人教版选修3 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 课件(62张)
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专题2 细胞工程
5．体细胞核移植技术存在的问题 (1)____成__功__率______非常低。 (2)绝大多数克隆动物存在健康问题。 (3)对克隆动物食品的____安__全__性______问题存在争议。
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专题2 细胞工程
1．核移植时供体和受体的选择 (1)供体：一般选用传代 10 代以内的细胞，因为 10 代以内的细 胞一般能保持正常的二倍体核型，保证了供体细胞正常的遗传 基础。 (2)受体：减Ⅱ中期的卵母细胞。一方面细胞大，易于操作；卵 黄多，营养丰富，为发育提供充足的营养。另一方面细胞质中 含有能刺激融合后重组细胞进行分裂分化并形成重组胚胎的 物质。
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专题2 细胞工程
(2)营养 ①合成培养基成分：______糖________、_____氨__基__酸_____、促生 长因子、无机盐、微量元素等。 ②合成培养基特点：加入___血__清_____、__血__浆_____等天然成分。 (3) 温 度 和 pH ： 温 度 为 _____3_6_._5______±0.5 ℃ ； pH 为 __7_.2_～__7_._4______。 (4) 气 体 环 境 ： 95% 空 气 ＋ 5%CO2 的 混 合 气 体 。 O2 是 ___细__胞__代__谢_____所必需的，CO2 的主要作用是维持培养液的 ______p_H_______。
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1．动物细胞培养过程解读
专题2 细胞工程
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(1)细胞贴壁和接触抑制 ①细胞贴壁
专题2 细胞工程
用培养液将分散的动物细胞稀释制成细胞悬液，再将细胞悬液
放入培养瓶内，置于适宜的环境中培养，悬液中分散的细胞很
快会贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
②接触抑制
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增
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专题2 细胞工程
2．克隆动物的特点 (1)克隆动物的性状与核供体生物的性状基本相同，但不是完全 相同，原因是：①克隆动物的细胞质遗传物质来自受体卵母细 胞；②生物的性状不仅与遗传物质有关，还受环境影响。 (2)核基因是供体核基因的 100%的复制。 (3)克隆动物是一种无性繁殖方式。
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专题2 细胞工程
5.应用 (1)生产生物制品：如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 (2) 应 用 于 基 因 工 程 ： 动 物 细 胞 是 基 因 工 程 技 术 中 常 用 的 __受__体__细__胞______，离不开动物细胞培养。 (3)检测___有__毒__物__质_____，判断某种物质的毒性。 (4)用于生理、病理、药理等方面的研究，如筛选抗癌药物等。
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专题2 细胞工程
答案：交汇点 1 (1)核膜 (2)核膜 染色质 (3)代谢和遗传 交汇点 2 线粒体
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专题2 细胞工程
1．(2019·山东莱芜高二期中)下列对动物核移植技术的描述， 不正确的是( ) A．动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞的 B．体细胞核移植的过程中可通过显微操作去核法去除卵母细 胞中的核 C．细胞核移植的供体细胞一般选用传代 10 代以内的细胞 D．通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是对供体 100%的复 制
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专题2 细胞工程
2．(2019·湖南宁乡高二期末)用动植物成体的体细胞进行离体 培养，下列叙述正确的是( ) A．都需要用含 95%空气加 5%CO2 的混合气体的培养箱 B．都需要用液体培养基 C．都要在无菌条件下进行 D．都可体现细胞的全能性
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专题2 细胞工程
解析：选 C。不管是动物细胞培养还是植物组织培养，最基本 的一个条件就是无菌环境。此外，动物细胞培养的培养基是液 体培养基，其中的碳源是葡萄糖，培养液中还需要加入一定的 动物血清或血浆，其气体环境是 95%空气加 5%CO2，以维持 培养液的 pH；而植物组织培养的培养基为固体培养基，其碳 源为蔗糖，组织培养的脱分化阶段必须在黑暗条件下进行，而 再分化过程需要一定的光照条件；动物细胞培养就是细胞的增 殖，不能体现细胞的全能性，而植物组织培养完成了由一个细 胞到一个完整植株的全过程，体现了植物细胞的全能性。
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专题2 细胞工程
(3)细胞株和细胞系 ①细胞株：传代培养的细胞能达到 10～50 代，这样的传代细 胞称为细胞株。 ②细胞系：传代培养的细胞在传到 50 代后，有部分细胞的遗 传物质发生了改变，获得不死性，这种具有癌变特点的细胞称 为细胞系。
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专题2 细胞工程
2．植物组织培养与动物细胞培养的比较
殖，这种现象称为细胞的接触抑制。打破接触抑制现象的方法
是将贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培
养，让细胞继续增殖。
Байду номын сангаас
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专题2 细胞工程
(2)原代培养和传代培养 原代培养和传代培养一般均需对细胞用胰蛋白酶进行分散处 理，区分两种“培养”的关键是看用胰蛋白酶处理的对象。 ①第一次：用胰蛋白酶对剪碎的动物组织进行处理，分散后培 养，即为原代培养。 ②第二次：细胞培养过程中出现接触抑制，用胰蛋白酶等处理 使其从瓶壁上脱离下来，分散到多个培养瓶中继续培养，即为 传代培养。
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3．体细胞核移植的过程
专题2 细胞工程
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专题2 细胞工程
4．体细胞核移植的应用前景 (1)畜牧生产方面：加速家畜___遗__传__改__良_____进程，促进优良畜 群繁育。 (2)保护濒危物种方面：增加动物的___存__活__数__量_____。 (3)医药卫生领域：转基因克隆动物作为__生__物__反__应__器____，生产 医用蛋白。 (4) 治 疗 人 类 疾 病 ： 转 基 因 克 隆 动 物 细 胞 、 组 织 和 器 官 作 为 ___异__种___移__植____的供体等。
药物、食品添加剂、香料、③用于生理、药理、病
色素等
理等方面的研究
①都需要人工条件下的无菌、无毒操作，无菌培养； 相同点
②都进行有丝分裂
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专题2 细胞工程
[提醒] (1)培养动物细胞时没有脱分化的过程，因高度分化的 动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力。 (2)不是所有的细胞增殖过程中都存在接触抑制。例如，癌细胞 增殖时不存在接触抑制，所以在培养瓶中可以形成多层细胞。
项目
植物组织培养
动物细胞培养
原理 植物细胞的全能性
细胞增殖
固体或半固体培养基， 液体培养基，包括
区别
包括矿质元素、蔗糖、 无机盐、葡萄糖、
培养基
维生素、琼脂、植物激 维生素、氨基酸、
素等
动物血清等
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专题2 细胞工程
项目
植物组织培养
动物细胞培养
离体植物器官、组织或 胚胎或幼龄动物组
细胞来源
细胞
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专题2 细胞工程
1．下图为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图 中 B、E 两点表示经筛选、分装后继续培养。下列判断错误的 是( )
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专题2 细胞工程
A．B 点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养 B．接触抑制现象主要发生在 AB 段和 DE 段 C．分瓶后的每个培养瓶中的细胞群称为一个克隆 D．E 点后的少数细胞获得不死性，向等同于癌细胞的方向发 展
栏目 导引
专题2 细胞工程
交汇点 1 细胞结构——细胞核 (1)分布：真核细胞具有____________包被的细胞核；原核细胞 没有核膜包被的细胞核。 (2)结构：包括____________、核仁、______________、核孔等。 (3)功能：细胞核是遗传的信息库，是细胞__________的控制中 心。 交汇点 2 细胞质中的遗传物质 动物细胞质中的遗传物质存在于____________中。
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专题2 细胞工程
3．过程 动物组织块：取动物______胚__胎______或___幼__龄__动__物_____的器官 或组织
剪碎，用___胰__蛋__白__酶_____或__胶___原__蛋__白__酶___处理 单细胞
_细___胞__悬__液______
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专题2 细胞工程
织、器官
区 过程 脱分化、再分化
别
原代培养、传代培 养
获得新个体或细胞产 大量产生细胞或细
结果
品
胞产物
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项目
植物组织培养
专题2 细胞工程
动物细胞培养
①快速繁殖名贵花卉和果 ①生产蛋白质制品，如
树；②培养无病毒植株、转 病毒疫苗、干扰素、单
基因植物；
克隆抗体等；
区别 用途
③大规模生产细胞产品，如 ②检测有毒物质；
专题2 细胞工程
2．2 动物细胞工程
2．2.1 动物细胞培养和核移植技术
专题2 细胞工程
1．简述动物的细胞培养及条件。(重点) 2.举例论证动物细胞 培养技术的应用及意义。 3．简述动物核移植的过程及意义。(重、难点)
专题2 细胞工程
知识点一 动物细胞培养
1．概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成 ___单__个__细__胞_____，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞 ___生__长__和__增__殖___。 2．原理：细胞增殖。
专题2 细胞工程
3．克隆的层次 (1)分子水平：如 DNA 复制； (2)细胞水平：动物细胞培养； (3)个体水平：克隆羊“多利”的诞生。
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专题2 细胞工程
4．判断有性生殖与无性生殖的两种方法 (1)从概念上判断：①有性生殖是指经两性生殖细胞结合而成的 合子或有性配子直接发育成个体的生殖方式；②无性生殖是指 不经过生殖细胞的结合而由亲本直接产生子代的生殖方式。 (2)从培养细胞的种类上判断：①组织培养中培养的不是体细胞 而是有性配子或合子时，才属于有性生殖；②植物组织培养、 植物体细胞杂交和动物细胞核移植都属于无性生殖。
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专题2 细胞工程
知识点二 动物体细胞核移植技术和克隆动物
1．动物核移植概念 (1)供体：动物一个细胞的____细__胞__核______。 (2)受体：去掉细胞核的___卵__母__细___胞____。 (3)结果：形成重组胚胎，发育成__动__物__个__体______。 2．两种类型胚_体_胎_细__细胞__胞核__核移__移植__植_
D 主要应用
产物
得脱毒苗等
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专题2 细胞工程
解析：选 A。动物细胞培养的原理是细胞增殖，植物组织培养 的原理是植物细胞的全能性，A 错误；动物细胞培养使用液体 培养基，制成细胞悬液，植物组织培养一般使用固体培养基， B 正确；动物细胞培养的主要过程是原代培养和传代培养，植 物组织培养的主要过程是脱分化、再分化，形成植株，C 正确； 动物细胞培养的目的是获得大量细胞或细胞产物、植物组织培 养主要用于植物快速繁殖、获得脱毒苗、制备人工种子等，D 正确。
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专题2 细胞工程
解析：选 C。人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代 培养，分瓶后的培养称为传代培养，B 点之后细胞继续生长， 可见 B 点之后进行了传代培养，A 正确；当贴壁细胞分裂生长 到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，即会发生接触抑 制现象，在 AB 段和 DE 段细胞几乎生长停滞，可能发生了接 触抑制，B 正确；细胞克隆的最基本要求是必须保证分离出来 的是一个细胞而不是多个细胞，C 错误；E 点后细胞已获无限 繁殖能力且持续生存，具有了癌细胞的性质，D 正确。
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专题2 细胞工程
3．(2019·南通高二检测)下表为有关动物细胞培养与植物组织 培养的比较，错误的是( )
选项 比较项目 动物细胞培养
植物组织培养
A 原理 动物细胞核的全能性 植物细胞的全能性
B 培养基
液体培养基
固体培养基
脱分化，再分化， C 主要过程 原代培养，传代培养
形成植株
获得大量细胞或细胞 植物快速繁殖、获
___原__代__培__养_____：动物组织消化后的初次培养 贴附性细胞
用___胰__蛋__白__酶_____处理，分瓶，_____传__代_______培养 10 代细胞
传代培养 50 代左右细胞
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专题2 细胞工程
4．条件 (1)无菌、无毒的环境 ①培养液和所有培养用具应进行___无__菌_________处理。 ②通常还要在细胞培养液中添加一定量的____抗__生__素______，以 防污染。 ③定期更换培养液，防止__细__胞__代__谢__产__物__的危害。
专题2 细胞工程
5．体细胞核移植技术存在的问题 (1)____成__功__率______非常低。 (2)绝大多数克隆动物存在健康问题。 (3)对克隆动物食品的____安__全__性______问题存在争议。
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专题2 细胞工程
1．核移植时供体和受体的选择 (1)供体：一般选用传代 10 代以内的细胞，因为 10 代以内的细 胞一般能保持正常的二倍体核型，保证了供体细胞正常的遗传 基础。 (2)受体：减Ⅱ中期的卵母细胞。一方面细胞大，易于操作；卵 黄多，营养丰富，为发育提供充足的营养。另一方面细胞质中 含有能刺激融合后重组细胞进行分裂分化并形成重组胚胎的 物质。
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专题2 细胞工程
(2)营养 ①合成培养基成分：______糖________、_____氨__基__酸_____、促生 长因子、无机盐、微量元素等。 ②合成培养基特点：加入___血__清_____、__血__浆_____等天然成分。 (3) 温 度 和 pH ： 温 度 为 _____3_6_._5______±0.5 ℃ ； pH 为 __7_.2_～__7_._4______。 (4) 气 体 环 境 ： 95% 空 气 ＋ 5%CO2 的 混 合 气 体 。 O2 是 ___细__胞__代__谢_____所必需的，CO2 的主要作用是维持培养液的 ______p_H_______。
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1．动物细胞培养过程解读
专题2 细胞工程
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(1)细胞贴壁和接触抑制 ①细胞贴壁
专题2 细胞工程
用培养液将分散的动物细胞稀释制成细胞悬液，再将细胞悬液
放入培养瓶内，置于适宜的环境中培养，悬液中分散的细胞很
快会贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
②接触抑制
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增
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专题2 细胞工程
2．克隆动物的特点 (1)克隆动物的性状与核供体生物的性状基本相同，但不是完全 相同，原因是：①克隆动物的细胞质遗传物质来自受体卵母细 胞；②生物的性状不仅与遗传物质有关，还受环境影响。 (2)核基因是供体核基因的 100%的复制。 (3)克隆动物是一种无性繁殖方式。
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专题2 细胞工程
5.应用 (1)生产生物制品：如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 (2) 应 用 于 基 因 工 程 ： 动 物 细 胞 是 基 因 工 程 技 术 中 常 用 的 __受__体__细__胞______，离不开动物细胞培养。 (3)检测___有__毒__物__质_____，判断某种物质的毒性。 (4)用于生理、病理、药理等方面的研究，如筛选抗癌药物等。
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专题2 细胞工程
答案：交汇点 1 (1)核膜 (2)核膜 染色质 (3)代谢和遗传 交汇点 2 线粒体
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专题2 细胞工程
1．(2019·山东莱芜高二期中)下列对动物核移植技术的描述， 不正确的是( ) A．动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞的 B．体细胞核移植的过程中可通过显微操作去核法去除卵母细 胞中的核 C．细胞核移植的供体细胞一般选用传代 10 代以内的细胞 D．通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是对供体 100%的复 制
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专题2 细胞工程
2．(2019·湖南宁乡高二期末)用动植物成体的体细胞进行离体 培养，下列叙述正确的是( ) A．都需要用含 95%空气加 5%CO2 的混合气体的培养箱 B．都需要用液体培养基 C．都要在无菌条件下进行 D．都可体现细胞的全能性
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专题2 细胞工程
解析：选 C。不管是动物细胞培养还是植物组织培养，最基本 的一个条件就是无菌环境。此外，动物细胞培养的培养基是液 体培养基，其中的碳源是葡萄糖，培养液中还需要加入一定的 动物血清或血浆，其气体环境是 95%空气加 5%CO2，以维持 培养液的 pH；而植物组织培养的培养基为固体培养基，其碳 源为蔗糖，组织培养的脱分化阶段必须在黑暗条件下进行，而 再分化过程需要一定的光照条件；动物细胞培养就是细胞的增 殖，不能体现细胞的全能性，而植物组织培养完成了由一个细 胞到一个完整植株的全过程，体现了植物细胞的全能性。
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专题2 细胞工程
(3)细胞株和细胞系 ①细胞株：传代培养的细胞能达到 10～50 代，这样的传代细 胞称为细胞株。 ②细胞系：传代培养的细胞在传到 50 代后，有部分细胞的遗 传物质发生了改变，获得不死性，这种具有癌变特点的细胞称 为细胞系。
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专题2 细胞工程
2．植物组织培养与动物细胞培养的比较
殖，这种现象称为细胞的接触抑制。打破接触抑制现象的方法
是将贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培
养，让细胞继续增殖。
Байду номын сангаас
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专题2 细胞工程
(2)原代培养和传代培养 原代培养和传代培养一般均需对细胞用胰蛋白酶进行分散处 理，区分两种“培养”的关键是看用胰蛋白酶处理的对象。 ①第一次：用胰蛋白酶对剪碎的动物组织进行处理，分散后培 养，即为原代培养。 ②第二次：细胞培养过程中出现接触抑制，用胰蛋白酶等处理 使其从瓶壁上脱离下来，分散到多个培养瓶中继续培养，即为 传代培养。
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3．体细胞核移植的过程
专题2 细胞工程
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专题2 细胞工程
4．体细胞核移植的应用前景 (1)畜牧生产方面：加速家畜___遗__传__改__良_____进程，促进优良畜 群繁育。 (2)保护濒危物种方面：增加动物的___存__活__数__量_____。 (3)医药卫生领域：转基因克隆动物作为__生__物__反__应__器____，生产 医用蛋白。 (4) 治 疗 人 类 疾 病 ： 转 基 因 克 隆 动 物 细 胞 、 组 织 和 器 官 作 为 ___异__种___移__植____的供体等。
药物、食品添加剂、香料、③用于生理、药理、病
色素等
理等方面的研究
①都需要人工条件下的无菌、无毒操作，无菌培养； 相同点
②都进行有丝分裂
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专题2 细胞工程
[提醒] (1)培养动物细胞时没有脱分化的过程，因高度分化的 动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力。 (2)不是所有的细胞增殖过程中都存在接触抑制。例如，癌细胞 增殖时不存在接触抑制，所以在培养瓶中可以形成多层细胞。
项目
植物组织培养
动物细胞培养
原理 植物细胞的全能性
细胞增殖
固体或半固体培养基， 液体培养基，包括
区别
包括矿质元素、蔗糖、 无机盐、葡萄糖、
培养基
维生素、琼脂、植物激 维生素、氨基酸、
素等
动物血清等
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专题2 细胞工程
项目
植物组织培养
动物细胞培养
离体植物器官、组织或 胚胎或幼龄动物组
细胞来源
细胞
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专题2 细胞工程
1．下图为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图 中 B、E 两点表示经筛选、分装后继续培养。下列判断错误的 是( )
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专题2 细胞工程
A．B 点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养 B．接触抑制现象主要发生在 AB 段和 DE 段 C．分瓶后的每个培养瓶中的细胞群称为一个克隆 D．E 点后的少数细胞获得不死性，向等同于癌细胞的方向发 展
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专题2 细胞工程
交汇点 1 细胞结构——细胞核 (1)分布：真核细胞具有____________包被的细胞核；原核细胞 没有核膜包被的细胞核。 (2)结构：包括____________、核仁、______________、核孔等。 (3)功能：细胞核是遗传的信息库，是细胞__________的控制中 心。 交汇点 2 细胞质中的遗传物质 动物细胞质中的遗传物质存在于____________中。
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专题2 细胞工程
3．过程 动物组织块：取动物______胚__胎______或___幼__龄__动__物_____的器官 或组织
剪碎，用___胰__蛋__白__酶_____或__胶___原__蛋__白__酶___处理 单细胞
_细___胞__悬__液______
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专题2 细胞工程
织、器官
区 过程 脱分化、再分化
别
原代培养、传代培 养
获得新个体或细胞产 大量产生细胞或细
结果
品
胞产物
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项目
植物组织培养
专题2 细胞工程
动物细胞培养
①快速繁殖名贵花卉和果 ①生产蛋白质制品，如
树；②培养无病毒植株、转 病毒疫苗、干扰素、单
基因植物；
克隆抗体等；
区别 用途
③大规模生产细胞产品，如 ②检测有毒物质；
专题2 细胞工程
2．2 动物细胞工程
2．2.1 动物细胞培养和核移植技术
专题2 细胞工程
1．简述动物的细胞培养及条件。(重点) 2.举例论证动物细胞 培养技术的应用及意义。 3．简述动物核移植的过程及意义。(重、难点)
专题2 细胞工程
知识点一 动物细胞培养
1．概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成 ___单__个__细__胞_____，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞 ___生__长__和__增__殖___。 2．原理：细胞增殖。
专题2 细胞工程
3．克隆的层次 (1)分子水平：如 DNA 复制； (2)细胞水平：动物细胞培养； (3)个体水平：克隆羊“多利”的诞生。
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专题2 细胞工程
4．判断有性生殖与无性生殖的两种方法 (1)从概念上判断：①有性生殖是指经两性生殖细胞结合而成的 合子或有性配子直接发育成个体的生殖方式；②无性生殖是指 不经过生殖细胞的结合而由亲本直接产生子代的生殖方式。 (2)从培养细胞的种类上判断：①组织培养中培养的不是体细胞 而是有性配子或合子时，才属于有性生殖；②植物组织培养、 植物体细胞杂交和动物细胞核移植都属于无性生殖。
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专题2 细胞工程
知识点二 动物体细胞核移植技术和克隆动物
1．动物核移植概念 (1)供体：动物一个细胞的____细__胞__核______。 (2)受体：去掉细胞核的___卵__母__细___胞____。 (3)结果：形成重组胚胎，发育成__动__物__个__体______。 2．两种类型胚_体_胎_细__细胞__胞核__核移__移植__植_
D 主要应用
产物
得脱毒苗等
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专题2 细胞工程
解析：选 A。动物细胞培养的原理是细胞增殖，植物组织培养 的原理是植物细胞的全能性，A 错误；动物细胞培养使用液体 培养基，制成细胞悬液，植物组织培养一般使用固体培养基， B 正确；动物细胞培养的主要过程是原代培养和传代培养，植 物组织培养的主要过程是脱分化、再分化，形成植株，C 正确； 动物细胞培养的目的是获得大量细胞或细胞产物、植物组织培 养主要用于植物快速繁殖、获得脱毒苗、制备人工种子等，D 正确。
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解析：选 C。人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代 培养，分瓶后的培养称为传代培养，B 点之后细胞继续生长， 可见 B 点之后进行了传代培养，A 正确；当贴壁细胞分裂生长 到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，即会发生接触抑 制现象，在 AB 段和 DE 段细胞几乎生长停滞，可能发生了接 触抑制，B 正确；细胞克隆的最基本要求是必须保证分离出来 的是一个细胞而不是多个细胞，C 错误；E 点后细胞已获无限 繁殖能力且持续生存，具有了癌细胞的性质，D 正确。
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专题2 细胞工程
3．(2019·南通高二检测)下表为有关动物细胞培养与植物组织 培养的比较，错误的是( )
选项 比较项目 动物细胞培养
植物组织培养
A 原理 动物细胞核的全能性 植物细胞的全能性
B 培养基
液体培养基
固体培养基
脱分化，再分化， C 主要过程 原代培养，传代培养
形成植株
获得大量细胞或细胞 植物快速繁殖、获
___原__代__培__养_____：动物组织消化后的初次培养 贴附性细胞
用___胰__蛋__白__酶_____处理，分瓶，_____传__代_______培养 10 代细胞
传代培养 50 代左右细胞
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专题2 细胞工程
4．条件 (1)无菌、无毒的环境 ①培养液和所有培养用具应进行___无__菌_________处理。 ②通常还要在细胞培养液中添加一定量的____抗__生__素______，以 防污染。 ③定期更换培养液，防止__细__胞__代__谢__产__物__的危害。