沙门氏菌血清学鉴定

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沙门氏菌血清学鉴定

篇一：沙门氏菌生化鉴定

沙门氏菌生化试验判定步骤

三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、

蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。底层产酸：是因为细菌分解糖类物质

使酚红退色变黄。

斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般８小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。

2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生h2s。

4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生h2s。

3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生h2s，多数产气。赖氨酸脱羧酶试验

1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的ph。

2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。阴性试验管则始终呈黄色。

氨基酸脱羧酶试验(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基

变为碱性，可用指示剂指示出来。(2)方法：将待检菌

分别接种于1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖至

少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，观察结果。(3)结果：若为溴甲酚紫指示剂，则试验管紫色为阳性，黄色为阴性，对照管应为黄色。(4)应用：主要用于某些细菌种间

的鉴别，如赖氨酸用于产气肠杆菌（阳性）与阴沟肠杆菌（阴性）；鸟氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和克雷伯菌（阴性）；精氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和产气肠杆菌（阴性）等。

精氨酸双水解酶试验(1)原理：精氨酸经两次水解后,生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均为碱性物质，故可使培养基变碱，用指示剂指示出来。(2)方法：将待检菌接种于试验培养上，置35℃孵箱孵育1~4d，观察结果。(3)结果：溴甲酚紫指示剂呈紫

色为阳性，酚红指示剂呈红色为阳性。黄色为阴性。(4)应用：主要用于肠杆菌科及假单胞菌属的鉴定。

非发酵菌：是一大群不发酵葡萄糖或以氧化形式利用糖、需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌。

表2

进行判定。

反应3：补做onpg。onpg为阴性，同时赖氨酸脱羧酶为阳性；赖氨酸脱羧酶为阴性时为甲型副伤寒沙门氏菌。

必要时按表4进行沙门氏菌生活群的鉴别

篇二：沙门氏菌属诊断血清说明书

沙门氏菌属诊断血清学试验操作程序

1.目的

制定沙门氏菌属诊断血清使用程序，指导对沙门氏菌属进行血清学分型。

2.原理

用沙门氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合

免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理供沙门氏菌属常见菌型定型。

3.试剂及实验设备

3.1沙门氏菌属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为11种的沙

门氏菌属诊断血清

3.2试剂保存：2~8°c避光保存，防止冻结，在有效期内使用。

3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、

电热高温接种灭菌器。

4.程序步骤

4.1将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。

4.2选择经初步生化检测符合沙门菌生物特性的疑似菌

落。4.3菌群分析

将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，先用o多价A~F 群血清进行凝集试验，如阳性，提示待检菌可能属于A~F群范围内，因97%以上的沙门菌都包括在A~F6个o群之内，如果不凝再使用其他o抗血清进行凝集试验，如与其中一种抗血清凝集，待检菌即属于相应的菌群。若与多价o抗血清不凝集，有如下3种可能：①含有Vi抗原；②A~Fo群之外的沙门菌；③沙门氏菌属以外的细菌。可按下述方法进一步检测，将纯菌落用无菌生理盐水洗下，制成浓菌液，再分成2份。1份不经处理，为活菌液，另1份放100°c水浴中30min，为加热菌液。取活菌与Vi抗血清，取加热菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清、A~F多价o抗血清分别进行玻片凝集试验。根据结果作如下分析：①活菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清凝集者，可能属于c群或D群菌，用o7和o9抗血清定群；②活菌与Vi抗血清不凝，可能属于A~Fo 群之外的沙门菌或其他

菌属细菌，需进行生化试验定属，若符合沙门氏菌属细菌特征，可送cDc鉴定；③加热菌与Vi抗血清凝集，而与A~F多价o抗血清不凝集者，可报告为阴性。4.4血清型分析

菌群确定后，分析被检菌的鞭毛抗原成分。先分析第1相鞭毛抗原，再分析第2相鞭毛抗原。第1相鞭毛抗原分析：