纯化藻蓝蛋白的测定

纯化藻蓝蛋白的测定

一、目的

1掌握藻蓝蛋白色价指标。

2掌握藻蓝蛋白色价的测定方法。

3 熟练分光光度计测定光密度操作。

二、实验原理

藻蓝蛋白在620nｍ处有最大吸收值，普通蛋白在280nm处有最大吸收值，目前国内和出口螺旋藻藻蓝蛋白都是以A620/A280（色价）作为判定藻蓝蛋白纯度的指标。根据硫酸铵分级沉淀纯化藻蓝蛋白的色价和提取液的色价比值可以计算出纯化比，表征沉淀沉淀的效果。

三、实验器材及试剂

1、实验仪器及工具：

紫外可见光分光光度计、量筒、透析袋、移液枪等。

2、实验原料及试剂

超纯水、稀酸、稀碱等。

四、实验方法及步骤

1 硫酸铵沉淀溶解：将获得的硫酸铵沉淀蛋白用适量水溶解。

2、分光光度计调零：用空白对照调节分光光度计吸光值为零。

3、藻蓝蛋白浓度测定：分别测定藻蓝蛋白的A620和A280，计算出它们的比值，表征藻蓝蛋白的纯度。

5、纯化度计算：用硫酸铵分级沉淀后的A620/A280除以提取液的A620/A280所得值即为纯化度。

五、实验结果记录

记录纯化后所得的藻蓝蛋白质量、纯化后藻蓝蛋白的色价，计算出纯化比和纯化收率。

六、实验结果分析及讨论

分析硫酸铵饱和度和藻蓝蛋白纯化之间的关联性。