ANA的检测及临床应用
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1.
4. IFANA作为总抗体筛查实验，应该结合抗体确认试
验为临床诊断起到更好的指导作用，必要时还应提 供抗体效价。
抗核抗体的应用
抗U1-rRNP抗体：
高滴度的抗U1-rRNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率95-100%，抗体滴度与疾病活 动性相关。在30-40%的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-rRNP抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体。 抗Sm抗体： 系统性红斑狼疮的特异性抗体，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断性指标，但阳性率为30%左右。 抗SS-A抗体： 与各类自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征（40-80%）、也见于系统性红斑狼疮（30-40%）和原发性胆汁性 肝硬化（20%）中，偶见于慢性活动性肝炎。此外，在100%的新生儿红斑狼疮中抗SS-A抗体阳性。该抗体可经胎盘 传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。 抗SS-B抗体： 几乎仅见于干燥综合征（40-80%）和系统性红斑狼疮（10-20%）的女性患者中，男女比例为1：29。在干燥综合征中 抗SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现。 抗Scl-70抗体： 见于25-75%的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾病活动性而异（Scl=硬化症）。在局限型硬化 症中不出现。 抗PM-Scl抗体： 常见于多肌炎与硬化症的重叠综合征中，50%的该抗体阳性患者为肌炎与硬化症的重叠综合征，抗PM-Scl抗体也可见 于单独的多肌炎患者中，阳性率为8%，在弥散型硬化症中的阳性率为2-5%。 抗Jo-1抗体： 见于多肌炎，阳性率为25-35%。常与合并肺间质纤维化相关。
抗着丝点抗体： 与局限型进行性系统性硬化症（CREST综合征：钙质沉着、Raynaud，s病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张）有关， 阳性率为70-90%。在原发性胆汁性肝硬化患者中也可检测到该抗体（阳性率10-30%）。还可出现于雷诺氏综合征中。 抗PCNA抗体： PCNA为增殖细胞核抗原，其表达与细胞周期有关。抗PCNA抗体为系统性红斑狼疮的特异性抗体，但阳性率仅为3%。有文献报 道，抗PCNA抗体可能与系统性红斑狼疮患者发展为弥散性增殖性肾小球肾炎有关。 抗dsDNA抗体： 对系统性红斑狼疮具有很高的特异性。除抗Sm抗体外，抗dsDNA抗体也可作为该病的一个血清学标志，阳性率为40-90%，并 且抗dsDNA抗体滴度与疾病的活动度相关，可用于疗效监控。 抗核小体抗体： 在系统性红斑狼疮患者血清中的阳性率为50-95%，特异性几乎为100%。核小体是细胞染色体的功能亚单位，由DNA和组蛋白以 特殊的方式组成。抗核小体抗体比抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体更早出现于系统性红斑狼疮的早期，在系统性红斑狼疮的诱导 和致病中有重要作用。临床资料显示，有15-19%的抗dsDNA抗体阴性的SLE患者中抗核小体抗体阳性。因此联合检测抗dsDNA 及抗核小体抗体可提高SLE血清学检出率。 抗组蛋白抗体： 抗一种或几种组蛋白抗体或抗H2A-H2B复合物抗体在药物（普鲁卡因胺、肼酞嗪以及其它药物）诱导的红斑狼疮中比较常见 （阳性率为95%）。另外，在30-70%的系统性红斑狼疮和15-50%的类风湿性关节炎患者中也可检出抗组蛋白抗体。 抗核糖体P蛋白抗体： 是系统性红斑狼疮的特异性标志，阳性率为5-15%。普遍认为ARPA的滴度与SLE的活动性相关，还与SLE合并中枢神经系统症状、 肾脏或肝脏受累相关。 抗M2抗体： 高滴度的抗线粒体2型抗体是原发性胆汁性肝硬化的标志，阳性率为85-95%，另外，在其它慢性肝脏疾病（30%）和进行性系统 性硬化症（7-25%）中也可检出抗M2抗体，但滴度较低。 抗Ro-52抗体： SS-A抗原是一种小核糖核蛋白，由一个RNA分子和两种不同的蛋白质（分子量分别为52和60kDa）组成，抗-SS-A 60 kDa蛋白 的抗体对于干燥综合症和系统性红斑狼疮的特异性更高，而单独抗SS-A 52 kDa的抗体不具有疾病的特异性，并且容易与其它抗 体发生交叉反应。
ANA检测及临床应用
抗核抗体的定义
传统定义：针对细胞核成分自身抗体的总称。 广义定义：针对细胞内所有抗原成分的自身抗体总称。对ANA的理解不再局限于核成分， 而是抗核酸和抗核蛋白抗体的总称。
ANA的把抗原分布：细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。
ENA：抗可提取核抗原，包括SSA,SSB,Scl-70,Jo-1,Sm,RNP/Sm六种靶抗原。
抗核抗体的检测方法
间接荧光免疫法
具有完整的抗原谱（细胞核和细胞浆） 检测ANA的金标准，具有很高的特异性跟敏感性 基质组合：HEp-2细胞+组织切片
免疫印迹法
先将混合性抗原做凝胶电泳，分离开不同的区带，然后把区带转印到硝酸纤维膜上，加入待检血清，最后用相应的酶标抗体使 相应的抗原带显色
酶联免疫法
间接免疫荧光法检测原理
抗核抗体荧光模型及分类
核均质： 核膜型： 斑点型： 细胞核 着丝点型 dsDNA、组蛋白和核小体 Gp210 核糖核蛋白：Sm、nRNP、SSA、SSB CENP-B
核仁型： ANA
Sel-70、RNA多聚酶等
胞浆颗粒型：
细胞浆 胞浆纤维型：
Байду номын сангаас
线粒体、Jo-1、核糖体等
波形蛋白
分裂期细胞型： 纺锤体、中间体、中心粒等
核均质型
间期细胞呈均匀荧光 分裂期细胞浓缩染色 体荧光增强 靶抗原：ds-DNA、 核小体、组蛋白
核膜型
Hep-2：间期细 胞呈现均匀的荧光 核周增强、分裂期 细胞浓缩染色体阴 性 肝片：干细胞呈 特征性环状荧光 靶抗原:gp210
斑点型
粗颗粒 细颗粒 间期细胞呈粗（细）颗 粒样荧光，核仁阴性， 分裂期细胞浓缩染色体 阴性，染色体周围呈颗 粒样荧光 靶抗原：nRNP、Sm
着丝点和核点型
着丝点 核点型 着丝点型间期细胞内出 现大小数目相同、均匀分 布的点状荧光、分裂期细 胞 浓缩染色体出现浓缩点 状荧光 靶抗原CENP-B 核点型间期细胞出现大 小数目、强度不均的点状 荧光、分裂期细胞浓缩染 色体阴性 靶抗原：Sp100
ANA检测结果判读
一般超过95%正常人群ANA水平的数值定义为ANA 阳性，对大多数实验室而言，通常认为IFANA滴度>1： 80为阳性。 2. ANA阳性可见于多种临床情况，除了自身免疫性风 湿病，还可见于各种原因引起的肝硬化、自身免疫 性肝病、肿瘤以及少数正常人尤其是老年人，但在 正常人种通常IFANA滴度较低。 3. ANA阳性的意义需结合临床资料综合分析，ANA阳 性并不能确立某种临床诊断，反之，ANA阴性也不 能排除自身免疫性病。
核仁型
间期细胞核仁阳性、 分裂期细胞浓缩染 色体阴性 靶抗原：Sel-70、 RNA多聚酶
线粒体型
Hep-2：细胞浆内 粗颗粒样荧光 肝细胞：呈颗粒样 荧光整个视野呈细 沙状荧光 靶抗原：线粒体
ds-DNA的检测
核 动基体 鞭毛体 以绿蝇短膜虫为基 质，其动基体有丰富 的 天 然 ds-DNA ， 一 般多以核和动基体同 时阳性出现，可在镜 下绿色荧光的大小点
4. IFANA作为总抗体筛查实验，应该结合抗体确认试
验为临床诊断起到更好的指导作用，必要时还应提 供抗体效价。
抗核抗体的应用
抗U1-rRNP抗体：
高滴度的抗U1-rRNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率95-100%，抗体滴度与疾病活 动性相关。在30-40%的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-rRNP抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体。 抗Sm抗体： 系统性红斑狼疮的特异性抗体，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断性指标，但阳性率为30%左右。 抗SS-A抗体： 与各类自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征（40-80%）、也见于系统性红斑狼疮（30-40%）和原发性胆汁性 肝硬化（20%）中，偶见于慢性活动性肝炎。此外，在100%的新生儿红斑狼疮中抗SS-A抗体阳性。该抗体可经胎盘 传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。 抗SS-B抗体： 几乎仅见于干燥综合征（40-80%）和系统性红斑狼疮（10-20%）的女性患者中，男女比例为1：29。在干燥综合征中 抗SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现。 抗Scl-70抗体： 见于25-75%的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾病活动性而异（Scl=硬化症）。在局限型硬化 症中不出现。 抗PM-Scl抗体： 常见于多肌炎与硬化症的重叠综合征中，50%的该抗体阳性患者为肌炎与硬化症的重叠综合征，抗PM-Scl抗体也可见 于单独的多肌炎患者中，阳性率为8%，在弥散型硬化症中的阳性率为2-5%。 抗Jo-1抗体： 见于多肌炎，阳性率为25-35%。常与合并肺间质纤维化相关。
抗着丝点抗体： 与局限型进行性系统性硬化症（CREST综合征：钙质沉着、Raynaud，s病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张）有关， 阳性率为70-90%。在原发性胆汁性肝硬化患者中也可检测到该抗体（阳性率10-30%）。还可出现于雷诺氏综合征中。 抗PCNA抗体： PCNA为增殖细胞核抗原，其表达与细胞周期有关。抗PCNA抗体为系统性红斑狼疮的特异性抗体，但阳性率仅为3%。有文献报 道，抗PCNA抗体可能与系统性红斑狼疮患者发展为弥散性增殖性肾小球肾炎有关。 抗dsDNA抗体： 对系统性红斑狼疮具有很高的特异性。除抗Sm抗体外，抗dsDNA抗体也可作为该病的一个血清学标志，阳性率为40-90%，并 且抗dsDNA抗体滴度与疾病的活动度相关，可用于疗效监控。 抗核小体抗体： 在系统性红斑狼疮患者血清中的阳性率为50-95%，特异性几乎为100%。核小体是细胞染色体的功能亚单位，由DNA和组蛋白以 特殊的方式组成。抗核小体抗体比抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体更早出现于系统性红斑狼疮的早期，在系统性红斑狼疮的诱导 和致病中有重要作用。临床资料显示，有15-19%的抗dsDNA抗体阴性的SLE患者中抗核小体抗体阳性。因此联合检测抗dsDNA 及抗核小体抗体可提高SLE血清学检出率。 抗组蛋白抗体： 抗一种或几种组蛋白抗体或抗H2A-H2B复合物抗体在药物（普鲁卡因胺、肼酞嗪以及其它药物）诱导的红斑狼疮中比较常见 （阳性率为95%）。另外，在30-70%的系统性红斑狼疮和15-50%的类风湿性关节炎患者中也可检出抗组蛋白抗体。 抗核糖体P蛋白抗体： 是系统性红斑狼疮的特异性标志，阳性率为5-15%。普遍认为ARPA的滴度与SLE的活动性相关，还与SLE合并中枢神经系统症状、 肾脏或肝脏受累相关。 抗M2抗体： 高滴度的抗线粒体2型抗体是原发性胆汁性肝硬化的标志，阳性率为85-95%，另外，在其它慢性肝脏疾病（30%）和进行性系统 性硬化症（7-25%）中也可检出抗M2抗体，但滴度较低。 抗Ro-52抗体： SS-A抗原是一种小核糖核蛋白，由一个RNA分子和两种不同的蛋白质（分子量分别为52和60kDa）组成，抗-SS-A 60 kDa蛋白 的抗体对于干燥综合症和系统性红斑狼疮的特异性更高，而单独抗SS-A 52 kDa的抗体不具有疾病的特异性，并且容易与其它抗 体发生交叉反应。
ANA检测及临床应用
抗核抗体的定义
传统定义：针对细胞核成分自身抗体的总称。 广义定义：针对细胞内所有抗原成分的自身抗体总称。对ANA的理解不再局限于核成分， 而是抗核酸和抗核蛋白抗体的总称。
ANA的把抗原分布：细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。
ENA：抗可提取核抗原，包括SSA,SSB,Scl-70,Jo-1,Sm,RNP/Sm六种靶抗原。
抗核抗体的检测方法
间接荧光免疫法
具有完整的抗原谱（细胞核和细胞浆） 检测ANA的金标准，具有很高的特异性跟敏感性 基质组合：HEp-2细胞+组织切片
免疫印迹法
先将混合性抗原做凝胶电泳，分离开不同的区带，然后把区带转印到硝酸纤维膜上，加入待检血清，最后用相应的酶标抗体使 相应的抗原带显色
酶联免疫法
间接免疫荧光法检测原理
抗核抗体荧光模型及分类
核均质： 核膜型： 斑点型： 细胞核 着丝点型 dsDNA、组蛋白和核小体 Gp210 核糖核蛋白：Sm、nRNP、SSA、SSB CENP-B
核仁型： ANA
Sel-70、RNA多聚酶等
胞浆颗粒型：
细胞浆 胞浆纤维型：
Байду номын сангаас
线粒体、Jo-1、核糖体等
波形蛋白
分裂期细胞型： 纺锤体、中间体、中心粒等
核均质型
间期细胞呈均匀荧光 分裂期细胞浓缩染色 体荧光增强 靶抗原：ds-DNA、 核小体、组蛋白
核膜型
Hep-2：间期细 胞呈现均匀的荧光 核周增强、分裂期 细胞浓缩染色体阴 性 肝片：干细胞呈 特征性环状荧光 靶抗原:gp210
斑点型
粗颗粒 细颗粒 间期细胞呈粗（细）颗 粒样荧光，核仁阴性， 分裂期细胞浓缩染色体 阴性，染色体周围呈颗 粒样荧光 靶抗原：nRNP、Sm
着丝点和核点型
着丝点 核点型 着丝点型间期细胞内出 现大小数目相同、均匀分 布的点状荧光、分裂期细 胞 浓缩染色体出现浓缩点 状荧光 靶抗原CENP-B 核点型间期细胞出现大 小数目、强度不均的点状 荧光、分裂期细胞浓缩染 色体阴性 靶抗原：Sp100
ANA检测结果判读
一般超过95%正常人群ANA水平的数值定义为ANA 阳性，对大多数实验室而言，通常认为IFANA滴度>1： 80为阳性。 2. ANA阳性可见于多种临床情况，除了自身免疫性风 湿病，还可见于各种原因引起的肝硬化、自身免疫 性肝病、肿瘤以及少数正常人尤其是老年人，但在 正常人种通常IFANA滴度较低。 3. ANA阳性的意义需结合临床资料综合分析，ANA阳 性并不能确立某种临床诊断，反之，ANA阴性也不 能排除自身免疫性病。
核仁型
间期细胞核仁阳性、 分裂期细胞浓缩染 色体阴性 靶抗原：Sel-70、 RNA多聚酶
线粒体型
Hep-2：细胞浆内 粗颗粒样荧光 肝细胞：呈颗粒样 荧光整个视野呈细 沙状荧光 靶抗原：线粒体
ds-DNA的检测
核 动基体 鞭毛体 以绿蝇短膜虫为基 质，其动基体有丰富 的 天 然 ds-DNA ， 一 般多以核和动基体同 时阳性出现，可在镜 下绿色荧光的大小点