睾酮检测
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睾酮
测定步骤
用ACCESS®免疫分析系统
定量检测人血清睾酮浓度
内容表
原理 2 标本采集 2 试剂和仪器 3 定标 5 质量控制 5 检测步骤 5 检测结果 6 开始检测 6 检测注意事项7 参考文献8
Beckman Instruments, Inc. ∙ Chaska, MN 55318
原理
检测原理
Access 睾酮的检测是一种竞争结合的酶免疫检测。样品和样品处理液,鼠单克隆抗睾酮抗体、睾酮-碱性磷酸酶结合物和包被了羊抗鼠多克隆抗体的磁性颗粒一起加入到反应管中。样品中的睾酮通过样品处理液的作用从转运蛋白上释放,与睾酮-碱性磷酸酶结合物竞争结合有限的特异性睾酮单克隆抗体的结合位点,形成的抗原-抗体复合物通过捕捉抗体结合到磁性颗粒表面。在反应管中孵化后,反应管被传送到磁性分离区域进行多次冲洗,去处未和固相结合的其它成分。最后在反应管中加入化学发光底物(Lumi-Phos* 530), 已与固相结合的碱性磷酸酶会使该底物发出光子并被光电比色计所检测。最后,对照仪器中储存的多点定标曲线而得出样品中的睾酮浓度,反应产生的光子与样品中睾酮的含量成反比。
概述
男性睾酮主要由成人睾丸间质细胞分泌,主要受由黄体生成素(LH)的控制。血清睾酮主要以球蛋白结合性激素形式存在(SHBG),也有一部分与白蛋白松弛结合以及以游离形式存在。男性总睾酮水平的异常低下预示性腺功能减退,垂体功能减退,高泌乳素血症,肾功能衰竭,肝硬化或“克莱菲尔”综合征。肾上腺和睾丸肿瘤,先天性肾上腺增生或下丘脑-垂体-睾丸轴异常可导致男性睾酮水平升高。
在女性,睾酮由卵巢,肾上腺和外周脂肪细胞产生,在血清中的浓度大约为男性的十分之一,和男性一样,血清睾酮的主要形式为SHBG,白蛋白结合和少量游离状态存在。女性总睾酮水平的持续升高预示多囊卵巢综合征(PCOS),卵泡膜细胞增殖症,肾上腺和卵巢肿瘤,先天性肾上腺增生和其它一些下丘脑-垂体-睾丸轴功能异常。
标本采集
A. 推荐使用血清和肝素抗凝血浆标本,不推荐使用EDTA抗凝血浆。
B. 遵循国家委员会制定的临床实验室标准推荐的以下标本处理、运行和储存步骤(19,10):
1. 用真空采样管采集所有血液标本时须遵守常规注意事项。
2. 离心前使标本完全自然形成凝块。
3. 全程保证样品管的密闭状态。
4. 离心获得血清后的两小时内,至少将500 μl血清或血浆转移到一个密闭的储存试管中备用。
5. 储存样品,保持样品管完全密闭,在室温(15 到 30°C)条件下不超过8小时。
6. 如果8小时内不能完成检测即应将标本放入2 到 8°C冰箱冷藏。
7. 如果24小时内不能完成检测即应将标本放入-20°C冰箱冻藏。
8. 标本只能复融一次。
试剂和必须品
Beckman Instruments, Inc.
4300 S Harbor Blvd
Fullerton, CA 92834
A. 货号:33560, 100 个测试,2盒,50测试/盒
现成可用,在2到10°C冰箱中顶端朝上存放,试剂盒必须在2到10°C冰箱保存2小时后才能放入仪器中使用或保存。贮存在2~10°C在保质期内稳定,试剂盒被吸取使用后,在2 到10°C条件下可稳定28天,一旦发现有试剂盒上弹性体破坏或质控结果超出范围等现象出现即代表试剂盒失效。
所有抗血清均为多抗,除非有专门说明。
1. R1a: 含包被有羊抗鼠IgG 的磁性颗粒;含睾酮和碱性磷酸酶结合物的小牛血清白蛋白
(BSA),< 0.1% 的叠氮钠和0.1% ProClin** 300。
2. R1b: 样品处理液,< 0.1% 的叠氮钠。
3. R1c: 单克隆抗睾酮抗体(鼠),小牛血清白蛋白(BSA),< 0.1% 的叠氮钠和0.1% ProClin**
300。
B. Access睾酮定标品
货号:33565:S0-S5, 2.5 ml/瓶
定量检测的定标是用已知分析浓度的标本像病人标本一样进行检测以观察检测结果。测定值和已知浓度之间的数学关系就构成了定标曲线。可将样本检测中得到的光量子值根据数据关系和定标曲线转化成特定的分析浓度。
现成可用;2~10°C下储存,使用前轻轻颠倒混匀,避免产生气泡,在2~10℃环境可稳定到定标品瓶标
签上标出的失效期。质控结果落到允许的范围之外是定标品失效的信号。
定标操作步骤请参见Access免疫分析系统的《操作指南》和《参考手册》。
1. S0: 小牛血清白蛋白(BSA),< 0.1% 的叠氮钠和0.5% ProClin** 300;
2. S1, S2, S3, S4, S5: 小牛血清白蛋白(BSA)和 < 0.1% 的叠氮钠以及0.5% ProClin** 300 ,分别
含约为0.5,1.5,4.0,8.0 和16.0ng//ml (0,1.7,5.2,13.9,27.8和55.5nmol/L) 的睾睾酮。
3. 定标卡:1张。
C. Access 底物
货号为 81906: 4 瓶x 130 ml/瓶。
现成可用,下表注明了储存条件和稳定性,底物本底检测值的增高提示底物的不稳定。
前提储存稳定性
未开瓶 2 到8°C 可一直保存到标签注明的
失效期
使用前的平衡(未开瓶) 15 到30°C (室温条件) 至少18 小时
最长 14天
使用中(已开瓶) 内部底物支持位置最长 5天
使用中 (已开瓶) 外部液体架的底物位置最长14天
R2 底物:Lumi-Phos 530 (缓冲液中包含有dioxetane Lumigen* PPD,荧光素和离子表面活性剂量)。