植物组培快繁程序ppt课件

（4）外植体放入超净工作台内，置 70-75%酒精中5-60 秒，0.1％氯化汞610分钟，或10%的漂白粉上清液中10-15 分钟，然后用无菌水冲洗3-5次。灭菌 时需进行搅动。
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常用灭菌药剂的使用和效果
灭菌剂
使用浓度（%） 清除的难易 消毒时间 效 果
次氯酸钠 次氯酸钙 漂白粉 氯化汞 酒精 过氧化氢 溴水 硝酸银 抗菌素
某些多年生植物或特殊材料，必须取 自自然生长的植物，就需要尽可能避免 使用那些生长过于潮湿和不洁净环境中 的植物。对于培养过程中可能出现内生 菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的 生长点部位作为起始培养的材料。
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2、供体植株的管理 取自室外的外植体材料，供体植株 的管理十分重要，这与外植体培养时的 污染率密切相关。植株管理中应注意： ⑴避免昆虫危害 许多昆虫如蚜虫、 螨类和飞虱是许多植物病虫害的传播媒 介，会引起植物组织的潜在感染。
料的方法。是现在最常用的方法。 (2)液体培养法
即用不加固化剂的液体培养基培养 植物材料的方法。
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3、培养步骤
培养步骤
初代培养 继代培养 生根培养
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（1）初代培养
目 的：获得无菌材料和无性繁殖系。
无性繁殖系：是指由一个外植体继代增殖，繁殖出 的具有相同遗传物质的植株群体。包括：芽丛、不 定芽、胚状体、原球茎等。
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9—10 2
饱和浓度 0.1—1 70—75 10—12
1—2 1
4—50mg/L
易 易 易 较难 易 最易 易 较难 中
5—30 5—30 5—30 2—10 0.2—2 5—15 2—10 5—30 30—60
很好 很好 很好 最好 好 好 很好 好 较好
3、外植体的接种
（1）材料吸干后，一手拿镊子，一手拿剪子或 解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成 0.5cm见方的小块；茎切成含有一个节的小段。 微茎尖要剥成只含l—2片幼叶的茎尖大小等。在 接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。
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2、表面灭菌
（1）操作人员穿戴灭过菌的工作服、 口罩。进入接种室前双手用洗涤剂清 洗干净，操作前再用70%酒精或消毒 剂擦洗双手。
（2）操作期间双手和台面常用70% 酒精或消毒剂擦拭。超净工作台使用 前必须用紫外灯照射杀菌，然后开启 风机。
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（3）接种用工具（解剖刀、剪刀、镊 子）可放入70-75%酒精中，使用时需 火焰灼烧灭菌，冷却后使用。
（2）解开包口纸，将培养瓶口几乎水平拿着， 避免灰尘落入瓶中。使瓶囗靠近酒精灯火焰，并 将瓶口在火焰上方转动，使管口里外灼烧数秒钟。
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（3）迅速用镊子夹取切割分离下的所需组织、 细胞、器官，送入培养容器内，轻轻插入培养基。 若是叶片直接附在培养基上，以放1—3块为宜。接 完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。然后及时 盖上瓶盖或封口。
第三章 植物组培快繁程序
植物快速繁殖就 是应用组织培养技术, 快速繁殖名优特新品 物，使其在较短时间 内繁衍较多的植株。 快繁是当前植物细胞 组织培养中应用最广 泛，又最有效的方法 之一。
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主要内容
一、供体植株的培养与取材 二、外植体的灭菌与接种 三、培养 四、驯化移栽 五、组培快繁计划安排与实施
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自 然 环 境 生 长 植 株
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温室控制条件下生长植株
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已离体培养植株
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在多数情况下，应尽量使用温室或 人工气候室控制培养的植物材料作为 外植体来源，减少培养过程中的微生 物感染概率。同时，生长在控制条件 下的植物可以保持培养材料间的一致 性，提高实验的可重复性，也便于培 养技术的规范。
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⑵注意防病 尤其是真菌和细菌病害 的侵染，取自感病植株的外植体，在 培养中的污染率远远高于来自健康植 株的外植体，必要时需使用化学药剂 防治病害。
⑶控制湿度 给供体植株浇水时应从 根部给水，避免从上部浇水，以免上 部形成易于病原侵染的湿度环境；尽 可能降低温室湿度；取材前尽可能保 持植株干爽。
培养基：诱导或分化培养基。
培养基中CTK多，IAA少。
类 型（根据发育方向）：
丛生芽增殖型
器官发生型
胚状体发生型
原球茎发生型
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外植体成苗途径
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根、芽
外 愈伤பைடு நூலகம்织
芽根
试
植
根
芽
管
体 胚状体
苗
原球茎
根、芽
根、芽
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类型 丛生芽增殖型
器官发生型 胚状体发生型
原球茎型 球茎芽型
块茎型 鳞茎型 孢子型 根茎型
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3、材料取材
⑴材料选择 培养材料应选择有代表性的主要植 物、选择性状优良的种质或特殊的基因 型。 快速繁殖时应在植株生长的最适时 期取材，如花药培养应在花粉发育到单 核期取材。
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⑵取材 从生长健壮的无病虫害的植株上选取
发育正常的器官和组织。最好采用茎尖 ，后代性状较稳定，携带细菌较少。
选取材料的大小一般在0.5-1.0cm之间 。胚胎培养或脱毒在0.5cm以下。材料 太大易污染，材料太小难于成活。
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二、外植体的灭菌与接种
1、预处理 先对植物材料进行修剪整理，去
掉不需要部分，将准备使用的植物材 料（外植体）在流水中冲洗20-60分 钟，备用。如特别不洁的外植体，可 先用加有洗涤剂的水清洗10-15分钟 ，再用流水冲洗干净。
注意： 所有操作均应严格保持瓶口在操作区以内，
且不远离酒精灯；工具用后应及时灭菌，避免交 叉污染；工作人员操作时禁止不必要的谈话。
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三、培养
1、培养含义
指把离体植物材料放在培养室(有光照、温度条件) 里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化 成再生植株的过程。
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2、培养方法
(1)固体培养法 即用琼脂固化培养基来培养植物材
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一、供体植株的培养与取材
一般来说，无论何种类型的细胞组 织培养技术，起始阶段均涉及外植体取 材、灭菌与接种培养等基本过程。
外植体来源的环境以及外植体的类型 ，均会影响将来培养的效果，而灭菌、 接种和培养条件的选择与控制，也与外 植体的来源和类型有关。
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1、外植体的来源
-生长在自然环境下的植物 -有目的地培育在温室控制条件下生长的 植物 -无菌环境下已经过离体培养的植物 自然环境中生长的植株，一般带有微生 物，甚至与某些微生物具有寄生关系，使植 株具有内生菌。取自这些植物的外植体，在 培养过程中会有微生物滋生，从而影响培养 效果。