葡萄糖氯化钠注射液无菌检查方法学验证

葡萄糖氯化钠注射液无菌检查方法学验证
【摘要】对葡萄糖氯化钠注射液的无菌检查方法进行验证试验，确认无菌检查所采用的方法适合于该药品的无菌检查。

【Abstract】The certification tesls ofglucose injecion asepsis check mean ,confirm that this mean adopted is fit for glucose and sodium chloride injecion asepsis check.
【Key words】Glucose and sodium chloride injecion Asepsis check Means certification
1 无菌检查法
取葡萄糖氯化钠注射液30瓶（规格100ml：葡萄糖5g与氯化钠0.9g），注入三罐体密闭式无菌试验过滤器，过滤，滤完，注入硫乙醇酸盐流体培养基200 ml﹙100 ml/罐﹚于两罐中，其中一罐作为阳性对照，加入1ml金黄色葡萄球菌10-100cfu/ml；改良马丁培养基100 ml﹙100 ml/罐﹚于另一罐中，按规定温度培养，每天观察并记录。

2 无菌检查方法学验证
2.1 仪器与试药
2.1.1 样品：葡萄糖氯化钠注射液规格：100ml：葡萄糖5g与氯化钠0.9g
2.1.2 验证用培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、玫瑰红钠培养基等（以上培养基均由中检所提供）。

2.1.3 验证用试验用菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌。

2.1.4 仪器：集菌仪、密闭式无菌试验过滤器。

2.1.5 试验温度：22℃试验湿度：51 ％
2.2 方法：《中国药典2010年版二部》无菌检查方法验证试验。

3 试验过程
3.1 菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌的新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养
物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30—35℃培养18-24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，23—28℃培养24-48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

3.2 菌液计数：以上各试验菌液在供试验的同时，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、大肠杆菌用营养琼脂，白色念珠菌、黑曲霉菌用改良马丁培养基注皿（1ml）或平板涂布（0.1ml），按规定条件培养后，计数结果见表1 。

3.3 取80瓶葡萄糖氯化钠注射液，以供7种试验菌和一份阴性对照组分别验证用。

3.4 方法学验证试验
﹙1﹚试验组：取60瓶葡萄糖氯化钠注射液注入密闭式无菌试验过滤器过滤，注入硫乙醇酸盐流体培养基500 ml﹙100 ml/罐﹚和改良马丁流体培养基200 ml﹙100 ml/罐﹚，然后在密闭式无菌试验过滤器中注入1ml﹙10-100cfu/ ml﹚试验菌，其中将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、大肠杆菌分别注入硫乙醇酸盐流体培养基的密闭式无菌试验过滤器中；黑曲霉菌液、白色念珠菌液分别注入已注入改良马丁培养基密闭式无菌试验过滤器中。

﹙2﹚阳性对照组：取密闭无菌试验过滤器，不过滤葡萄糖氯化钠注射液，分别注入硫乙醇酸盐流体培养基500 ml﹙100 ml/罐﹚和改良马丁流体培养基200 ml﹙100 ml/罐﹚，然后在密闭式无菌试验过滤器中注入1ml﹙10-100cfu/ ml﹚试验菌，其中金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、大肠杆菌分别注入硫乙醇酸盐流体培养基的密闭式无菌试验过滤器中；黑曲霉菌液、白色念珠菌液分别注入已注入改良马丁培养基密闭式无菌试验过滤器中。

作为阳性对照，按规定温度培养3-5天，观察试验菌的生长情况。

﹙3﹚阴性对照：取20瓶葡萄糖氯化钠注射液注入密闭式无菌试验过滤器，过滤，分别注入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100 ml﹙100 ml/罐﹚，按规定温度培养，每天观察并记录。

﹙4﹚培养基对照组：将硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100 ml﹙100 ml/罐﹚注入密闭式无菌试验过滤器中，按规定温度培养，每天观察并记录。

4 验证结论
根据试验结果，确定葡萄糖氯化钠注射液无菌检查法：检验数量按照药典附录表1规定，检验量全量过滤，采用薄膜过滤法过滤。

经过验证，各试验菌均生长良好，则供试品的检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，今后可按照此检查方法和检验条件进行葡萄糖氯化钠注射液的无菌检验。

参考文献
[1]《中国药典2010年版二部》
表1。