食品中维生素类的分析演示文稿

4、维生素B6的测定 国标法为微生物法。
（1）荧光分析法 样品经硫酸加压水解，采用CGS树脂的柱层
析分离，以氯化钾的磷酸缓冲液洗脱。洗脱液在
二氧化锰和乙醛酸钠溶液存在下，可使VB6的混合 物即吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺一次转化为吡哆醛。
吡哆醛在氰化钾作用下生成强荧光物质—吡哆醛 氰醇衍生物。在激发波长355nm，发射波长 434nm处，测定其荧光强度，就可计算出样品中 VB6的含量。
5、维生素B12的测定 （1）比色法
样品用浓硫酸和高氯酸钾消化后，样品中的钴与
M—α—吡啶联腙生成钴的红色化合物，可以进行比色 测定，再从钴的含量换算成VB12的含量。 注意：样品中存在游离钴离子将使测定结果偏高，可
以预先用8—羟基奎宁—氯仿溶液提取，分离除去。 （2）原子吸收分光光度法 维生素B12的分子中含有钴离子，占VB12的
胺）作用生成黄色化合物，因而可在420nm波长处测定光密 度，求出VB5的含量。
（2）气相色谱法 烟酸分子具有羟基，不溶于有机溶剂，不能直接用气相
色谱法进行测定，但烟酸经酯化转变成烟酸乙酯或N—2基烟 酰胺之后，可以用气相色谱法进行分离测定。
（3）高效液相色谱法 利用酸水解法提取VB5，经高效液相色谱分离，测定。
适合于蛋白质含量较高的样品。
2、还原型抗坏血酸的测定 （1）分光光度法 在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生
成黄色的草酰肼-2-羟基丁酰内酯衍生物。在最大 吸收波长420nm处测定吸光度，与标准系列比较 定量。
非蛋白性样品在乙酸溶液中提取，过滤后上 清液供测定；蛋白性样品需再加入乙酸锌溶液和 亚铁氰化钾溶液，沉淀蛋白质。
（三）维生素C的测定
在食品中VC有三种存在形式：
还原型抗坏血酸（－2H，氧化）脱氢型抗坏血酸
二
酮古洛糖酸。
1、提取方法
食品中的维生素C通常采用草酸、草酸－醋酸、偏磷
酸－醋酸溶液直接提取。在一定浓度的酸性介质中，可以
消除某些还原性杂质对维生素C的破坏作用。草酸对维生素
C有很好的稳定性能；偏磷酸能沉淀蛋白质，澄清提取液，
（2）2,6—二氯靛酚滴定法 还原型抗坏血酸可以还原染料2,6—二氯靛酚。 该染料在酸性溶液中呈粉红色，被还原后成无色溶 液。在终点时，过量的未被还原的染料在酸性溶液 中呈粉红色，因此，在滴定过程中当溶液从无色转 变成微红色时，表示还原型抗坏血酸全部被氧化为 脱氢抗坏血酸，此时即为滴定终点。
（2）高效液相色谱法
待测样品
色谱方式
检测器
肉及肉制品 米粉
食品 米及米制品
正相液相色谱 反相键合相色谱
离子交换色谱 反相离子对色谱
荧光检测器 柱后衍生化后 荧光检测器 紫外检测器 紫外检测器
GB\GBT5009.84-2003 食 品中硫胺素(维生素B1)的测
定.pdf
2、维生素B2的测定 国标第一法为荧光法，第二法为微生物法。
（2）高效液相色谱法
待测样品
色谱方式
检测器
食品 肉及肉制品 蛋及奶制品 米及米制品
反相键合相色谱 正相液相色谱 反相键合相色谱 反相离子对色谱
荧光检测器 荧光检测器 紫外检测器 紫外检测器
3、维生素B5的测定 国标方法为微生物法。
（1）溴化氰比色法 VB5与溴化氰结合后可与对氨基苯乙酮（或其它芳香族
①原理：硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中能被氧化
成一种强蓝色荧光物质—噻嘧色素（硫色素）。 硫色素在紫外线照射下，发出荧光，其强度与硫
色素浓度成正比，也即与溶液中硫胺素含量成正 比。
激发波长365nm；发射波长435nm。 ②样品提取：对于一般样品、高蛋白样品、淀粉
质样品处理方法不同，如样品中所含杂质较多，
光光度法测定钴的含量。
从钴换算为VB12的换算系数=22.99。
GB\GBT 5009.217-2008 保健食品中维生素B12的测
定.pdf
GB\GBT 5009.210-2008 食品中泛酸的测定.pdf
GB\GBT 5009.211-2008 食品中叶酸的测定.pdf
文章\高效液相色谱法测定 蔬菜中B族维生素.pdf
可用柱层析法处理，使硫胺素与杂质分离，然后 以所得溶液作测定。
操作过程：
试样匀浆或粉碎，称样于三角瓶中——加稀盐酸， 放入高压锅中加热水解——加淀粉酶、蛋白酶酶解， 过滤得提取液——将提取液加入已准备好的盐基交 换柱中，过柱——热蒸馏水冲洗交换柱，去杂质— —热酸性氯化钾过柱，收集滤液，即为试样净化 液——净化液分别加入A、B两个反应瓶——避光， A瓶中加入氢氧化钠溶液，B瓶中加入碱性铁氰化钾 溶液，振摇15s——加10mL正丁醇，同时振摇 1.5min，静置分层——吸去下层碱性溶液，加无水 硫酸钠使溶液脱水——上机测定。
（1）荧光分光光度法 原理：样品经酸解、酶解处理使核黄素游离出来，用
高锰酸钾和过氧化氢氧化杂质，再经硅镁吸附剂进行柱层析，
吸附提取核黄素，最后用洗脱液——丙酮＋冰乙酸＋水洗脱 并收集核黄素。VB2水溶液呈黄绿色荧光，在440nm的激发 波长，525nm发射波长处可产生最大荧光强度。
测定谷物中VB2时最好在样品酸解后，加入一定量的淀粉 酶，在35～40℃酶解15小时左右，这样有利于结合型的VB2 转化成游离型的VB2 。
4.35%，采用原子吸收分光光度法可以测定其钴含量， 再换算成VB12的含量。
样品预处理：
样品用VB12提取液（无水磷酸氢二钠1.3g＋ 柠檬酸1.2g＋无水焦亚硫酸钠1.0g加水至100ml） 提取，滤液中加入EDTA，用氨水调pH至7，再 加入活性炭，振摇，用无灰滤纸过滤，VB12被吸 附在活性炭上，将活性炭连同滤纸一起在600℃ 下灰化完全，用硝酸将残渣溶解，以原子吸收分
（2）气相色谱法 VB6与七氟丁基咪唑反应可生成挥发性的衍
生物，该衍生物在气相色谱中可以很好地分离。
最低检出限10ng。 气相色谱条件：电子捕获检测器；3%SE—52， 固定相Chromosorb W—HPO
（3）液相色谱法 样品水解后上机测定。
C18柱 荧光检测器：激发波长290nm，发射波长395nm。
食品中维生素类的分析演 示文稿
（优选）第五节食品中维 生素Biblioteka Baidu的分析
（二）维生素B族的测定 维生素B1、B2通常采用稀盐酸水解，或再经
淀粉酶、木瓜蛋白酶酶解，使结合态维生素游离
出来，再进行提取。为了去除杂质，可用活性人
造浮石、硅镁吸附剂等进行纯化处理。
1、维生素B1的测定 （1）硫色素荧光法：国标法。