急性、慢性和亚慢性毒性实验

急性毒性试验

（一）经典的急性致死性毒性试验

通过试验得到化合物引起动物死亡的剂量—反应关系并求得LD50（LC50）

1、实验动物

常用的实验动物是小鼠或大鼠。一般受试动物应是雌、雄各半；若雌、雄动物对待测化学物毒性的敏感程度有明差异，则应分别求出各自的LD50；如果试验是为畸形试验做剂量准备，也可仅做雌性动物的LD50试验。小动物每组10只，狗等大动物可每组6只。

2、染毒剂量设计

首先要了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、纯度、杂质成分与含量、溶解度、挥发度、PH等理化性质。对于新的受试化学物，找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的LD50(LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值，先用少量动物，以较大的剂量间隔（一般按几何级数）染毒，找出找出10%~90%（或0％~100％）的致死剂量范围，然后在这个剂量范围内设几个剂量组。改良寇氏法最好设5个剂量组，每组10只动物，雌雄各半，剂量组要求以等比级数设置。根据以下公式计算出剂量分组：

i=(lgLD90-lgLD10)／(n-1) 或：i=(lgLD100-lgLD0)／(n-1)

式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)；

n为设计的剂量组数。

有的毒性较小，此时可不再求其LD50，而应进行限量试验。在用大鼠或小鼠进行试验时，一般用20只动物，雌雄各半。单次染毒剂量一般限定为5g/kg（体重），对于食品毒理学试验，限量要求为15g/kg（体重）。如果实验动物无死亡或仅有个别动物死亡（死亡率低于50%），则可得出LD50大于限量的结论。

3、观察

染毒后一般要求观察14天，依据14天内动物的总死亡情况计算LD50。在实际工作中，依据受试物有关测试规程要求确定观察期的长短。

观察内容包括：

（1）动物死亡情况：包括动物死亡数及各自的死亡时间。

（2）动物体重：于染毒前、染毒后每周和死亡时测定体重。

（3）中毒反应症状：临床观察每天至少一次，观察皮肤、被毛、眼睛和粘膜改变，呼吸、循环、自主和中枢神经系统以及四肢活动和行为方式的变化等，特别要注意有无震

颤、惊厥、腹泻、嗜睡等现象。神经毒性：惊厥、共济失调和死亡。植物神经兴奋：腹泻或竖毛。

（4）病理学检查：解剖进行尸检，观察各器官有无改变，对肉眼观察有变化的脏器需进行组织病理学检查。

4、LD50计算

（1）霍恩氏法

（2）简化寇氏法

M = X – i(Σp – 0.5)

式中: m— log LD50,

X—最高剂量组剂量对数值,

p—死亡率(用小数表示)，

Σp—死亡率总和,

i—相邻两组剂量对数之差。

（3）直接回归法：

死亡频率呈正态分布，则变化曲线为典型的“钟罩”型；死亡频率化为累积死亡频率，反应曲线呈S形；累积死亡频率化为概率单位时，反应曲线呈直线。

（二）急性毒性试验的其他方法

1.固定计量法

2.急性毒性分级法

3.上、下移动法

亚慢性毒性和慢性毒性的评价方法

1、实验动物

要求选拔两种实验动物，一种为啮齿类，首选是大鼠，另一种为非啮齿类，首选是狗。亚慢性毒性试验一般每个剂量组20只大鼠，或每组4~6只狗。慢性毒性试验每组40只大鼠，狗每组8只或以上。

2、染毒途径

常用的染毒途径是经胃肠道、经呼吸道和经皮肤染毒。

3、染毒期限

工业毒理学—— 3－6个月

食品毒理学—— 6个月－1年

环境毒理学—— 6个月－1年

致癌试验——接近或等于动物的预期寿命

4、剂量分组

（1）亚慢性毒性的剂量选择：

阴性对照组，低剂量组，中剂量组，高剂量组

急性毒性的阈剂量：1/20~1/5 LD50

组距：3~10倍，最低不小于2倍

（2）慢性毒性的剂量选择

阴性对照组，低剂量组，中剂量组，高剂量组

亚慢性阈剂量：1/50~1/5LD50

组距：2~5倍，最低不小于2倍

5、观察指标

（1）中毒症状（行为和外观）

（2）体重：每周称量一次

（3）食物利用率（试验动物每食入100g饲料所增长的体重克数）

（4）实验室检查

1）血液学检查

2）尿液检查

3）血液生化学检查

（5）病理及病理组织学检查

对濒死动物进行解剖。试验结束及恢复期结束时，活杀实验动物。

1）系统解剖：消化道、肺、肝、肾、淋巴腺、眼、皮肤等，记录有无肉眼可见的异常变化。

2）脏器系数：是指某个脏器质量与体重的比值，又称脏体比值。常以100 g体重或1g 体重计。需称量脏器湿重并计算其脏器系数。

3）组织病理学检查

（6）特异性指标

6、结果分析：选择适当的统计学方法进行各剂量组与阴性对照组的比较。