硝酸还原酶(NR)活性的测定

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试剂(ml)
试管号
1
0 1 2 2 0
2
0.1 0.9 2 2 0.5
3
0.2 0.8 2 2 1
4
0.4 0.6 2 2 2
5
0.6 0.4 2 2 3
6
0.8 0.2 2 2 4
7
1 0 2 2 5
NaNO2标准液(5微克/ml) 蒸馏水 对氨基苯磺酸(或磺胺) 盐酸萘乙二胺(或α-萘胺) 每管含NaNO2的微克数
硝酸还原酶(NR)活性的测定
制作人: 车永梅 单 位: 生命科学学院
一、实验目的
了解硝酸还原酶在氮代谢中的地位,掌握硝酸还
原酶活性测定的方法。
二、实验原理
植物吸收的硝酸根离子,首先通过硝酸还原酶的 催化,被还原成亚硝酸根离子。其反应如下: NO3-+NADH+H+ → NO2-+NAD++H2O 产生的亚硝酸根离子可以从组织内渗到外界溶液中, 测定反应液中亚硝酸含量,通过一定公式计算就可 得硝酸还原酶活性的大小。
2. 取样
3. NaNO2 含量测定
五、实验结果
按下Baidu Nhomakorabea计算酶活性: NR活性(gNO2-/gFW· h)=
查表值×(46/69) 材料鲜重(g)×反应时间
六、思考题
1.NR活性测定时取材前为什么要进行一段时间光合
作用? 2.测定酶促反应时为什么要在暗处保温? 3.NR活性测定时加入磺胺、盐酸萘乙二胺和KNO3 的作用各是什么?
亚硝酸离子的测定用比色法。其反应如下: 对氨基苯磺酸(或磺胺)+2H++NO2- → 叠氮化合物 叠氮化合物+α-萘胺(或盐酸萘乙二胺) → 偶氮化 合物(红色) 生成的红色偶氮化合物在520nm波长比色,其光密 度值与NO2-含量成正比。
二、实验材料
待测植物组织
三、方法步骤
1.绘制标准曲线:
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