9-标准菌株的使用和保存

标准菌株的使用和保存

标准菌株的使用和保存

标准菌株的来源和保存

标准菌株要求

必须是形态、染色反应、生理生化及血清学

特性典型而稳定的菌株

实验结果重复性好，极少发生变异

国际社会认可

来源于专门机构

对于从标准菌种保藏中心或经ISO9000 质量管理体系认证或其它有效的认证的商业机构获得原包装的质控菌株，复苏和使用应按照制造商提供的使用说明进行。标准菌株的来源主要有以下几种：

对于从标准菌种保藏中心或经ISO9000 质量管理体系认证或其它有效的认证的商业机构获得原包装的质控菌株，复苏和使用应按照制造商提供的使用说明进行。标准菌株的来源主要有以下几种：

美国典型菌种保藏中心ATCC

中国医学细菌保藏管理中心[CMCC(B)]

英国国家菌种保藏中心NCTC

普通微生物菌种保藏管理中心

（CCGMC）中科院微生物所

•购买标准菌株时，要对标准菌株进行必要的验收和检查。验收内容包括菌株种类与购买者要求是否一致；包装、外观是否正常，标识是否清晰；有无证书；是否在标记有效期内等。如有可能进行必要的比对。

标准菌株登记及管理制度

•建立标准菌株的登记、领用及管理制度，保留每一种标准菌株的证书，附带文件以及核对记录。保存菌种容器外加贴标签（内容为名称、编号、接收日期），妥善保管。标准菌株应存放至特定场所并由专人保管，此人必须受过专业培训，有足够的菌种保存经验。须按标签或所附说明书妥善保存，并上锁，以保证安全，防止意外。保存条件应符合要求，有特殊要求的标准菌株，应有特殊的保存场所。对保存的场所及设施应进行日常的检查和维护，并保留监控记录以确保正常运行。

常用的质控菌株代号

金黄色葡萄球菌ATCC 29213粪肠球菌ATCC29212

铜绿假单胞菌ATCC 27853创伤弧菌ATCC27562

大肠埃希氏菌ATCC 25922蜡样芽胞杆菌CMCC(B)63303

单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115蕈状芽胞杆菌ATCC10206

阪崎肠杆菌ATCC29544大肠杆菌O157：H7 NCTC12900

鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028福氏志贺氏菌CMCC（B）51572

产气荚膜梭菌ATCC13124枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC9372副溶血性弧菌ATCC17802小肠结肠炎耶尔森氏菌CMCC(B)52204

枯草芽胞杆菌ATCC6633

普通变形杆菌CMCC(B)49027

化脓性链球菌ATCC 19615沙门菌H9812（PFGE鉴定菌株）

质控菌株

•标准菌株直接从官方菌种保藏机构获得并至少定义到属或种的水平的菌株。按菌株特性进行分类和描述，最好来源于食品或水的菌株。

•储备菌株从标准储备菌株转接一代获得的培养物。

•工作菌株由标准储备菌株、储备菌株或标准物质（经证明或未经证明）转接一代获得的菌株。

实验室制备的标准储存菌株

•将标准菌株在实验室转接一代后得到的一套完全相同的独立菌株。•用于性能测试的标准储存菌株，在保存和使用时应注意避免交叉污染，减少菌株突变或发生典型的特性变化；标准储备菌株应制备多份，并采用超低温（-70℃）或冻干的形式保存。在较高温度下贮存时间应缩短。标准储存菌株用作培养基的测试菌株时应在文件中充分描述其生长特性。标准储存菌株不应用来制备标准菌株。

储存菌株

•从标准储备菌株转接一代获得的培养物。储存菌株通常从冻干或超低温保存的标准储存菌株进行制备。制备储存菌株应避免导致标准储存菌株的交叉污染和(或)退化。制备储存菌株时，应将标准储存菌株制成悬浮液转接到非选择培养基中培养，以获得特性稳定的菌株。对于商业来源的菌株，必须严格按照制造商的说明执行。储存菌株不应用来制备标准储存菌株或标准菌株。

制作标准储存菌株的流程图

测试菌株

•——具典型反应特性的生长良好的阳性菌株；•——弱阳性菌株（对培养基中选择剂等试剂敏感性强的菌株）；

•——不具有该特性的阴性菌株；

•——部分或完全受抑制的菌株。

标准储存菌株制备工作菌株

工作菌株

•工作菌株由储存菌株或标准储存菌株制备。工作菌株不应用来制作标准菌株、标准储存菌株或储存菌株。

冷冻干燥法：

•最理想的保存方法，不改变菌种性状，保存时间长•手续繁琐，需专门的冷冻干燥设备

冰冻保存法：

•此法较简单，将细菌混悬于脱纤维羊血或脱脂牛奶中，置液氮或-20℃冰箱保存

•脑心浸液(30%甘油)冻存

•但细菌经多次转种，性状可能发生变异

培养基保存法

•普通琼脂斜面保存法：适于一般细菌的保存，置4℃冰箱可保存1个月。

•血琼脂斜面保存法：适于链球菌，可半月转种一次。

•半固体穿刺法：穿刺培养基并加液体石蜡置4℃冰箱可保存3-6个月，适用于肠杆菌科细菌。

标准菌株的保存

•多孔磁珠保藏

菌株保藏管内含特制的小珠（20-25颗）和特殊液体，只需将培养好的菌株接入管内制成菌悬液，细胞即吸附于小珠上，然后吸出溶液，将保藏管置

-70℃保存。

一、安瓿（bù）管开封

1．用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管。

2．用火焰将安瓿管顶端适度加热。3．滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂。

4．用挫刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。

1.用无菌吸管，吸取0.3～0.5ml适宜的液体培养基，滴人安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。

2.取0.1～0.2ml菌体悬浮液，移植于适宜的琼脂斜面／平板培养基上，剩余的菌液，注入适宜的液体培养基内，然后在建议的温度下培养。

3.若未能活化，或活化后有疑问时，请于收到菌种1个月内，通知保藏中心，经查证无误后，即免费补寄。