含动物药、矿物药的中药制剂分析

第六章 含动物药、矿物药的中药制剂分析
第一节 含动物药中药制剂的分析
牛黄及其制剂分析 麝香及其制剂的分析 熊胆及其制剂分析 蛇胆及其制剂分析 蟾酥及其制剂分析 斑蝥及其制剂分析
牛黄及其制剂分析
人工牛黄：牛胆汁或猪胆汁经人工提取制成的浅棕色或金黄色
粉末。
人工培育牛黄：在牛的腹部施胆囊手术，放进异物，注入经培
2.化学成分：含斑蝥素（斑蝥酸酐cantharidin）1% ～2%，脂肪12%，树脂、 蚁酸、甲酸、色素、挥发油、甲壳质等。同时还含有多种无机元素。
3.定性鉴别
理化鉴别：利用斑蝥素的显微特征及化学性质进行鉴别。
斑蝥及其制剂分析
纸色谱法 样品水提液点于新华层析滤纸上； 展开剂：正丁醇-95%乙醇-冰醋酸-水（4∶1∶1∶2）；105℃烘
(1)试样分解方法
溶解法 将试样溶解在水、酸或其他溶剂中的分解方法
(湿法) 通常采用水、稀酸、浓酸、混合酸的顺序进行处理。
将试样与固体熔剂混合，然后在高温下加热至全熔
熔融法 或半熔，使欲测组分转变为可溶于水或酸中的化合物。
(干法)
碱性熔剂（如碳酸钠、氢氧化钠）；
熔剂 酸性溶剂（如硫酸氢钾、焦硫酸钾）；
合物，可用分光光度 法测定。如砷盐的检查等。
原子吸收光谱法：该法能测定几乎全部金属元素和一些碱金属元
素，广泛应用于中药原料及其制剂中各种微量元素的分析。
含砷矿物药及其制剂分析
雄黄（主要成分为As2S2） 1.含砷的矿物药主要有 雌黄（主要成分为As2S3）
砒石（主要成分为As2O3） 砒霜（As2O3） 2.定性鉴别：利用其中所含元素砷或硫的理化性质进行鉴别。
蟾酥及其制剂定性鉴别
3.红外光谱法 蟾蜍二烯内酯类成分在1800～1700cm-1间有二个吸收峰。
六元内酯环内共轭程度高于五元内酯环，峰位相对向低波数移 动40cm-1。
较低波数的峰是α 、β 不饱和羰基产生的正常吸收，较高波数 的峰是不正常吸收，其强度在极性溶剂中减弱或消失。 4.薄层色谱法：采用多种硅胶薄层板、溶剂系统和显色方法，通 过颜色和Rf 值的差异进行鉴别。 5.紫外光谱法：通过比较其在不同溶剂中有不同最大吸收波长进 行鉴别。
熊胆及其制剂分析
熊胆: 熊科动物黑熊Selenarctos thibetanus Cuvier或 棕熊Ursus arctos Linnaeus的干燥胆，是我国传 统的名贵中药材。
熊胆的化学成分： 熊胆中的主要化学成分为胆汁酸类（约占胆汁中的58～59%）
成分，如牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）等； 胆汁酸通常与牛磺酸、甘氨酸结合，以钠盐或钙盐的形式存
紫外光谱法：根据麝香在不同溶剂中有不同最大吸收波 长进行鉴别；
薄层色谱法：采用适当薄层条件对麝香供试品溶液进行色 谱分离后，选用麝香中所含多种化学成分对其进行鉴别。
含量测定
气相色谱法：常以麝香酮为对照品进行测定； 薄层扫描法：利用高效薄层扫描定量方法可测定麝香中3β ，
17α -二羟基-5α 雄甾烷、3α 羟基-5α 雄甾烷-17酮等8种 雄甾烷类化合物的含量； 高效液相色谱法：利用高效液相色谱法可对麝香中5α -雄甾 烷-3β ，17α -二醇、5β -雄甾烷-3α ，17α -二醇等8种 甾体成分进行含量测定。
石灰华等。 （7）含硅的矿物药：如滑石、白石英、阳起石、青礞石、云母石、
麦饭石等。 （8）含硫的矿物药：如芒硝、朴硝、玄明粉、硫黄等。 （9）含氯的矿物药：如大青盐、秋石、紫脑砂、白脑砂等。 （10）其他矿物药：白矾、炉甘石、无名异、卤碱、硼砂、硝石、琥珀等。
含矿物药中药制剂的分析
2.矿物药的分析方法
含汞矿物药及其制剂分析
含汞的矿物药主要有
水银（主要成分Hg） 朱砂（主要成分HgS） 灵砂（主要成分HgS） 银朱（主要成分HgS） 升药（主要成分HgO） 轻粉（主要成分Hg2Cl2） 粉霜（主要成分Hg2Cl2） 白降丹（主要成分Hg2Cl2与HgCl2）
定性鉴别
亚汞盐：取供试品溶液，加碘化钾试液，振摇，即生成黄 绿色沉淀，瞬即变为灰绿色，并逐渐变为灰黑色。
显色条件：30%硫酸乙醇溶液（V/V），喷后在105℃烘烤10分钟，置紫外光 灯（254nm）下观察。
4.含量测定：蛇胆中主要成分为胆汁酸类，故其含量测定方法即是胆汁酸类 成分分析方法。
蟾酥及其制剂分析
蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor. 蟾酥 黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥分泌物；
养的大肠杆菌菌种，人为地造成胆结石，在牛体内埋植一年或 更长时间，将核取出，凝集于核体表面的附着物，即为人工培 育牛黄。
牛黄的化学成分：天然牛黄及人工培育牛黄中均含有胆色素、
胆汁酸、脂类、肽类、氨基酸和无机元素。
牛黄及其制剂分析
胆汁酸的化学反应 Pettenkofer反应：利用蔗糖经浓硫酸作用生成羟甲基糠醛，可与胆汁酸结
鹅去氧胆酸为对照品，采用高效液相色谱法进行测定。气相色 谱法：胆酸样品制成乙酰基衍生物的甲酯，以胆甾醇己酸酯为 内标物，可测定石胆酸、猪去氧胆酸、熊去氧胆酸、去氧胆酸、 鹅去氧胆酸及胆酸的含量。
蛇胆及其制剂分析
1.蛇胆汁：眼镜蛇科、游蛇科或蝰蛇科动物多种蛇的胆汁。
2.蛇胆汁化学成分：主要化学成分为胆汁酸类，且多数以与牛磺酸结合的结 合型胆甾酸形式；同时蛇胆中还有无机元素。
3.气相色谱法：样品提取液经柱层析或薄层层析后，采用FID检测器，内标法或外标 法定量测定。
4.高效液相色谱法：蟾酥中含有的蟾蜍甾二烯类、强心甾烯蟾毒类和吲哚碱类成分， 都具有紫外吸收，可用高效液相色谱法测定。
斑蝥及其制剂分析
1.斑蝥：芫青科昆虫南方大斑蝥Mylabris phalerata Pallas或黄黑小斑蝥 Mylabris cichorii Linnaeus的干燥体。
清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。
牛黄及其制剂分析含量测定
胆酸的含量测定 化学法测总胆酸的含量 比色法测去氧胆酸的含量 滴定法测定猪去氧胆酸的含量 薄层扫描法测定胆酸的含量
胆红素的含量测定 分光光度法 高效液相色谱法
麝香及其制剂的分析
麝香：鹿科动物林麝Moschus berezovskii Flerov、马 麝Moschus sifanicus Przewalski和原麝Moschus moschiferus linnaeus成熟雄体脐下腺香囊中干燥分泌物。
3.含量测定
(1)碘量法
试样用硫酸分解，转变成亚砷酸。中和至pH=8，以淀粉
直接碘量法
作指示剂，用碘标准液滴至蓝色。
试样采用碱熔分解后，以淀粉作指示剂，用碘标准液滴定。
间接碘量法：试样采用过氧化氢分解后，以淀粉作指示剂，用硫代硫酸
钠溶液滴定。
(2)分光光度法：采用二乙基二硫代氨基甲酸银法测定样品中砷含量。
干后，用0.5%茚三酮溶液喷雾，于105℃加热10分钟； 可见5个 斑点，斑点显浅红至蓝紫色。 薄层色谱法 吸附剂： 硅胶G 展开剂：氯仿-丙酮（98∶2） 显色剂：0.1%溴甲酚绿乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。
斑蝥及其制剂分析
4.含量测定 吸附剂：硅胶G；
薄层扫描法 展开剂：氯仿-丙酮（95∶5）； 显色剂：0.04%溴甲酚绿乙醇溶液； λ s=445nm,λ R=605nm处扫描测定。
具有较强的生理活性； 毒性较大。 化学成分复杂；
化学成分 主要含有蟾酥甾二烯类（游离型称蟾毒配基，结合 型多为脂溶性的蟾酥毒素类）、强心甾烯蟾毒类和吲哚碱类。
蟾酥及其制剂定性鉴别
1.显色反应：利用蟾酥碱，蟾酥甲碱等吲哚基的显色反应进行鉴 别。
2.纸色谱法: 蟾酥氯仿提取液点在定性滤纸上 固定相：甲酰胺 展开剂：苯-氯仿（6∶4）为流动相展开，挥干， 显色剂：喷三氯化锑氯仿液，加热显色，在日光或紫外光下观 察， 检识：蟾酥中10个蟾酥二烯内酯成分呈现不同的颜色斑点。
气相色谱法：以斑蝥素为对照品，采用外标一点法进行测定。 中国药典2000年版即采用该法测定斑蝥中斑蝥素含量。
酸碱滴定法：斑蝥素可溶于氢氧化钠溶液，据此可采用适当指 示剂进行酸碱滴定。
第二节 含矿物药中药制剂的分析
1.矿物药的分类 （1）含砷的矿物药：如雄黄、雌黄、信石、砒霜等。 （2）含汞的矿物药：如朱砂、灵砂、轻粉、红粉、白降丹等。 （3）含铅的矿物药：如红丹、铅粉、密陀僧、铅霜等。 （4）含铜的矿物药：如胆矾、铜绿、绿盐、扁青、曾青、空青等。 （5）含铁的矿物药：如赭石、磁石、禹余粮、皂矾、针砂、黄矾等。 （6）含钙的矿物药：如石膏、钟乳石、花蕊石、紫石英、寒水石、
合生成紫色。 Gregory Pascoe反应：此反应原理与上述Pettenkofer反应相似。此反应可
作为胆酸的定量反应。 Hammarsten反应：20%铬酸溶液溶解少量样品，温热，胆酸显紫色显色。
胆红素的化学反应
Gmelin反应：将浓硝酸数滴沿试管壁小心加入含有胆色素的样品中，接触 处出现的绿、蓝、紫、红及黄等颜色环。
麝香的化学成分：
天然麝香中的化学成分极为复杂； 主要有麝香酮等大环化合物、甾族化合物、胆固醇、酯和蜡、
蛋白质、肽、氨基酸、无机盐及尿囊素、胆酸和胆红素样物 质等其他成分。
麝香酮是麝香中有香气的主要成分，一般含量为2%～4%。
麝香及其制剂的分析
定性鉴别
理化鉴别：根据麝香仁的物理性状及显微特征进行鉴别； 气相色谱法：因麝香具挥发性，故可用GC法进行鉴别；
Van den Bergh反应（重氮化反应）：胆红素试剂与重氮化对氨基苯磺酸重 氮盐偶合生成偶氮染料，在强酸中呈蓝紫色，pH2.0～5.5时呈红色，pH5.5 以上则呈绿色。
牛黄及其制剂分析定性鉴别
理化鉴别 薄层鉴别
胆汁酸的化学反应 胆红素的化学反应； 牛黄的显微鉴别。 吸附剂：硅胶G 对照品：胆酸、去氧胆酸 展开剂：异辛烷-醋酸乙酯-冰醋酸（15∶7∶5） 显色剂：10%硫酸乙醇液，105℃加热至斑点显色
在； 熊胆中含有的胆色素以胆红素为主，尚有胆黄素，胆褐素； 还含有多种氨基酸、胆固醇、脂肪、磷脂及无机元素。
熊胆及其制剂分析
定性鉴别 光谱鉴别：制备胆仁甲醇液，测定紫外吸收光谱，在273±2nm波
长处有最大吸收。 薄层层析法：薄层板：110℃活化的硅胶G板；
展开剂：异辛烷-醋酸乙酯-醋酸（5∶5∶1）； 显色剂；喷30%硫酸乙醇溶液，于105℃加热10 分 钟显色； 检视结果：可检出游离及结合的胆酸（黄棕色）、猪去氧胆酸 （绿褐色）、熊去氧胆酸（绿褐色）、鹅去氧胆酸（绿 褐色）、去氧胆酸（黄棕色）及石胆酸（紫色）。
熊胆及其制剂分析
含量测定
薄层色谱-比色法：取胆酸类样品的乙醇溶液，经色谱分离后，
刮取胆酸、去氧胆酸及甘氨胆酸相应斑点，提取后在分光光度 计上测定。
薄层扫描法：样品供试液经薄层色谱分离后，以熊去氧胆酸和
鹅去氧胆酸为对照品，采用薄层扫描仪扫描测定。
高效液相色谱法：样品经适当处理后，以牛磺去氧胆酸和牛磺
蟾酥及其制剂含量测定
1.分光光度法：样品经适当处理后，采用差示分光光度法或吸收系数法进行含量测 定。
2.薄层扫描法 吸附剂：硅胶G； 展开剂：丙酮一氯仿一环Fra Baidu bibliotek烷； λ s300nm,λ R340nm处进行反射式锯齿扫描。 可测定脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵、蟾毒它灵、远华蟾毒精及日蟾毒它灵等 多种成分。
氧化性溶剂（如过氧化钠、碳酸钠加硝酸钾）；
还原性溶剂（如碳酸钠加硫）等。
2.矿物药的分析方法
含矿物药中药制剂的分析
(2)含量测定方法
化学分析法
容量分析法：常用氧化还原滴定和配位滴定，如 中药密陀僧的
含量测定；
重量法：常用沉淀重量法，如汞的定量分析。
可见分光光度法：一些无机金属元素可与某些化合物形成有色配
汞盐：取不含过量硝酸的供试品溶液，涂于光亮的铜箔 表面，擦拭后即生成一层光亮似银的沉积物。
3.定性鉴别：多以薄层色谱法为主。薄层板：多用硅胶G薄层板；
展开系统：常用的有异戊醇-冰醋酸-水（18∶10∶6）或（9∶3∶1）；甲 苯-冰醋酸-水（10∶10∶1）；异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水 （10∶5∶5∶3∶1）等。对照品：胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、猪去氧 胆酸、熊去氧胆酸、石胆酸、胆固醇、甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、牛磺去 氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸等。