中芦丁含量的测定(精)

设计方案

色谱条件



固定相：ODS色谱柱 流动相：甲醇-1%冰醋酸溶液（40:60） 流速：1.0 ml/min 进样量：10µl 柱温：30℃ 检测波长：257nm

标准曲线的绘制 对照品溶液分别配制成梯度溶
液 进样 测定峰面积 以峰面积为纵坐 标，浓度为横坐标，做标准曲线。

中国药典

色谱条件


固定相：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱 流动相：甲醇-1%冰醋酸溶液（32:68） 检测波长：257nm

对照品溶液的制备 精密称取在120℃减压干燥至
恒重的芦丁对照品适量 0.1mg的溶液 甲醇制成每1ml含

供试品溶液的制备 精密称取本品适量
锥形瓶中 超声处理 滤过 精密加入甲醇50ml 再称定重量
样品测定 供试品溶液
接进样 外标法测定
微孔滤膜过滤
直

仪器精密度 同一对照品溶液
Байду номын сангаас测定其峰面积 计算RSD
重复进样6次
讨论

芦丁易溶于甲醇，在水中微溶，降低流动相中甲醇 的含量将提高芦丁的分离效果，但同时也将延长保 留时间，实验中需根据实际情况调节流动相配比以 获得良好的分离效果。

芦丁在水溶液中呈酸性，为防止其水解，药典及许 多文献报道的流动相中都加入了无机酸，但含量较 高的酸容易对分析柱造成损伤。文献一的流动相中 仅用了甲醇和水，也获得了满意的效果。而文献方 案三认为加入乙酸可有效防止脱尾，实验中可根据 实际情况决定是否加酸。

参考文献




国家药典委员会，中华人民共和国药典(一部). 北京： 化学工业出版社，2005.1 邓富良，陈本美等. 高效液相色谱法测定槐米中的 芦丁含量[J]. 湖南医科大学学报，2000，25(6)： 598-599 梁南熙，彭永芳. 槐花中芦丁的高效液相色谱测定 [J]. 昆明师范高等专科学校学报，2002，24(4)： 51-52 李培凡，张颧慧等. RP-HPLC法测定不同产地槐米 中芦丁[J]. 中草药，2006，37(9)：1419-1420
文献二
Luna 5µ C18 甲醇-水-乙酸 （45:53:2）
文献三
Spherisorb ODS C18柱 甲醇-乙腈冰醋酸-水（ 22:10:3:65）
30
30
45
261
1.43 1.07 96.32
355
1.44 3.4 98.2
257
1.5 1.63 99.5
精密度(%) 重复性(%) 回收率(%)
高效液相色谱法测定槐花米提 取物中芦丁含量
王味思 夏仲尼 孙思源 蔡瑜 柴晓鹃 陈万威 徐强
OH
OH HO O
芦丁（Rutin C27H30O16）

O OH O
Glc Rha


豆科植物槐树花蕾-槐米的主要有效成份 具有维生素P样作用，有助于保护和恢复毛细血管的弹 性，调节毛细血管的渗透性，可作为高血压和脑溢血的 辅助治疗 已报道的芦丁HPLC测定方法采用的流动相有多种，本 次实验的目的是针对这些不同的流动相进行考察，并对 芦丁样品的含量进行测定。 本实验采用的槐米提取物来自浙江大学药学院天然药化 实验室本科生实验产物

样品处理 精密称取本品适量
浸泡 定容 超声提取 离心取上清 至提取液无色
70%乙醇20ml 反复提取
合并上清至100ml的容量瓶

样品测定 适量提取液
直接进样 外标法测定
0.45µm滤膜过滤
文献二

色谱条件

固定相：Luna 5µ C18柱（150x 4.6mm） 流动相：甲醇-水-乙酸（45:53:2） 进样量：5µl 柱温：30℃ 检测波长：355nm

对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品5.4mg
置于5ml容量瓶 甲醇稀释至刻度 置于

供试品溶液的制备 精密称取本品适量
索氏提取器 甲醇提取至无色 至250 ml容量瓶 甲醇稀释至刻度
提取液转移
文献三

色谱条件


固定相：Spherisorb ODS Cl8 （150mm×4.6mm，5m）色谱柱 流动相：甲醇-乙腈-冰醋酸-水（22:10:3:65） 流速：1.0 ml/min 进样量：20µl 柱温：45℃ 检测波长：257nm

供试品溶液制备 精密称取本品适量
醇浸泡 超声提取 滤过
30ml甲
适量甲醇洗残渣
2～3次
摇匀即得

洗液并入滤液
甲醇定容至100ml
样品测定 供试品溶液
直接进样 外标法测定
微孔滤膜(0.45µm)滤过
项目 固定相 流动相 柱温(℃)
检测波长(nm)
文献一
Nova-pakC18 甲醇-水（35:65）

芦丁在204nm、257nm、355nm处有3个吸收 峰，药典中芦丁的检测波长为257nm，文献二用 了355nm作为检测波长，也获得了较好的检测结 果。另一个芦丁的吸收峰204nm干扰因素较多， 使用较少。 据文献报道，柱温对分离的影响较小。随着柱温 的增加，保留时间有所缩短，峰的扩散有所改善， 但对分离度影响较小，故30℃较为适宜。
置具塞
称定重量
甲醇补足减失的重量 置10ml量瓶中
精密量取续液2ml
甲醇稀释至刻度

摇匀即得
测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入液
相色谱仪，测定，即得。
文献一

色谱条件

固定相：Nova-PakC18柱（150mm×4.6mm） 流动相：甲醇-水（35:65） 流速：1.0ml〃min-1 进样量：10µl 柱温：30℃ 检测波长：261nm