总结(基因克隆的策略与途径).

2）筛选方法 1）DNA 探针
2）抗体 探针
同位素标记 非同位素标记 单抗 多抗
基因克隆的策略与途径
文库的筛选
阳性克隆
亚克隆(方法同上）
基因分析
3’ RACE 和5’ RACE
全长基因
构建转化表达载体
转基因
基因克隆的策略与途径
转基因 植物
农杆菌介导
基因枪 其它
Southern blot
表达分析 转代繁殖
感受态细胞制备
分析
转化步骤
back
基因克隆蛋白质途径
目标生物
色谱等技术
纯化的蛋白质
等基因系或
拟等基因系 双向蛋白 质电泳
特异斑点
部分氨基酸 序列测定
抗体制备 （单抗或多抗）
合成寡聚核甘酸 引物
PCR反应
探针
探针
文库筛选
文库的构建与筛选
1）文库类型： 克隆文库 表达文库
基因组文库 cDNA文库
构建时注意事项
基因克隆的策略与途径
通过转基因途径进行作物的遗传性状改良 基因
已报道基因
未报道基因
PCR 反应 克隆于质粒载体
新基因的克隆
蛋白质
核酸
利用质粒载体克隆的方法
1） PCR产物：直接连接于T-Vector 载体。
2） 其它：
DNA的酶切
质粒载体酶切
去磷酸化
相应DNA片段
去磷酸化后载体
重组质粒
受体类型
转化
Norththern blot Western blot 性状分析
基因克隆核酸途径
转座插入突变
诱导或 拟等基因 时空表达 系材料
Байду номын сангаас
文库筛选 或PCR直接克隆
mRNA差异分析
基因分析
文库筛选 或PCR直接克隆
完整基因
其它方法
基因组DNA
RPDA/AFLP 差别显示 DD DNA 芯片
(RFLP)