HPCE）； 2、分离速度更快； 3、溶剂、试样消耗极少，（纳升级）； 4、仪器成本低，（不需要高压泵）； 5、选择性高。通过选择操作模式和缓冲溶液的成 分以达到对性质不同的成分的有效分离。 6、应用广泛。特别适用于氨基酸、多肽、蛋白质 和核酸等生命科学领域的测定，以后逐渐被广泛应用 于生物，化学，医药，环保等领域。与HPLC互相补充， 共同成为分析化学中重要的分离分析技术。
24
不同内径毛细管的管壁温度
及其轴心与管壁的温差
内半径（μm） 25 50 75 100 125 壁温度（K） 299.0 301.2 304.2 307.7 311.6 温差（K） 0.53 1.39 3.14 5.58 8.72
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3. 扩散与吸附 扩散
纵向扩散：
2 2 DLd /u 2 Dtm
1937年，瑞典科学家蒂塞利乌斯 （Tiselius）设计了世界上第一台电泳仪， 建立了移界电泳法，用于牛血清中分离 血清蛋白、α-、β-和γ-球蛋白，并于 1948年荣获诺贝尔化学奖。 多年以来，电泳技术围绕制胶、电泳、染 色三个技术环节，不断改进，以实现下 列目标：
•
1、提高分辨率及灵敏度。
2、简化操作，缩短电泳时间。
毛细管内温度的升高，使溶液的黏度下降，电渗流 增大。温度变化来自于“焦耳热”； 焦耳热：毛细管溶液中有电流通过时，产生的热量； CE中的焦耳热与背景电解质的摩尔电导、浓度及电 场强度成正比。 温度每变化1，将引起背景电解质溶液黏度变化2%～ 3%；
5.添加剂的影响
（1）加入浓度较大的中性盐，如 K2SO4，溶液离子强度增大，使溶液 的黏度增大，电渗流减小。 （2）加入表面活性剂，可改变电 渗流的大小和方向； 加入不同阳离子表面活性剂可控制 电渗流。 加入阴离子表面活性剂，如十 二烷基硫酸钠（SDS），可以使壁 表面负电荷增加，zeta电势增大， 电渗流增大； （3）加入有机溶剂如甲醇、乙腈， 使电渗流减小。
3、扩大应用范围。
• 各类电泳技术已广泛应用于生命科学
• 毛细管电泳(CE)又称高效毛细管电泳(HPCE)，
是指离子或带电粒子以毛细管为分离介质，以 高压直电场为驱动力，依据样品中各组分之间 淌度和分配行为上的差异而实现分离的液相分 离分析技术。 • 采用了0.05 mm内径的毛细管； • 采用了高达数千伏的电压。
（二）谱带展宽 影响谱带展宽的原因有两类： ① 毛细管柱内的溶液和溶质。包括：自热、扩散和吸附。 ② 仪器系统。包括：进样系统和检测系统。
1. 电渗流型
a ㈩ ㈠
b 高压
低压
HPCE（a）和HPLC（b）柱 中溶液流型的比较
20
电渗流型的特点： 扁平型的塞子流。是毛细管电泳高柱效的重要原因。 毛细管电泳的速率方程：
综合了CE和平板凝胶电泳的优点，是当今分离度极 高的一种电泳分离技术，特别适用于蛋白质、多肽、寡 核苷酸、 DNA 等的分离分析，特别是与激光诱导荧光 （ LIF）检测技术结合，成为 DNA 快速序列分析的优选 方案，在人类基因工程计划中发挥重要作用。
电泳
两种机理： 分子尺寸 聚丙烯酰胺凝胶（PAG）（交联和非交联） 凝胶种类 琼脂糖、甲基纤维素及其衍生物 葡聚糖、聚乙二醇等 原则上是按照分子大小分离