拟南芥和gaap2突变体在幼苗期的生长差异
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.....
......
（如果培养的拟南芥染病毒需要重复实验）
三、实验器材（用途）
电子秤（配制溶液前称量），称量纸（若干），1根玻璃棒（搅拌）量筒（100ml和10ml各1个），胶头滴管（1个）、PH试纸、皮筋（或棉绳，若干）、牛皮纸（按锥形瓶口和烧杯口大小裁好）、记号笔（或标签纸）、1000ml容量瓶（定容溶剂）、1个洗耳球、移液管、1个刻度尺、数据记录本、4个200ml锥形瓶、移液枪（100UL～100UL，向EP管中加入试剂），1个1L烧杯（用作废液缸）
MS有机物母液（100X）
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
化学药品
1升量
10升量
①
烟酸
0．5 mg/L
5mg
②
盐酸吡哆素（VB6）
0．5 mg/L
5mg
③
盐酸硫胺素（VB1）
④
肌醇
100 mg/L
1 g
⑤
甘氨酸
2 mg/L
20mg
2.稀释成1/2MS培养基
在锥形瓶中先加入1.5g蔗糖（浓度为15g/L），0.7g琼脂（浓度为7g/L）和30mL左右的蒸馏水，然后按照配制50mL MS培养基的标准加入四种母液，用玻璃棒沾取少量的液体滴在PH试纸上，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整液体的pH至5.6—5.8，最后用蒸馏水将溶液定容为100mL。
4.3记录表格
（4）侧根的数目观察与测量
在完成根的测量之后，开始观察并记录侧根的数目，当侧根多大一定数量而无法分清的时候，停止记录。观察和记录频率为每24小时一次，时间定为每隔一天的下午五点到六点之间。
4.4记录表格
表一
表二
表三
（5）（选做）野生型拟南芥与gaap2突变体植株叶片光合效率的比较
将野生型拟南芥和gaap2突变体培养20天后，利用光合测定仪在相同的关照条件下测定其光合效率。
4.5记录表格
5.实验数据和图片的处理
萌发率的计算公式：发芽率（%）=种子的发芽数/种子总数×100%。
发芽指数 Gt、Dt相对应的每天发芽种子数与发芽日数
六、实验安排计划表
实验开始时间为：2013年10月21日
日期
实验内容
10月21日
下午，MS培养基的配制，以及灭菌处理实验器材
两小时后进行倒平板，点样处理。
3.灭菌操作
培养基及器具灭菌：培养基、无菌水需要在高压灭菌锅中灭菌。灭菌作用取决于温度，常用的灭菌温度为121℃，时间为30min，灭菌结束后待温度下降到50℃以下，才能取出已灭菌的培养基。可用同样方法对器具同时进行灭菌，包括：培养皿、解剖刀、剪子、滤纸、镊子等。
工作环境灭菌：接种前1ｈ打开超净工作台和棚面的紫外灯照射40min(或者接种前操作台通风20min)。杀菌结束后，先关掉棚面的紫外灯，再打开风机，最后关掉超净工作台上的紫外灯(不能将风机与台面上的紫外灯同时关闭或先关闭风机再开紫外灯)。
④
MgSO4·7H2O
370 mg/L
/L
1．7g
MS微量元素母液（100X）
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
化学药品
1升量
10升量
①
MnSO4·4H2O
（MnSO4·H2O）
22．3 mg/L
（21．4 mg/L）
223mg
②
ZnSO4·7H2O
4.2记录表格
表一
表二
表三
（3）真叶发生率观察与记录
拟南芥真叶和子叶可从这几个方面去判断：一是根据苗龄，正常拟南芥在0-5或者6天这个时间段没有真叶还没长出，所以你看到的只能是子叶；二是根据叶的作生位置，完整正常的拟南芥子叶是长在最外层和最下端；三是可以根据叶片表面是否有毛状体，但这要注意生态型，因为有的生态型，真叶也不会长毛状体。后面一个问题，子叶在种子幼苗早期形态建成过程会生长，就算长出真叶后也会继续生长，然后停止生长。所以，我们需要萌发后第七天之后，开始观察和记录拟南芥真叶的发生数，观察记录频率为每每隔2天48小时一次，时间定为每隔一天的下午五点到六点。用相机进行拍照，观察的指标：真叶的大小和数量。
4.在无菌环境下倒平板
待灭菌结束后，将所需物品放入超净工作台：三种实验材料、灭菌好的培养基、无菌水、培养皿、吸水纸、操作工具、空烧杯、75%酒精、废液缸、酒精灯、打火机、移液枪。然后将100mL的培养基平均分装在四个平板培养基，每个培养基大概25mL左右，分别标注为A、B、C、D。
进入接种室前，需要洗净手和手腕。进入超净工作台内需用75%酒精棉球擦拭手、手腕，再擦培养基瓶和超净工作台。
5.种子的消毒处理
种子装入1.5mlEP离心管内，60粒种子加1ml75%乙醇消毒1分钟；
吸去乙醇，加入1ml 5%次氯酸钠，震荡洗涤15-20分钟；
吸去次氯酸钠溶液，加入无菌蒸馏水清洗（清洗3次，每次洗完后稍离心，吸净水分）
6.点样
将消毒处理后的种子，可以利用微量进样器用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，一般行间距保持2cm左右，每个种子之间的距离大约为2.5cm左右，防止植株长大后影响根与子叶的发育(将培养基分割成两半，左半边点15个野生型拟南芥种子，右半边点15个gaap2突变拟南芥种子，四个平板中的培养基完全相同)。
微量元素：硼酸H3BO3、硫酸锰MnSO4.4H2O、硫酸锌ZnSO4.7 H2O、钼酸钠Na2MoO4.2 H2O、硫酸铜CuSO4.5 H2O、氯化钴CoCl2.6H2O、碘化钾KI、浓硫酸Concentrated H2SO4
注：NB培养基中用浓硫酸代替碘化钾
铁盐：乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA)、硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)
4个培养皿（2个用于栽培拟南芥，2个用于栽培拟南芥突变体），牙签（点样种子），1个2ml1.5mlEP管（装种子），封口膜（密封培养皿，放置细菌污染），超净台（接种时进行无菌操作），酒精灯，酒精棉球，离心机
四、实验试剂
大量元素：硝酸钾KNO3、硝酸铵NH4NO3、磷酸二氢钾KH2PO4、硫酸镁MgSO4.7H2O、氯化钙CaCl2.2H2O、硝酸钙Ca(NO3)2.4H2O、氯化钾KCl
葡萄糖，70%酒精，50％NaClO2，水
五、试验方法
1.配置MS培养基
MS大量元素母液（10X）
称10升量溶解在1升蒸馏水中。配1升培养基取母液100ml。
化学药品
1升量
10升量
①
NH4NO3
1650 mg/L
16．5g
②
KNO3
1900 mg/L
19．0g
③
CaCl2·2H2O
440 mg/L
4．4g
发芽指数 Gt、Dt相对应的每天发芽种子数与发芽日数；
发芽率（%）=种子的发芽数/种子总数×100%。
4.1记录表格
（2）根长的观察与测定
萌发完成第七天第5天之后，开始测定根长（附加苗长）和侧根数目，测定频率为每隔2天每48小时测定一次，时间是每隔一天的下午五点到六点；测定方法为：在培养基旁边放一个刻度清晰三角尺，然后用相机进行拍照，最后通过刻度尺测量计算根长。
有机成分：肌醇Myo-inositol、盐酸硫胺素Thiamin HCl VB1、盐酸吡哆醇Pyridoxin HCl VB6、烟酸Nicotinic acid VB5或VPP、甘氨酸、泛酸钙Calcium pantothenate、腺嘌呤Adenine、L-半胱氨酸L-cysteine、生物素D-biotin
7.种子的春化
种子点样完毕后，将培养基密封，放入4℃冰箱内冷处理2~3天（春化）。
8.培养
将点种完成的培养基至于温度在为18℃至22℃之间的培养室中，一般高温以不超过25℃；光照强度控制在80的环境中进行培养。
9.观察与记录（种子的萌发率，侧根数，根长，真叶发生率）
（1）种子萌发率的观察与记录
发芽期间每隔24h记录一次，每次记录时间大约在每天下午五点到六点之间，持续一周左右。第3天统计发芽势（发芽势是指在发芽过程中日发芽种子数达到最高峰时，发芽的种子数占供测样品种子数的百分率，一般以发芽试验规定期限的最初1/3期间内的种子发芽数占供验种子数的百分比为标准），第7天统计种子的发芽率计算发芽指数（发芽指数比发芽率更能体现种子的活力问题）。
8．6 mg/L
86mg
③
CoCl2·6H2O
0．025mg/L
0．25mg
④
CuSO4·5H2O
0．025 mg/L
0．25mg
⑤
Na2MoO4·2H2O
0．25 mg/L
2．5mg
⑥
KI
0．83 mg/L
8．3 mg
⑦
H3BO3
6．2 mg/L
62 mg
注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml（即含0．25 mg的量）加入到母液中。
进行种子的春化
10月24日
观察种子的萌发率
10月25日
观察种子的萌发率，
拍照，统计侧根数以及真叶的生长
10月26日
观察种子的萌发率
10月27日
观察种子的萌发率，
拍照，统计侧根数以及真叶的生长
10月28日
观察种子的萌发率
10月29日
观察种子的萌发率
拍照，统计侧根数以及真叶的生长
10月30日
观察种子的萌发率
MS铁盐母液（100X）
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
化学药品
1升量
10升量
Na2·EDTA
37．3 mg/L
373 mg
FeSO4·7H2O
27．8 mg/L
278 mg
注意配制时，应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热。混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。
野生型拟南芥和gaap2突变体在幼苗期的生长差异
吴晓芹1011190010
张成飞10111910120
师范1班周四早上
1、摘要
主要是对拟南芥及其gaap2突变体种子的在平板上进行培养，通过对其萌发率、侧根数、根长在同一时间的测定来比较拟南芥和gaap2突变体在幼苗期的生长差异。
2、实验材料
野生型拟南芥和gaap2突变体种子各60粒
......
（如果培养的拟南芥染病毒需要重复实验）
三、实验器材（用途）
电子秤（配制溶液前称量），称量纸（若干），1根玻璃棒（搅拌）量筒（100ml和10ml各1个），胶头滴管（1个）、PH试纸、皮筋（或棉绳，若干）、牛皮纸（按锥形瓶口和烧杯口大小裁好）、记号笔（或标签纸）、1000ml容量瓶（定容溶剂）、1个洗耳球、移液管、1个刻度尺、数据记录本、4个200ml锥形瓶、移液枪（100UL～100UL，向EP管中加入试剂），1个1L烧杯（用作废液缸）
MS有机物母液（100X）
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
化学药品
1升量
10升量
①
烟酸
0．5 mg/L
5mg
②
盐酸吡哆素（VB6）
0．5 mg/L
5mg
③
盐酸硫胺素（VB1）
④
肌醇
100 mg/L
1 g
⑤
甘氨酸
2 mg/L
20mg
2.稀释成1/2MS培养基
在锥形瓶中先加入1.5g蔗糖（浓度为15g/L），0.7g琼脂（浓度为7g/L）和30mL左右的蒸馏水，然后按照配制50mL MS培养基的标准加入四种母液，用玻璃棒沾取少量的液体滴在PH试纸上，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整液体的pH至5.6—5.8，最后用蒸馏水将溶液定容为100mL。
4.3记录表格
（4）侧根的数目观察与测量
在完成根的测量之后，开始观察并记录侧根的数目，当侧根多大一定数量而无法分清的时候，停止记录。观察和记录频率为每24小时一次，时间定为每隔一天的下午五点到六点之间。
4.4记录表格
表一
表二
表三
（5）（选做）野生型拟南芥与gaap2突变体植株叶片光合效率的比较
将野生型拟南芥和gaap2突变体培养20天后，利用光合测定仪在相同的关照条件下测定其光合效率。
4.5记录表格
5.实验数据和图片的处理
萌发率的计算公式：发芽率（%）=种子的发芽数/种子总数×100%。
发芽指数 Gt、Dt相对应的每天发芽种子数与发芽日数
六、实验安排计划表
实验开始时间为：2013年10月21日
日期
实验内容
10月21日
下午，MS培养基的配制，以及灭菌处理实验器材
两小时后进行倒平板，点样处理。
3.灭菌操作
培养基及器具灭菌：培养基、无菌水需要在高压灭菌锅中灭菌。灭菌作用取决于温度，常用的灭菌温度为121℃，时间为30min，灭菌结束后待温度下降到50℃以下，才能取出已灭菌的培养基。可用同样方法对器具同时进行灭菌，包括：培养皿、解剖刀、剪子、滤纸、镊子等。
工作环境灭菌：接种前1ｈ打开超净工作台和棚面的紫外灯照射40min(或者接种前操作台通风20min)。杀菌结束后，先关掉棚面的紫外灯，再打开风机，最后关掉超净工作台上的紫外灯(不能将风机与台面上的紫外灯同时关闭或先关闭风机再开紫外灯)。
④
MgSO4·7H2O
370 mg/L
/L
1．7g
MS微量元素母液（100X）
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
化学药品
1升量
10升量
①
MnSO4·4H2O
（MnSO4·H2O）
22．3 mg/L
（21．4 mg/L）
223mg
②
ZnSO4·7H2O
4.2记录表格
表一
表二
表三
（3）真叶发生率观察与记录
拟南芥真叶和子叶可从这几个方面去判断：一是根据苗龄，正常拟南芥在0-5或者6天这个时间段没有真叶还没长出，所以你看到的只能是子叶；二是根据叶的作生位置，完整正常的拟南芥子叶是长在最外层和最下端；三是可以根据叶片表面是否有毛状体，但这要注意生态型，因为有的生态型，真叶也不会长毛状体。后面一个问题，子叶在种子幼苗早期形态建成过程会生长，就算长出真叶后也会继续生长，然后停止生长。所以，我们需要萌发后第七天之后，开始观察和记录拟南芥真叶的发生数，观察记录频率为每每隔2天48小时一次，时间定为每隔一天的下午五点到六点。用相机进行拍照，观察的指标：真叶的大小和数量。
4.在无菌环境下倒平板
待灭菌结束后，将所需物品放入超净工作台：三种实验材料、灭菌好的培养基、无菌水、培养皿、吸水纸、操作工具、空烧杯、75%酒精、废液缸、酒精灯、打火机、移液枪。然后将100mL的培养基平均分装在四个平板培养基，每个培养基大概25mL左右，分别标注为A、B、C、D。
进入接种室前，需要洗净手和手腕。进入超净工作台内需用75%酒精棉球擦拭手、手腕，再擦培养基瓶和超净工作台。
5.种子的消毒处理
种子装入1.5mlEP离心管内，60粒种子加1ml75%乙醇消毒1分钟；
吸去乙醇，加入1ml 5%次氯酸钠，震荡洗涤15-20分钟；
吸去次氯酸钠溶液，加入无菌蒸馏水清洗（清洗3次，每次洗完后稍离心，吸净水分）
6.点样
将消毒处理后的种子，可以利用微量进样器用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，一般行间距保持2cm左右，每个种子之间的距离大约为2.5cm左右，防止植株长大后影响根与子叶的发育(将培养基分割成两半，左半边点15个野生型拟南芥种子，右半边点15个gaap2突变拟南芥种子，四个平板中的培养基完全相同)。
微量元素：硼酸H3BO3、硫酸锰MnSO4.4H2O、硫酸锌ZnSO4.7 H2O、钼酸钠Na2MoO4.2 H2O、硫酸铜CuSO4.5 H2O、氯化钴CoCl2.6H2O、碘化钾KI、浓硫酸Concentrated H2SO4
注：NB培养基中用浓硫酸代替碘化钾
铁盐：乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA)、硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)
4个培养皿（2个用于栽培拟南芥，2个用于栽培拟南芥突变体），牙签（点样种子），1个2ml1.5mlEP管（装种子），封口膜（密封培养皿，放置细菌污染），超净台（接种时进行无菌操作），酒精灯，酒精棉球，离心机
四、实验试剂
大量元素：硝酸钾KNO3、硝酸铵NH4NO3、磷酸二氢钾KH2PO4、硫酸镁MgSO4.7H2O、氯化钙CaCl2.2H2O、硝酸钙Ca(NO3)2.4H2O、氯化钾KCl
葡萄糖，70%酒精，50％NaClO2，水
五、试验方法
1.配置MS培养基
MS大量元素母液（10X）
称10升量溶解在1升蒸馏水中。配1升培养基取母液100ml。
化学药品
1升量
10升量
①
NH4NO3
1650 mg/L
16．5g
②
KNO3
1900 mg/L
19．0g
③
CaCl2·2H2O
440 mg/L
4．4g
发芽指数 Gt、Dt相对应的每天发芽种子数与发芽日数；
发芽率（%）=种子的发芽数/种子总数×100%。
4.1记录表格
（2）根长的观察与测定
萌发完成第七天第5天之后，开始测定根长（附加苗长）和侧根数目，测定频率为每隔2天每48小时测定一次，时间是每隔一天的下午五点到六点；测定方法为：在培养基旁边放一个刻度清晰三角尺，然后用相机进行拍照，最后通过刻度尺测量计算根长。
有机成分：肌醇Myo-inositol、盐酸硫胺素Thiamin HCl VB1、盐酸吡哆醇Pyridoxin HCl VB6、烟酸Nicotinic acid VB5或VPP、甘氨酸、泛酸钙Calcium pantothenate、腺嘌呤Adenine、L-半胱氨酸L-cysteine、生物素D-biotin
7.种子的春化
种子点样完毕后，将培养基密封，放入4℃冰箱内冷处理2~3天（春化）。
8.培养
将点种完成的培养基至于温度在为18℃至22℃之间的培养室中，一般高温以不超过25℃；光照强度控制在80的环境中进行培养。
9.观察与记录（种子的萌发率，侧根数，根长，真叶发生率）
（1）种子萌发率的观察与记录
发芽期间每隔24h记录一次，每次记录时间大约在每天下午五点到六点之间，持续一周左右。第3天统计发芽势（发芽势是指在发芽过程中日发芽种子数达到最高峰时，发芽的种子数占供测样品种子数的百分率，一般以发芽试验规定期限的最初1/3期间内的种子发芽数占供验种子数的百分比为标准），第7天统计种子的发芽率计算发芽指数（发芽指数比发芽率更能体现种子的活力问题）。
8．6 mg/L
86mg
③
CoCl2·6H2O
0．025mg/L
0．25mg
④
CuSO4·5H2O
0．025 mg/L
0．25mg
⑤
Na2MoO4·2H2O
0．25 mg/L
2．5mg
⑥
KI
0．83 mg/L
8．3 mg
⑦
H3BO3
6．2 mg/L
62 mg
注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml（即含0．25 mg的量）加入到母液中。
进行种子的春化
10月24日
观察种子的萌发率
10月25日
观察种子的萌发率，
拍照，统计侧根数以及真叶的生长
10月26日
观察种子的萌发率
10月27日
观察种子的萌发率，
拍照，统计侧根数以及真叶的生长
10月28日
观察种子的萌发率
10月29日
观察种子的萌发率
拍照，统计侧根数以及真叶的生长
10月30日
观察种子的萌发率
MS铁盐母液（100X）
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
化学药品
1升量
10升量
Na2·EDTA
37．3 mg/L
373 mg
FeSO4·7H2O
27．8 mg/L
278 mg
注意配制时，应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热。混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。
野生型拟南芥和gaap2突变体在幼苗期的生长差异
吴晓芹1011190010
张成飞10111910120
师范1班周四早上
1、摘要
主要是对拟南芥及其gaap2突变体种子的在平板上进行培养，通过对其萌发率、侧根数、根长在同一时间的测定来比较拟南芥和gaap2突变体在幼苗期的生长差异。
2、实验材料
野生型拟南芥和gaap2突变体种子各60粒