多糖类药物的分析(ppt)
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生量与剩余的酶量成正比，与肝素效价成反比。 。 405 nm测定。
生色底物法
抗Xa因子活性测定
以溶液吸收度和浓度的 对数，照生物检定统计 法中量反应平行线测定 法计算出供试品的抗Xa 因子活性
可 信 限 率 ( FL%) 不 得 大于10%。
第五节、多糖类药物的结构分析
单糖组成 糖苷键连接方式 糖苷键连接位置
为β-构型的N-糖苷键和α-构型的O-糖苷键.
糖蛋白有三种主要类型
糖蛋白分为三种主要类型：O-糖苷键型糖蛋白、N-糖
苷键型糖蛋白和连有磷脂酰肌醇-聚糖的糖蛋白。
在大多数的O-糖苷键型糖蛋白中，GalNAc残基通过O-
糖苷键与一个丝氨酸或苏氨酸残基连接形成，缩写为 GalNAc-Ser/Thr。
将待测样品上柱，待测多糖Ve。
通过标准曲线求出待测多糖分子量。
粘度法、超离心法
粘度法：用已知结构相似的多糖决定K值 （ η ＝ K M2），然后测出待测多糖的特 性粘数η ，计算待测多糖的分子量。
超离心法：根据测得的沉降系数计算多糖 的平均分子量。
高效液相色谱法测定分子量及分布
色谱条件： 凝胶柱（分子量大小），示差折光检测器。
（一）多糖组成单糖的分析
1、水解方法 （1）、完全酸水解法 （2）、部分酸水解、碱水解 （3）、乙酰解 （4）、甲醇解 （5）、酶降解 2、鉴定
生物测定法（肝素钠）
生色底物法（低分子量肝素钠）
乙酰丙酮法（elson-morgan）
——氨基己糖
原理：
氨基己糖在碱性条件下 加热，可与乙酰丙酮缩 合成吡咯衍生物，该衍 生物与对－二甲氨基苯 甲醛反应，反应物呈红 色，于525nm测定吸 收度。
硫酸咔唑法测糖含量
硫酸咔唑法—己糖醛酸测定
当蛋白酶（FⅩa）从生色底物分裂出pNA时，发色 物的产生量与剩余的酶量成正比，与肝素效价成反比。 405 nm测定。
生色底物
Bz：苯甲酰，Pip：哌啶酰， Tos：甲苯磺酰； 对-硝基苯胺（pNA）。
酰胺分解法（amidolytic method）。 当蛋白酶从生色底物分裂出pNA时，发色物的产
（一）超离心法 （二）电泳法 （三）凝胶色谱法 （四）旋光法
第三节 多糖的分子量测定
凝胶色谱法 粘度法 超离心法 高效液相色谱
凝胶层析法
凝胶层析法：将分子量不同 的蛋白质通过一定孔径的凝 胶固定相，由于各组分流经 体积的差异，使不同分子量 的组分得以分离。
最先淋出的是最大的分子。
Kd = 0， Ve= V0 ； Kd = 1 ， Ve= V0+Vi ； 0＜Kd＜1，Ve=V0+KdVi 。
凝胶色谱法
方法：
Sephadex G-200，多糖标准品
分部收集，硫酸-苯酚检测，分别求得洗 脱体积Ve， Ve与 1gM之间存在着线性关
系，绘制标准曲线。
Ve=-KlogM+C
多糖组成-单糖
吡喃
呋喃
六员环糖类似于吡喃，所以又称之为吡喃糖，而五员环糖
类似于呋喃，称之为呋喃糖。
环化单糖中氧化数最高的碳称为异头碳。在环式结构 中，异头碳是手性碳，所以环化的醛糖或酮糖可以呈现两 种异头构型中的一种，即-或-构型。
葡萄糖环状结构
椅式构象
β-D-葡萄糖
α-D-葡萄糖
直链淀粉是葡萄糖以α-1，4糖苷键结合成的链状化合物
CH2OH O
CH2OH O
CH2OH O
CH2OH直链淀粉
O
O OH
O OH O OH
O OH O
OH
OH
OH
OH
纤维素
多糖的理化性质
旋光性 硫酸蒽酮反应（620nm） 硫酸苯酚反应(490nm) 氨基己糖——乙酰丙酮(525nm) 糖醛酸——硫酸咔唑(520nm)
第二节 多糖的纯度测定
在浓硫酸中，己糖醛酸与咔 唑溶液反应生成的反应物呈 红色。
520nm比色
硫酸苯酚法测定糖含量（总糖）
原理：多糖在浓硫酸作 用下水解成单糖，该单 糖在强酸性条件下，与 苯酚反应生成橙色衍生 物。
它在490nm处有最大吸 收，其吸光度与浓度呈 线性关系。
蒽酮法测定糖含量（总糖）
原理：多糖在浓硫酸中 水解后，进一步脱水生 产糠醛类衍生物，与蒽 酮作用形成蓝色化合物， 620nm进行比色测定。
特点：10-100μg范围 内其颜色的深浅与糖含 量成正比。
灵敏度高。
生物测定法－肝素测定
美国药典采用羊血浆法。
即比较肝素标准品和供 试品延长血浆凝结时间 的作用来测定肝素的效 价。
生物测定法——肝素测定方法
标准品稀释液的配制:精密量取标准品溶液，按高、中、 低三剂种量浓组度（的稀ds释1 、液d，s相2、邻d两s3浓）度用的0比.9值%为氯1化:0钠.7溶。液配成
在N-糖苷键型糖蛋白中，GlcNAc残基通过N-糖苷键与
一个天冬酰胺残基相连，缩写为GlcNAc-Asn。
O- （N-）糖苷键型糖蛋白
O-糖苷键
N-糖苷键
磷酸乙醇胺残基
磷脂酰肌醇-聚糖的糖 蛋白
பைடு நூலகம்
蛋白聚糖
软骨蛋白聚 糖:聚集体的分
子量非常大（大 约为2×108）， 其中含有透明质 酸、硫酸角质素、 硫酸软骨素、连 接蛋白、核心蛋 白和大量的寡糖 链。
多糖类药物的分析 (ppt)
优选多糖类药物的分析
组成分类：
均一多糖 不均一多糖:不同类型的单糖缩合而成 粘多糖：含氮的不均一多糖 结合糖：肽聚糖、糖蛋白(glycoproteins)和蛋
白聚糖
糖蛋白通过糖肽键(carbohydrate-peptide linkage) 将糖链和肽链两部分连接起来,连接方式主要分
标准曲线：
标准曲线：LogMW = a+b tR
MW为重均分子量，tR为保留时间
待测多糖分子量（GPC专用软件）：
重均分子量 Mw=∑(RIiMi)/∑ RIi
Mi为供试品在保留时间ti 时的分子量，RIi在第i部分中
被洗脱物质的量（重量）。
第四节、多糖的含量测定
比色法（硫酸咔唑法、乙酰丙酮法、 硫酸苯酚法、蒽酮法）
供试品稀释液的配制：按供试品的标示量或估计效价 （低（AT）dT，1 、照d标T2准、品d溶T3 液）与三稀种释浓液度的的稀配释制液法。配成高、中、
各管凝结时间换算成对数，照生物检定统计法中的量反 应平行线测定法计算效价及实验误差。
可信限率（FL%）不得大于5%。
生色底物法原理－肝素、低分子肝素
生色底物法
抗Xa因子活性测定
以溶液吸收度和浓度的 对数，照生物检定统计 法中量反应平行线测定 法计算出供试品的抗Xa 因子活性
可 信 限 率 ( FL%) 不 得 大于10%。
第五节、多糖类药物的结构分析
单糖组成 糖苷键连接方式 糖苷键连接位置
为β-构型的N-糖苷键和α-构型的O-糖苷键.
糖蛋白有三种主要类型
糖蛋白分为三种主要类型：O-糖苷键型糖蛋白、N-糖
苷键型糖蛋白和连有磷脂酰肌醇-聚糖的糖蛋白。
在大多数的O-糖苷键型糖蛋白中，GalNAc残基通过O-
糖苷键与一个丝氨酸或苏氨酸残基连接形成，缩写为 GalNAc-Ser/Thr。
将待测样品上柱，待测多糖Ve。
通过标准曲线求出待测多糖分子量。
粘度法、超离心法
粘度法：用已知结构相似的多糖决定K值 （ η ＝ K M2），然后测出待测多糖的特 性粘数η ，计算待测多糖的分子量。
超离心法：根据测得的沉降系数计算多糖 的平均分子量。
高效液相色谱法测定分子量及分布
色谱条件： 凝胶柱（分子量大小），示差折光检测器。
（一）多糖组成单糖的分析
1、水解方法 （1）、完全酸水解法 （2）、部分酸水解、碱水解 （3）、乙酰解 （4）、甲醇解 （5）、酶降解 2、鉴定
生物测定法（肝素钠）
生色底物法（低分子量肝素钠）
乙酰丙酮法（elson-morgan）
——氨基己糖
原理：
氨基己糖在碱性条件下 加热，可与乙酰丙酮缩 合成吡咯衍生物，该衍 生物与对－二甲氨基苯 甲醛反应，反应物呈红 色，于525nm测定吸 收度。
硫酸咔唑法测糖含量
硫酸咔唑法—己糖醛酸测定
当蛋白酶（FⅩa）从生色底物分裂出pNA时，发色 物的产生量与剩余的酶量成正比，与肝素效价成反比。 405 nm测定。
生色底物
Bz：苯甲酰，Pip：哌啶酰， Tos：甲苯磺酰； 对-硝基苯胺（pNA）。
酰胺分解法（amidolytic method）。 当蛋白酶从生色底物分裂出pNA时，发色物的产
（一）超离心法 （二）电泳法 （三）凝胶色谱法 （四）旋光法
第三节 多糖的分子量测定
凝胶色谱法 粘度法 超离心法 高效液相色谱
凝胶层析法
凝胶层析法：将分子量不同 的蛋白质通过一定孔径的凝 胶固定相，由于各组分流经 体积的差异，使不同分子量 的组分得以分离。
最先淋出的是最大的分子。
Kd = 0， Ve= V0 ； Kd = 1 ， Ve= V0+Vi ； 0＜Kd＜1，Ve=V0+KdVi 。
凝胶色谱法
方法：
Sephadex G-200，多糖标准品
分部收集，硫酸-苯酚检测，分别求得洗 脱体积Ve， Ve与 1gM之间存在着线性关
系，绘制标准曲线。
Ve=-KlogM+C
多糖组成-单糖
吡喃
呋喃
六员环糖类似于吡喃，所以又称之为吡喃糖，而五员环糖
类似于呋喃，称之为呋喃糖。
环化单糖中氧化数最高的碳称为异头碳。在环式结构 中，异头碳是手性碳，所以环化的醛糖或酮糖可以呈现两 种异头构型中的一种，即-或-构型。
葡萄糖环状结构
椅式构象
β-D-葡萄糖
α-D-葡萄糖
直链淀粉是葡萄糖以α-1，4糖苷键结合成的链状化合物
CH2OH O
CH2OH O
CH2OH O
CH2OH直链淀粉
O
O OH
O OH O OH
O OH O
OH
OH
OH
OH
纤维素
多糖的理化性质
旋光性 硫酸蒽酮反应（620nm） 硫酸苯酚反应(490nm) 氨基己糖——乙酰丙酮(525nm) 糖醛酸——硫酸咔唑(520nm)
第二节 多糖的纯度测定
在浓硫酸中，己糖醛酸与咔 唑溶液反应生成的反应物呈 红色。
520nm比色
硫酸苯酚法测定糖含量（总糖）
原理：多糖在浓硫酸作 用下水解成单糖，该单 糖在强酸性条件下，与 苯酚反应生成橙色衍生 物。
它在490nm处有最大吸 收，其吸光度与浓度呈 线性关系。
蒽酮法测定糖含量（总糖）
原理：多糖在浓硫酸中 水解后，进一步脱水生 产糠醛类衍生物，与蒽 酮作用形成蓝色化合物， 620nm进行比色测定。
特点：10-100μg范围 内其颜色的深浅与糖含 量成正比。
灵敏度高。
生物测定法－肝素测定
美国药典采用羊血浆法。
即比较肝素标准品和供 试品延长血浆凝结时间 的作用来测定肝素的效 价。
生物测定法——肝素测定方法
标准品稀释液的配制:精密量取标准品溶液，按高、中、 低三剂种量浓组度（的稀ds释1 、液d，s相2、邻d两s3浓）度用的0比.9值%为氯1化:0钠.7溶。液配成
在N-糖苷键型糖蛋白中，GlcNAc残基通过N-糖苷键与
一个天冬酰胺残基相连，缩写为GlcNAc-Asn。
O- （N-）糖苷键型糖蛋白
O-糖苷键
N-糖苷键
磷酸乙醇胺残基
磷脂酰肌醇-聚糖的糖 蛋白
பைடு நூலகம்
蛋白聚糖
软骨蛋白聚 糖:聚集体的分
子量非常大（大 约为2×108）， 其中含有透明质 酸、硫酸角质素、 硫酸软骨素、连 接蛋白、核心蛋 白和大量的寡糖 链。
多糖类药物的分析 (ppt)
优选多糖类药物的分析
组成分类：
均一多糖 不均一多糖:不同类型的单糖缩合而成 粘多糖：含氮的不均一多糖 结合糖：肽聚糖、糖蛋白(glycoproteins)和蛋
白聚糖
糖蛋白通过糖肽键(carbohydrate-peptide linkage) 将糖链和肽链两部分连接起来,连接方式主要分
标准曲线：
标准曲线：LogMW = a+b tR
MW为重均分子量，tR为保留时间
待测多糖分子量（GPC专用软件）：
重均分子量 Mw=∑(RIiMi)/∑ RIi
Mi为供试品在保留时间ti 时的分子量，RIi在第i部分中
被洗脱物质的量（重量）。
第四节、多糖的含量测定
比色法（硫酸咔唑法、乙酰丙酮法、 硫酸苯酚法、蒽酮法）
供试品稀释液的配制：按供试品的标示量或估计效价 （低（AT）dT，1 、照d标T2准、品d溶T3 液）与三稀种释浓液度的的稀配释制液法。配成高、中、
各管凝结时间换算成对数，照生物检定统计法中的量反 应平行线测定法计算效价及实验误差。
可信限率（FL%）不得大于5%。
生色底物法原理－肝素、低分子肝素