酶解法制备葡萄糖酸钙

发酵法：营养盐和黑霉菌种子营养液， 进行发酵。发酵液加石灰乳中和，过滤， 滤液减压浓缩，结晶得到粗品，经精制 得到葡萄糖酸钙。 （生产成本较高，纯化工艺较复杂 ）
试 验 原 理
(C6H10O5)n +nH2O
α-淀粉酶 糖化酶
nC6H10O6
（ 1 ） α - 淀粉酶 (EC 3.2.1.1) 又称液化型 淀粉酶，它作用于淀 粉时，随机的从淀粉 分子内部切开 α -1,4 糖苷键，使淀粉水解 成糊精和一些还原糖。
酶法制备葡萄糖酸钙
月饼小分队：白朋纲 杨梦雪 姜昌熊 张雪冰
钙是体内含量最大的无机物，为维持 人体神经，肌肉，骨骼系统，细胞膜 和毛细血管通透性正常功能所必需。 葡萄糖酸钙在中国和许多国家的药典里都有 收藏，是一种我们比较熟悉的的药物，葡萄 糖酸钙常常被用来做补钙剂。它有利于人体 骨质的形成，对青少年骨骼发育有促进作用, 同时由于它是一种抗过敏溶解度高，生理活 性大的钙营养药，可以治疗生理性缺钙症和 血钙引起的手足抽搐、痉挛等症，以及治疗 软骨、佝偻等缺钙症。
一，葡萄糖标准曲线
沸水浴中2min 后取出 分别加入2mL DNS试剂 设置一个空白组
加蒸馏水至15mL
测定吸光值，获得标准曲线
操作步骤
45g淀粉+150ml水搅 拌 Na2CO3调节 pH=6--6.4
二，液化
再加热至 90℃30min
加入a-淀粉酶，72℃加 热搅拌15min 加热到沸腾10min，酶失 活
获得葡萄糖酸钙溶液
试验结果
吸光值 1.414 2.682 2.891 2.958 3.01
浓度 （%）
0.5
1
3
来自百度文库
5
7
样品的吸光值为1.636，通过表中的数据整合出的 标准曲线得出葡萄糖的浓度为0.58%
试验过程及其产物照片
（2）糖化酶（EC 3.2.1.3）又 称葡萄糖淀粉酶，它作用于淀 粉时，从淀粉分子的非还原端 开始逐个地水解α -1,4糖苷键， 生成葡萄糖和一些低聚糖，且 糖化酶还有一定的水解α -1,6 糖苷键和α -1,3糖苷键的能力
试 验 原 理
葡萄糖氧化酶 4C6H12O6+3O2+2H2O 4C6H12O7+2H2O2 2C6H12O7+CaCO3 过氧化氢酶 Ca(C6H11O7)2+CO2+H2O
（4）过氧化氢酶 2H2O2 2H2O+O2 （EC1.1.1.1.6） 它以过氧化氢作 （ 3 ）葡萄糖氧化酶（ EC 1.1.3.4 ）是 为专一的底物， 一种糖蛋白，它能够特异性的氧化 β - 催化过氧化氢分 D-葡萄糖生成中间产物D-葡萄糖酸- δ 解为水和氧气保 - 内酯和过氧化氢，并发生非酶促反应 护酶受到过氧化 水解为葡糖酸。 氢的毒害。
淀粉糊化
操作步骤
冷却至55-60℃ 加入糖化酶
调节 ph=4.5 于60-65℃ 恒温水浴 糖化3-4h
三，糖化
抽滤，得到透 明糖液
加入活性 炭，在 80℃搅拌 30min
测量葡萄糖含量
操作步骤
葡萄糖+CaCO3 (过 量) 加过氧化氢酶和 葡萄糖氧化酶
四，双酶氧化
反应结束，加 活性炭脱色 35℃搅拌反应，通过pH 判断反应进行的程度
实验器材
500ML烧杯， PH试纸， 玻璃棒， 水浴锅， 电炉， 石棉网， 温度计， 滤纸， 漏斗， 电子天平， 量筒 等常用试验用器材
淀粉， a-淀粉酶， 糖化酶 ， 葡萄糖氧化酶 ， 过氧化氢酶 ， NaOH Na2CO3 ，CaCO3， CaCl2， 碘液 ，活性炭等等
试验试剂
操作步骤
配置5个梯度浓度的葡萄糖标准溶液 各取1mL分装 于五支试管中