薄层色谱法检查方法和应用
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黏结剂
无机黏结剂——石膏（硫酸钙），添加石膏的吸附剂 以字母“G”表示。没有黏结剂的吸附剂以字母“H” 表示。无机黏结剂的优点是：耐高温，耐酸碱，但涂 铺薄板动作要快，否则匀浆易凝固。薄层强度差。
13.05.2020
7
有机黏结剂——羧甲基纤维素钠（CMC）、淀粉、聚乙 烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方 便，但不能用浓硫酸作显色剂。
13.05.2020
4
薄层色谱系统
薄层板
未改性固定相
硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键
的物质有特别的选择性。
13.05.2020
5
表面改性固定相
疏水改性硅胶——化学键合烷基
薄层色谱法 检查方法和应用
13.05.2020
1
概述
▪ 1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一 种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色 谱法”一书，推动了这一技术的发展。
▪ 因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率 高，结果直观，很快被用作定性和半定量的 方法。
70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代 以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步 操作的仪器化，并实现了计算机化。
Leabharlann Baidu
13.05.2020
11
自动点样
Limomat IV 喷样仪——样品溶液通过气 流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层 上流下样品条带。
特点：适合于大量稀样品溶液的喷加； 条带宽度不超过2mm，有利于改善分 辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要 求薄层板强度高。
自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。
13.05.2020
2
薄层色谱与高效液相色谱的差别（特点）
固定相和流动相
TLC——流动相流动靠毛细作用力，流动相选择 较少受限制，固定相不用再生。而 HPLC是在封 闭的系统内，流动相流量靠泵控制，溶剂选择受 检测器限制，固定相需再生。
样品处理
TLC要求没有HPLC严格。
13.05.2020
药典规定：点样基线距底边2.0cm, 样点直 径2-4mm, 点间距离约为1.5-2.0cm。
13.05.2020
12
展开方式
多数采用直线形上行展开，薄层板水平角度以 75 为最佳。展开距离一般为10-15cm。
多次展开——一次展开未达满意分离时，可将 薄层板干燥后再次用同一种溶剂展开，可重复 多次，直到混合物分离为止。
1h 30min
13.05.2020
10
点样
要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非 极性，否则易使斑点扩展。
采用多次点加法，第二次点加时应待前一次 点加的溶剂挥发后再进行。
点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离 度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。
手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul）， 微量注射器。
亲水改性硅胶——引入氨基、氰基、二羟基等，薄 层板极性介于极性吸附剂和疏水改性剂之间（极性 次序：硅胶﹥氨基﹥氰基﹥二羟基﹥ 反相）。
表面改性纤维素——乙酰化纤维素
药典收载的固定相有：硅胶类、硅藻土类、氧 化铝类、微晶纤维素类等。颗粒直径一般要求 10 – 40 um。
13.05.2020
6
载板——玻璃板，放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数 小时，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净， 干燥，置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净 后不附水珠。
荧光黏结剂——在吸附剂中添加某种荧光指示剂， 常用的荧光指示剂
在254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、硫化镉、 阴极绿等。
在366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。
含有荧光指示剂的商品吸附剂以“F”表示，并以下标注 明其激发光波长。例 硅胶HF254
13.05.2020
8
薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起 的凹坑和龟裂。例：
2
13.05.2020
1 原点
14
离心展开——薄层板以适当转速旋转时，流动 相以适当速率转移到薄层上。该技术主要用于 制备色谱。
锲尖技术——圆形离心展开具有分辨率高的优 点，但需要有一定的仪器装置。采用锲尖技术 可以在一般的展开室中进行类似展开。
溶
剂
薄层被刮
前
掉部分
沿
13.05.2020
15
检测
3
色谱分离
TLC可同时分离多个样品，并可采用相同 或不同溶剂进行同向或双相多次展开，通 常采用正相色谱，色谱后衍生化方便。
HPLC一次只能分离一个样品，通常采用 反相色谱，色谱后衍生化受限制。
对污染物抗受力强
TLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸附物 质均无影响。
HPLC—— 颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸附 物质均有大的影响。
硅胶板（粒度10 ～40um）
硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水，研磨均匀， 至无结块和气泡，再加入比例量的水(一般为1份固定 相与3份水)，迅速研磨均匀，立即涂铺。
硅胶或硅胶G ——以CMC为黏合剂。配制0.2% ～ 0.7%CMC水溶液,放置过夜,使悬浮的纤维沉降,取上层 用来配制吸附剂匀浆。
分步展开——混合物性质差别较大时，一种流 动相不能有效分离时，可采用不同溶剂依次展 开不同距离。
13.05.2020
13
连续展开——使到达薄层上缘的溶剂不断蒸 发，连续展开以增加展开距离。因无溶剂前 沿，需要有个参照物同时展开，以计算相对 保留值。
二维展开——在两个垂直的方向上进行展开。 将样品点在薄层板的一个角上，展开适当距 离后，挥干溶剂，再将薄层板以与原展开方 向成90 的方向进行展开。
13.05.2020
9
反相薄层板制备——以不同链长的 正构烷烃为固 定液, 配制成适当浓度的溶液(如5%硅酮油乙醚溶 液), 浸渍硅胶板。
薄层板活化
涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前置适当 温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备 用。不同薄层活化条件略有不同，如：
硅胶 氧化铝
110℃ 110℃
物理方法——紫外光下显示荧光或荧光淬灭
化学方法——加化学试剂显色，要求显色稳定、 持久、专属、灵敏、线性良好。
斑点定位方法
碘蒸气法——灵敏、简便，为通用显色法。将 碘结晶放在密封的展开缸中，碘的升华，使缸 内充满紫色的碘蒸气。将展开后的板挥干溶剂 置碘缸中至薄层色谱上出现棕色斑点。放置时 间不宜太长，否则背景吸附剂也吸附碘，使信 噪比降低。用针头将斑点标记下来，放在通风 处使碘挥发。
无机黏结剂——石膏（硫酸钙），添加石膏的吸附剂 以字母“G”表示。没有黏结剂的吸附剂以字母“H” 表示。无机黏结剂的优点是：耐高温，耐酸碱，但涂 铺薄板动作要快，否则匀浆易凝固。薄层强度差。
13.05.2020
7
有机黏结剂——羧甲基纤维素钠（CMC）、淀粉、聚乙 烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方 便，但不能用浓硫酸作显色剂。
13.05.2020
4
薄层色谱系统
薄层板
未改性固定相
硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键
的物质有特别的选择性。
13.05.2020
5
表面改性固定相
疏水改性硅胶——化学键合烷基
薄层色谱法 检查方法和应用
13.05.2020
1
概述
▪ 1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一 种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色 谱法”一书，推动了这一技术的发展。
▪ 因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率 高，结果直观，很快被用作定性和半定量的 方法。
70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代 以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步 操作的仪器化，并实现了计算机化。
Leabharlann Baidu
13.05.2020
11
自动点样
Limomat IV 喷样仪——样品溶液通过气 流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层 上流下样品条带。
特点：适合于大量稀样品溶液的喷加； 条带宽度不超过2mm，有利于改善分 辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要 求薄层板强度高。
自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。
13.05.2020
2
薄层色谱与高效液相色谱的差别（特点）
固定相和流动相
TLC——流动相流动靠毛细作用力，流动相选择 较少受限制，固定相不用再生。而 HPLC是在封 闭的系统内，流动相流量靠泵控制，溶剂选择受 检测器限制，固定相需再生。
样品处理
TLC要求没有HPLC严格。
13.05.2020
药典规定：点样基线距底边2.0cm, 样点直 径2-4mm, 点间距离约为1.5-2.0cm。
13.05.2020
12
展开方式
多数采用直线形上行展开，薄层板水平角度以 75 为最佳。展开距离一般为10-15cm。
多次展开——一次展开未达满意分离时，可将 薄层板干燥后再次用同一种溶剂展开，可重复 多次，直到混合物分离为止。
1h 30min
13.05.2020
10
点样
要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非 极性，否则易使斑点扩展。
采用多次点加法，第二次点加时应待前一次 点加的溶剂挥发后再进行。
点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离 度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。
手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul）， 微量注射器。
亲水改性硅胶——引入氨基、氰基、二羟基等，薄 层板极性介于极性吸附剂和疏水改性剂之间（极性 次序：硅胶﹥氨基﹥氰基﹥二羟基﹥ 反相）。
表面改性纤维素——乙酰化纤维素
药典收载的固定相有：硅胶类、硅藻土类、氧 化铝类、微晶纤维素类等。颗粒直径一般要求 10 – 40 um。
13.05.2020
6
载板——玻璃板，放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数 小时，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净， 干燥，置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净 后不附水珠。
荧光黏结剂——在吸附剂中添加某种荧光指示剂， 常用的荧光指示剂
在254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、硫化镉、 阴极绿等。
在366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。
含有荧光指示剂的商品吸附剂以“F”表示，并以下标注 明其激发光波长。例 硅胶HF254
13.05.2020
8
薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起 的凹坑和龟裂。例：
2
13.05.2020
1 原点
14
离心展开——薄层板以适当转速旋转时，流动 相以适当速率转移到薄层上。该技术主要用于 制备色谱。
锲尖技术——圆形离心展开具有分辨率高的优 点，但需要有一定的仪器装置。采用锲尖技术 可以在一般的展开室中进行类似展开。
溶
剂
薄层被刮
前
掉部分
沿
13.05.2020
15
检测
3
色谱分离
TLC可同时分离多个样品，并可采用相同 或不同溶剂进行同向或双相多次展开，通 常采用正相色谱，色谱后衍生化方便。
HPLC一次只能分离一个样品，通常采用 反相色谱，色谱后衍生化受限制。
对污染物抗受力强
TLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸附物 质均无影响。
HPLC—— 颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸附 物质均有大的影响。
硅胶板（粒度10 ～40um）
硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水，研磨均匀， 至无结块和气泡，再加入比例量的水(一般为1份固定 相与3份水)，迅速研磨均匀，立即涂铺。
硅胶或硅胶G ——以CMC为黏合剂。配制0.2% ～ 0.7%CMC水溶液,放置过夜,使悬浮的纤维沉降,取上层 用来配制吸附剂匀浆。
分步展开——混合物性质差别较大时，一种流 动相不能有效分离时，可采用不同溶剂依次展 开不同距离。
13.05.2020
13
连续展开——使到达薄层上缘的溶剂不断蒸 发，连续展开以增加展开距离。因无溶剂前 沿，需要有个参照物同时展开，以计算相对 保留值。
二维展开——在两个垂直的方向上进行展开。 将样品点在薄层板的一个角上，展开适当距 离后，挥干溶剂，再将薄层板以与原展开方 向成90 的方向进行展开。
13.05.2020
9
反相薄层板制备——以不同链长的 正构烷烃为固 定液, 配制成适当浓度的溶液(如5%硅酮油乙醚溶 液), 浸渍硅胶板。
薄层板活化
涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前置适当 温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备 用。不同薄层活化条件略有不同，如：
硅胶 氧化铝
110℃ 110℃
物理方法——紫外光下显示荧光或荧光淬灭
化学方法——加化学试剂显色，要求显色稳定、 持久、专属、灵敏、线性良好。
斑点定位方法
碘蒸气法——灵敏、简便，为通用显色法。将 碘结晶放在密封的展开缸中，碘的升华，使缸 内充满紫色的碘蒸气。将展开后的板挥干溶剂 置碘缸中至薄层色谱上出现棕色斑点。放置时 间不宜太长，否则背景吸附剂也吸附碘，使信 噪比降低。用针头将斑点标记下来，放在通风 处使碘挥发。