睾酮检测

睾酮
测定步骤
用ACCESS®免疫分析系统
定量检测人血清睾酮浓度
内容表
原理 2 标本采集 2 试剂和仪器 3 定标 5 质量控制 5 检测步骤 5 检测结果 6 开始检测 6 检测注意事项7 参考文献8
Beckman Instruments, Inc. ∙ Chaska, MN 55318
原理
检测原理
Access 睾酮的检测是一种竞争结合的酶免疫检测。

样品和样品处理液，鼠单克隆抗睾酮抗体、睾酮-碱性磷酸酶结合物和包被了羊抗鼠多克隆抗体的磁性颗粒一起加入到反应管中。

样品中的睾酮通过样品处理液的作用从转运蛋白上释放，与睾酮-碱性磷酸酶结合物竞争结合有限的特异性睾酮单克隆抗体的结合位点，形成的抗原-抗体复合物通过捕捉抗体结合到磁性颗粒表面。

在反应管中孵化后，反应管被传送到磁性分离区域进行多次冲洗，去处未和固相结合的其它成分。

最后在反应管中加入化学发光底物（Lumi-Phos* 530）, 已与固相结合的碱性磷酸酶会使该底物发出光子并被光电比色计所检测。

最后，对照仪器中储存的多点定标曲线而得出样品中的睾酮浓度，反应产生的光子与样品中睾酮的含量成反比。

概述
男性睾酮主要由成人睾丸间质细胞分泌，主要受由黄体生成素（LH）的控制。

血清睾酮主要以球蛋白结合性激素形式存在（SHBG），也有一部分与白蛋白松弛结合以及以游离形式存在。

男性总睾酮水平的异常低下预示性腺功能减退，垂体功能减退，高泌乳素血症，肾功能衰竭，肝硬化或“克莱菲尔”综合征。

肾上腺和睾丸肿瘤，先天性肾上腺增生或下丘脑-垂体-睾丸轴异常可导致男性睾酮水平升高。

在女性，睾酮由卵巢，肾上腺和外周脂肪细胞产生，在血清中的浓度大约为男性的十分之一，和男性一样，血清睾酮的主要形式为SHBG，白蛋白结合和少量游离状态存在。

女性总睾酮水平的持续升高预示多囊卵巢综合征（PCOS），卵泡膜细胞增殖症，肾上腺和卵巢肿瘤，先天性肾上腺增生和其它一些下丘脑-垂体-睾丸轴功能异常。

标本采集
A. 推荐使用血清和肝素抗凝血浆标本，不推荐使用EDTA抗凝血浆。

B. 遵循国家委员会制定的临床实验室标准推荐的以下标本处理、运行和储存步骤(19，10)：
1. 用真空采样管采集所有血液标本时须遵守常规注意事项。

2. 离心前使标本完全自然形成凝块。

3. 全程保证样品管的密闭状态。

4. 离心获得血清后的两小时内，至少将500 μl血清或血浆转移到一个密闭的储存试管中备用。

5. 储存样品，保持样品管完全密闭，在室温(15 到 30°C)条件下不超过8小时。

6. 如果8小时内不能完成检测即应将标本放入2 到 8°C冰箱冷藏。

7. 如果24小时内不能完成检测即应将标本放入-20°C冰箱冻藏。

8. 标本只能复融一次。

试剂和必须品
Beckman Instruments, Inc.
4300 S Harbor Blvd
Fullerton, CA 92834
A. 货号：33560， 100 个测试，2盒，50测试/盒
现成可用，在2到10°C冰箱中顶端朝上存放，试剂盒必须在2到10°C冰箱保存2小时后才能放入仪器中使用或保存。

贮存在2~10°C在保质期内稳定，试剂盒被吸取使用后，在2 到10°C条件下可稳定28天，一旦发现有试剂盒上弹性体破坏或质控结果超出范围等现象出现即代表试剂盒失效。

所有抗血清均为多抗，除非有专门说明。

1. R1a: 含包被有羊抗鼠IgG 的磁性颗粒；含睾酮和碱性磷酸酶结合物的小牛血清白蛋白
(BSA)，< 0.1% 的叠氮钠和0.1% ProClin** 300。

2. R1b: 样品处理液，< 0.1% 的叠氮钠。

3. R1c: 单克隆抗睾酮抗体（鼠），小牛血清白蛋白(BSA)，< 0.1% 的叠氮钠和0.1% ProClin**
300。

B. Access睾酮定标品
货号：33565：S0-S5， 2.5 ml/瓶
定量检测的定标是用已知分析浓度的标本像病人标本一样进行检测以观察检测结果。

测定值和已知浓度之间的数学关系就构成了定标曲线。

可将样本检测中得到的光量子值根据数据关系和定标曲线转化成特定的分析浓度。

现成可用；2~10°C下储存，使用前轻轻颠倒混匀，避免产生气泡，在2~10℃环境可稳定到定标品瓶标
签上标出的失效期。

质控结果落到允许的范围之外是定标品失效的信号。

定标操作步骤请参见Access免疫分析系统的《操作指南》和《参考手册》。

1. S0: 小牛血清白蛋白(BSA)，< 0.1% 的叠氮钠和0.5% ProClin** 300；
2. S1, S2, S3, S4, S5: 小牛血清白蛋白(BSA)和 < 0.1% 的叠氮钠以及0.5% ProClin** 300 ，分别
含约为0.5，1.5，4.0，8.0 和16.0ng//ml (0，1.7，5.2，13.9，27.8和55.5nmol/L) 的睾睾酮。

3. 定标卡：1张。

C. Access 底物
货号为 81906: 4 瓶x 130 ml/瓶。

现成可用，下表注明了储存条件和稳定性，底物本底检测值的增高提示底物的不稳定。

前提储存稳定性
未开瓶 2 到8°C 可一直保存到标签注明的
失效期
使用前的平衡(未开瓶) 15 到30°C (室温条件) 至少18 小时
最长 14天
使用中(已开瓶) 内部底物支持位置最长 5天
使用中 (已开瓶) 外部液体架的底物位置最长14天
R2 底物：Lumi-Phos 530 (缓冲液中包含有dioxetane Lumigen* PPD,荧光素和离子表面活性剂量)。

按照Access仪器操作指南中介绍的使用方法使用。

D. Access 冲洗缓冲液
货号：81907 4 x 1950 ml/箱
现成可用。

在室温条件下(15 到30°C)可稳定到包装上注明的失效期。

底物本底检测值的增高或在“双抗”体夹心法中的0点定标品的相关发光值的增高则提示冲洗缓冲液的不稳定。

R3 冲洗缓冲液：Tris 盐缓冲液，离子表面活性剂，< 0.1 %的叠氮钠和 0.1% ProClin 300。

按照Access仪器操作指南中介绍的使用方法使用。

E. 质控品：商用质控血清（不正常浓度和正常浓度值）
F. Access 免疫分析系统和消耗品
G. 警告和注意点
1. 只可用于体外诊断。

2. 病人样品和血制品应按照阐述的最低危险性的常规操作进行操作，将这些物品当作潜在的传染
物品，按照常规操作注意点和优秀实验室的操作常规进行处理，无论该些物质是原型、处理物
或得到保证前。

用合适的消毒剂进去污。

按照各实验室规定和操作规程存放和处理该些物品及
其容器。

3. 试剂中所含的叠氮钠可以和铅和铜反应形成有高度腐蚀性的重氮金属盐，如果被溅到含该物质
的液体，则可用大量水冲洗来防止重氮的堆积(4)。

4. ProClin 300 是潜在的皮肤过敏物质，避免溅到或洒到皮肤和衣服上，如果发生，用清水彻底冲
洗。

5. 原料的安全数据资料可向公司索取。

定标
每个测试均需有效的定标曲线，睾酮的定标曲线有效期为14天，参见操作向导和参考手册来了解定标步骤。

Access 睾酮测试提供了6个浓度点的定标品，0 和大概0.5, 1.5, 4.0, 8.0, and, 16.0 ng/mL的睾酮，由睾酮和小牛血清白蛋白(BSA)经称重法合成，睾酮的定标品参照USP标准制备，测定的定标曲线的有效期为14天。

质控
质控品与样品的性质类似，是监测免疫化学分析正常工作的必须品。

因为样品可在有随机检测能力的仪器中随机检测而非批量检测，所以质控品应该包含在整个24小时的时间段内。

商用质控品将包括至少2个浓度质控品，按照厂家规定进行复溶和保存。

在正式使用前每个实验室均应建立各自得平均值和可接受范围，质控结果没有落在可接收范围提示检验结果无效。

重新检查位于上一次有效质控值到这次无效质控值之间所有得检测结果。

参见操作指南来了解如何回顾质控结果。

步骤
A. Access 仪器
参见 Access 免疫分析系统的操作向导来准备和操作。

B. 分析步骤
1. 从主菜单进入测试要求屏幕。

2. 对每个样品，设置一个样品架上的位置，输入样品信息和需检测的测试名称。

3. 将样品管（杯）放入样品架中已设定的位置。

4. 按下运行键（ Run）开始检测。

5. 仪器会提醒操作者运行所需的定标。

6. 系统会自动计算检测结果。

结果
A. 系统软件会按照四参数曲线计算模式（four-parameter logistics curve math model）自动计算病人
结果。

样品中检测到的光量子值会与储存的标准曲线对应求得相应结果，病人检测结果可通过“样品结果菜单”（ Sample Results screen）回顾，如何回顾结果请参见操作规程。

1. 每个实验室应该根据特殊人群建立各自的参考值范围。

2. 使用Access 睾酮测定对健康男女性的血清或肝素抗凝血浆进行睾酮测定，下面的表格显示了一个人群
的睾酮测定的浓度范围。

3.血清测定值和血浆测定值不能相互替换；
4.使用EDTA 抗凝血浆会导致测定结果错误，所以不能用EDTA 抗凝血浆进行测定。

操作规程解释
A. 关于安装介绍、开机、操作原理、系统主要特点、操作指导、定标步骤、操作限制和注意事项、危
险事项、保养和故障的排除等请参见操作向导和参考手册。

B. 在装入仪器前，将试剂轻轻的颠倒混匀几次，不要颠倒已用试剂，通过轻轻旋转的方式混匀试剂。

C. 每次测试使用11μI的样品，但要考虑到样品杯和样品管的死体积，各种容器的死体积大小请参见操
作手册中的的样品容器章节。

D. 样品结果的报告单位为μg /ml，但是，系统也可报告国际系统单位(SI 单位，μmol/l)，参见《参考
手册》的“系统设置”章节来了解单位的互换。

手工换算将μg /ml乘以3.47 即可得到国际单位。

检测注意事项
A. 样品的浓度如果在分析范围内（0.1~16ng/ml）可被精确的检测。

如果样品的睾酮浓度低于检测范围的低限，则报告结果为小于0.1 ng/ml。

如果样品中的睾酮浓度高于Access睾丸激素测定的定标S5，则报告结果为大于16 ng/ml，或着用S0对样品作一比一稀释，在得出稀释样品结果后乘2。

具体的操作和稀释前样品的处理详见《操作指南》。

B. 人抗大鼠抗体(HAMA)可能会出现在已接受大鼠源性单抗免疫药物治疗的病人体内。

另外，能和大
鼠或其它免疫球蛋白结合的异嗜性抗体可能会出现在病人样品中。

这个分析方法已通过特殊的方法来尽量减少这些抗体对该分析方法的影响。

但是，在已知病人含有这些抗体时须小心评估检测结果。

C. 对Access睾酮测定的结果评估解释时，应结合临床的所有资料包括病史以及其他的一些检测项目。

Access®是 Beckman Coulter公司商标。

*Lumi-Phos 530 and Lumigen是 Lumigen公司商标。

**ProClin 300 是 Rohm 和 Haas 公司及其下属公司得商标。

*** Cosmocil CQ 是 Zeneca有限公司得商标。

参考文献
Beckman Coulter, Inc. Access Testosterone product insert, Fullerton, CA 92834, 171294.
Beckman Coulter, Inc. Access Substrate product insert, Fullerton, CA 92834, 170279. Beckman Coulter, Inc. Access Wash Buffer product insert, Fullerton, CA 92834, 170278.
1.Wilson, JD, Foster, DW (Eds) Williams Textbook of Endocrinology, 8th Edition, W.B.
Saunders, Philadelphia, Pennsylvania 19106, 1992, page 822-832.
2.Brutis, CA, Ashwood, ER (Eds) Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 4th
Edition W.B. Saunders, Philadelphia, Pennsylvania 19106, 1996, page 671 - 672. 3.Cowan BD, and Seifer, DB (Eds) Clinical Reproductive Medicine, Lippincott-Raven,
Philadelphia, Pennsylvania 19106, page 98-100.
4.Approved Standard – Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens
by Venipuncture – H3-A4. 1998. National Committee for Clinical Laboratory
Standards, 4th edition.
5.Approved Guideline – Procedures for the Handling and Processing of Blood
Specimens, H18-A2. 1999. National Committee for Clinical Standards.
6.Manual Guide – Safety Management, No. CDC-22, Decontamination of Laboratory
Sink Drains to Remove Azide Salts. April 30, 1976. Atlanta GA: Centers for Disease Control.
7.Cembrowski GS, Carey RN. Laboratory Quality Management: QC & QA. ASCP
Press, Chicago, IL, 1989.
8.Hansen HJ, et al. HAMA interference with murine monoclonal antibody-based
immunoassays. J Clin Immunoassay 1993; 16: 294-299.
9.Levinson SS. The nature of heterophilic antibodies and the role in immunoassay
interference. J Clin Immunoassay 1992; 15: 108-115.
贝克曼公司不会自动转送修定的NCCLS操作规程，如果你收到了修定后的检测项目内页，请与技术支持联系以决定NCCLS操作规程是否已被修订。

Printed in U.S.A.。