赵明明磁珠纯化的原理 ppt课件
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
磁珠纯化的原理
赵明明磁珠纯化的原理
胶回收—玻璃奶法
玻璃奶的制作 1.石英砂磨成325目的玻璃粉（研磨2小时左右）;粉末颗粒的大小，指的是粉
末可以通过325目的筛网
2. 50克玻璃粉悬于加有200mL蒸馏水的烧杯中,搅拌混匀后,静置90min; 3.将上清转移至离心管中6000g离心10min; 4.倒掉上清,将玻璃粉重悬于1.5mL 25%的硝酸中,室温放置过夜; （新购置的 玻璃器皿含有较多的游离碱，需要在酸中浸泡数小时，浸泡后再冲洗干净） 5. 6000g离心10min,沉淀玻璃粉; 6.倒掉上清,将玻璃粉用无菌双蒸水洗涤4-6次,直至pH值中性; 7. 用无菌双蒸水重悬玻璃粉,配成50%匀浆; 8.等分成100μl样品, 贮存于-70℃;待用的样品可贮存于-20℃或4℃.
•Agilent Streptavidin T1 magnetic beads
赵明明磁珠纯化的原理
磁珠选择大小
large target
样品起始100μl，0.55× 去除大片段后155 μl，0.16×
What plays the role in size selection is not AMPure beads, but it's buffer.
•Bruker Daltonics GenoPure ds Genopure oligo（single-stranded DNAs）
•Macherey-Nagel NucleoMag® 96 PCR
•Omega Mag bind NGS Clean-IT 96 Kit
•NEB NEBNext Oligo d(T)25 Magnetic Beads NEBNext Protein A Magnetic Beads
磁珠选择大小
赵明明磁珠纯化的原理
• 盐浓度 DNA<100bp:高盐状态下结合率高。 DNA>100bp:低盐状态下结合率高。
赵明明磁珠纯化的原理
磁珠种类
磁珠：超顺磁性纳米颗粒
硅磁（Magnetic Silica Particle）：磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核 酸，其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式。
氧化硅羟基磁珠：此种微球具有核壳结构，即超顺磁性核心及无机氧化硅外 壳，表面修饰大量硅烷醇基团。硅烷醇基团（羟基）在chaotropic（如盐酸胍、 异硫氰酸胍等）存在的条件下，能够和溶液中的核酸通过疏水作用、氢键作 用和静电作用等发生特异性结合，而不与蛋白和其他杂质结合。
赵明明磁珠纯化的原理
操作步骤
切取目的DNA条带 溶胶
结合玻璃奶 离心沉淀玻璃奶
漂洗玻璃奶 洗脱DNA
赵明明磁珠纯化的原理
原理
• 玻璃奶(Glassmilk) 是一种白色硅颗粒，能结合0.2kb至50kb大小的DNA（双 链、单链、线性、环状或超螺旋）。
• DNA与玻璃奶结合原理 在高盐状态下，玻璃奶周围的负电荷被打破，并允许 DNA的磷酸负电荷与玻璃奶特异性结合。在低盐（H2O或 1×TE）时溶解分离。
ຫໍສະໝຸດ Baidu
度定向包被到超顺磁性微球表面，其在表面的包被密度高达9.3×1013
molecules·cm-2，排列均匀，并朝向一致。产品具有较高的生物素结合效率和
较低的蛋白及DNA非特异吸附率，每毫克磁珠结合游离生物素的量可达到
1200 pmol以上。
赵明明磁珠纯化的原理
磁珠品牌
•Agencourt Bioscience Corporation（Beckman Coulter Company） Agencourt AMPure XP beads
赵明明磁珠纯化的原理
磁珠选择大小
stock buffer: 20% PEG 8000, 2.5M NaCl, Tris
赵明明磁珠纯化的原理
磁珠选择大小
Roche
赵明明磁珠纯化的原理
磁珠选择大小
12 μl product was mixed with 12 μl of ‘‘12p XP’’ beads and incubated at RT for 6 minutes. The supernatant was then mixed with 12 μl of AMPure XP beads and 5 μl of 40% of PEG8000 and eluted with 10 μl of nuclease-free water, it was then again purified using 12 μl of AMPure XP beads and eluted in 30 mL of EB buffer. For size-selection using the SPRI beads, we replaced the stock buffer of AMPure XP beads with a 12% PEG-8000 and 2.5 M NaCl solution (‘‘12p XP’’ buffer). One mL of Ampure XP beads were placed on a magnetic stand and left for 10 minutes. The supernatant was then removed and the beads were washed twice with ultra-pure water and re-suspended in the ‘‘1赵2p明明XP磁’珠’ s纯o化lu的ti原on理.
氧化硅羧基磁珠：该磁珠表面修饰有羧基官能团，能够在特殊化学试剂（如 EDC）的作用下将蛋白、寡聚核苷酸等生物配体共价偶联到磁珠表面，可应 用在蛋白纯化、核酸纯化、亲和层析、细胞分类筛选、免疫测定分析和临床 诊断等多个生物领域。
SA磁珠（Fe3O4/SiO2/SA)：利用生物纳米表面技术，使重组Streptavidin高密
赵明明磁珠纯化的原理
胶回收—玻璃奶法
玻璃奶的制作 1.石英砂磨成325目的玻璃粉（研磨2小时左右）;粉末颗粒的大小，指的是粉
末可以通过325目的筛网
2. 50克玻璃粉悬于加有200mL蒸馏水的烧杯中,搅拌混匀后,静置90min; 3.将上清转移至离心管中6000g离心10min; 4.倒掉上清,将玻璃粉重悬于1.5mL 25%的硝酸中,室温放置过夜; （新购置的 玻璃器皿含有较多的游离碱，需要在酸中浸泡数小时，浸泡后再冲洗干净） 5. 6000g离心10min,沉淀玻璃粉; 6.倒掉上清,将玻璃粉用无菌双蒸水洗涤4-6次,直至pH值中性; 7. 用无菌双蒸水重悬玻璃粉,配成50%匀浆; 8.等分成100μl样品, 贮存于-70℃;待用的样品可贮存于-20℃或4℃.
•Agilent Streptavidin T1 magnetic beads
赵明明磁珠纯化的原理
磁珠选择大小
large target
样品起始100μl，0.55× 去除大片段后155 μl，0.16×
What plays the role in size selection is not AMPure beads, but it's buffer.
•Bruker Daltonics GenoPure ds Genopure oligo（single-stranded DNAs）
•Macherey-Nagel NucleoMag® 96 PCR
•Omega Mag bind NGS Clean-IT 96 Kit
•NEB NEBNext Oligo d(T)25 Magnetic Beads NEBNext Protein A Magnetic Beads
磁珠选择大小
赵明明磁珠纯化的原理
• 盐浓度 DNA<100bp:高盐状态下结合率高。 DNA>100bp:低盐状态下结合率高。
赵明明磁珠纯化的原理
磁珠种类
磁珠：超顺磁性纳米颗粒
硅磁（Magnetic Silica Particle）：磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核 酸，其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式。
氧化硅羟基磁珠：此种微球具有核壳结构，即超顺磁性核心及无机氧化硅外 壳，表面修饰大量硅烷醇基团。硅烷醇基团（羟基）在chaotropic（如盐酸胍、 异硫氰酸胍等）存在的条件下，能够和溶液中的核酸通过疏水作用、氢键作 用和静电作用等发生特异性结合，而不与蛋白和其他杂质结合。
赵明明磁珠纯化的原理
操作步骤
切取目的DNA条带 溶胶
结合玻璃奶 离心沉淀玻璃奶
漂洗玻璃奶 洗脱DNA
赵明明磁珠纯化的原理
原理
• 玻璃奶(Glassmilk) 是一种白色硅颗粒，能结合0.2kb至50kb大小的DNA（双 链、单链、线性、环状或超螺旋）。
• DNA与玻璃奶结合原理 在高盐状态下，玻璃奶周围的负电荷被打破，并允许 DNA的磷酸负电荷与玻璃奶特异性结合。在低盐（H2O或 1×TE）时溶解分离。
ຫໍສະໝຸດ Baidu
度定向包被到超顺磁性微球表面，其在表面的包被密度高达9.3×1013
molecules·cm-2，排列均匀，并朝向一致。产品具有较高的生物素结合效率和
较低的蛋白及DNA非特异吸附率，每毫克磁珠结合游离生物素的量可达到
1200 pmol以上。
赵明明磁珠纯化的原理
磁珠品牌
•Agencourt Bioscience Corporation（Beckman Coulter Company） Agencourt AMPure XP beads
赵明明磁珠纯化的原理
磁珠选择大小
stock buffer: 20% PEG 8000, 2.5M NaCl, Tris
赵明明磁珠纯化的原理
磁珠选择大小
Roche
赵明明磁珠纯化的原理
磁珠选择大小
12 μl product was mixed with 12 μl of ‘‘12p XP’’ beads and incubated at RT for 6 minutes. The supernatant was then mixed with 12 μl of AMPure XP beads and 5 μl of 40% of PEG8000 and eluted with 10 μl of nuclease-free water, it was then again purified using 12 μl of AMPure XP beads and eluted in 30 mL of EB buffer. For size-selection using the SPRI beads, we replaced the stock buffer of AMPure XP beads with a 12% PEG-8000 and 2.5 M NaCl solution (‘‘12p XP’’ buffer). One mL of Ampure XP beads were placed on a magnetic stand and left for 10 minutes. The supernatant was then removed and the beads were washed twice with ultra-pure water and re-suspended in the ‘‘1赵2p明明XP磁’珠’ s纯o化lu的ti原on理.
氧化硅羧基磁珠：该磁珠表面修饰有羧基官能团，能够在特殊化学试剂（如 EDC）的作用下将蛋白、寡聚核苷酸等生物配体共价偶联到磁珠表面，可应 用在蛋白纯化、核酸纯化、亲和层析、细胞分类筛选、免疫测定分析和临床 诊断等多个生物领域。
SA磁珠（Fe3O4/SiO2/SA)：利用生物纳米表面技术，使重组Streptavidin高密