钩端螺旋体的分子分型方法
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Ｄ ＮＡ、 实验结 果 数 据 化 ， 同 实 验 室 间 具 有 可 比性 不 等 ， 示 出较好 的应用前 景 。 显 ＭＬ ＶＡ 技 术 的难 点 之一 在 于 ＶＮＴＲ位 点 的选
菌 的 分 型 ， 来 逐 渐 应 用 于 其 他 菌 。２ ０ 年 ， 后 ０６ Ａｈ ｄ等 Ｉ ｍｅ 】 首次 将 ＭＩ Ｔ技 术用 于 钩端 螺旋 体分 Ｓ 型 ， 们 选取 了 ４个 管 家基 因 （ ｄ 、ｃ Ａ、 ｐ ２ 他 ａ ｋ ｉｄ ＬｉＬ３ 、
ｌｃｒｐ ｏｅｉ，ＭＬ Ｅ） 进 而 来 的 一 种 细 菌 分 型 ｅｔｏ ｈ ｒｓ ｓ Ｅ 改 技术 。ＭＬ Ｅ是 根 据 多 种 代 谢 相 关 酶 的 电 泳 迁 移 Ｅ
在基 因组 的不 同位置 ， 多个 这样 不 同的位 点 联合 将
起来 进行 分析 可 大大提 高鉴 别 能力 ，该 方法 即为 多 位 点 可 变 数 量 串联 重 复 序 列 分 析 （ ｌ ｐｅｌｃ ｓ Ｍｕｔ ｌ ｏ ｕ ｉ
收试 验 （ ＡＡＴ） Ｃ 。该 方 法 需 要 保 存 大 量 的标 准 菌 株 ， 在操 作繁 琐 ， 存 费时 费力 等不 足之 处 。血 清 学分
型属 于 表 型 分 型 ， 能 反 映 菌 株 之 间 基 因 上 的 联 不 系 ］ 。基 因分类 是 通过 比较基 因 ＤＮＡ 片 段 核苷 酸 序列 同 源 性 对 钩 端 螺 旋 体 进 行 鉴 定 和 分 类 的 方
点是 种类 多 、 分布 广 、 高 度 的多 态 性 、 复 性 和个 有 重 体特 异性 。细菌 的基 因组 中存 在大 量 ＶＮＴ 分 布 Ｒ，
多 位 点序 列 分 型 （ ｌ ｌｃ ｓｓ ｑ ｅ ｃ ｙ ｉｇ Ｍｕｔｏ ｕ ｅ ｕ ｎ ｅｔｐｎ ， ｉ
ＭＬ Ｔ） 由多 位 点 酶 电泳 （ ｌ ｌｃ ｓｅ ｚ ｍｅ ｅ Ｓ 是 Ｍｕｔ ｏ ｕ ｎ ｙ — ｉ
择 。ＶＮＴ 位点 作为 基 因分 型 的标 记 物 ， 决 定该 Ｒ 是 方法 分 辨 力 高 低 的 关 键 因 素 。２ ０ ０ ５年 ， ｊｄ Ｍａｅ 等ｌ 基 于 问号 钩 端 螺 旋 体 赖 型 ５ ６ １株 的基 因组 ＿ １ ６０
序列 ， 取 了 ４ 选 ４个 ＶＮＴ 位 点 进 行 Ｐ Ｒ 分 析 ， Ｒ Ｃ 结 果有 七 个 位 点 （ ＶＮＴＲ 、 ４ ＶＮＴ 、 Ｒ７ ＶＮＴ 、 Ｎ— Ｒ９ Ｖ ＴＲ１ 、 ０ ＶＮＴＲ１ 、 １ ＶＮＴ ９ ＶＮＴＲ２ ） 实 可 用 来 Ｒ１ 、 ３证
同的序 列 型 （ ｅ ｕ ｎ ｅｔｐｎ ，Ｓ ， 过 比较 Ｓ Ｓ ｑ ｅ ｃ—ｙ ｉｇ Ｔ） 通 Ｔ 可 以发 现菌 株之 问 的相关 性 。 ＭＬ Ｔ最 初是 由 Ｍａｄ ｎ等 用 于脑 膜 炎奈 瑟 Ｓ ｉｅ
复 单 位 的 拷 贝 数 ， 后 对 多 组 数 据 进 行 聚 类 分 然 析 引。 ＭＬ ＶＡ 因 其 操 作 简 单 快 速 、 需 少 量 仅
体 目螺 旋体 科钩 端螺 旋体 属 ， 分为两 个种 ： 曲钩 端 双 螺 旋 体 （ ｅ ｔｓ ｉａｂｆ ｅ ａ） 问 号 钩 端 螺 旋 体 Ｌ ｐｏｐ ｒ ｉ ｌｘ 和 （ ｅ ｔｓ ｉ ｔｒｏ ａ ｓ ； 者 为腐 生性 钩 端 螺旋 Ｌ ｐｏｐ ｒ ｉ ｅｒｇ ｎ ） 前 ａｎ 体 ， 常对人 和 动物 不 致 病 ； 者 为 寄 生性 、 病性 通 后 致 钩 端螺 旋体 ， 引起 人 和 动 物 钩端 螺 旋 体 病 的 病原 是 体 。钩端 螺旋 体病 （ ｅ ｔｓ ｉ ｓ ， 称 钩体 病 ） 是 Ｌ ｐｏ ｐｒ ｉ 简 ｏｓ ， 由 问号 钩 端螺旋 体 引 起 的一 种 人 兽 共 患 疾病 ， 世 在 界 范 围广 泛 分 布 ， 其 流 行 于热 带 及 亚 热 带 地 区 。 尤 人 感染 钩体 病 主要 因为直 接或 间接 接触 了带 菌动 物 的尿液 、 污染 的 水 或 土壤 。人 患 钩体 病 的临 床 表 受 现轻 重不 一 ， 轻微 的 流感 样 症 状 到严 重 的 出现 黄 从 疸 、 出血 、 。 多器 官 衰 竭甚 至 死 亡 。 目前 ， 肺 肝 肾等 国 际上对 钩 端螺旋 体 的分 类 方法 主要 有 两 种 ： 清 学 血 分类 和基 因分类 。以血 清型 为基本 分类 单位 的血 清 学分类 ， 分类 基础 是 存 在 于 菌 体 外膜 上 的脂 多 糖 其 （Ｐ） Ｌ Ｓ 的抗原 决 定 基 。在 全 球 范 围 内 ， 体 至 少 包 钩 括２ ４个血 清群 ２ ０个血 清 型 ［ 。血 清学 分类 的操 ５ １
立 了应 用 内切酶 Ｎｏ Ｉ 生 的钩体 Ｐ ＧＥ图谱 数 据 ｔ产 Ｆ
库， 以便 对 钩体 菌 株 进 行 鉴定 和评 价 。Ｂ ａ ｃ ｌｎ ｏ等 对１ ４株 临 床分 离 钩体 菌株 进 行 ＭＡＴ 和 Ｐ ＧＥ分 Ｆ
析 ， 果 显 示 Ｐ ＧＥ 分 型 和 血 清 学 分 型 具 有 一 结 Ｆ
Ｄ ＮＡ片 段得 到很 好 的分离 效果 ， 各标 准菌 株均 具有
特征性 图 谱 。２ ０ ０ ８年 ， ｌ ｗａ Ｇａｌ ｙ等＿ 采 用 改 进 的 ｏ ７ ］
Ｐ ＧＥ法检测 ２ ６株钩 体 ， 果 ８ ． ３ （ ８ ／ ０ ） Ｆ ０ 结 ８ ８ １ ３ ２ ６
的菌株 产生 了特 征 性谱 型 ， 同一 血 清 型 的不 同 菌 株 显 示 出高度 相似 的 图谱 。通 过 这 次 研 究 ， 们 还 建 他
中 图分 类 号 ：３ ７５ Ｒ ７ ．
‘
文 献 标 识 码 ： Ａ
钩端 螺 旋体 （ ｅ ｔｓ ｉａ 简 称 钩 体 ） 属 于 螺旋 Ｌ ｐ ｏｐ ｒ ， ，
变换 方 向时 ， ＤＮＡ分 子在 新 的方 向泳动 前必 须重 新
定 向 。小 的 Ｄ ＮＡ 分 子 比大 的分 子 重 新 定 向 快 ， 在 凝胶 中移 动也 较快 。所 以通 过不 断地 交替 改变 电场 方 向 ， 同大小 的 Ｄ 不 ＮＡ 片 段 能够 被 分 离 ， 在凝 胶 上 按 片段长 度 的不 同而呈 现 出电泳 带型 。经染 色 脱色 后， 在成像 仪 上呈 现 酶切 后 的电 泳 图谱 ， 用 Ｂ ｏ — 再 ｉｎ
１ ２ ０ ０ ２ ６
十几 个 国 家参 与 的 一 个 比较 完 善 的 网络 。中 国于
２０ ０ ４年 建立 了 Ｐ ｌｅ ｔ ｈｎ ， ｕｓＮｅ Ｃ ｉａ 目前 正 在 建立 包 括
中国疾病 预 防控制 中心 传染 病所 中心 实验 室和 分布 于 各 省／ 的 网络 实 验 室 的 一 个 全 国性 疾 病 监 测 市
ＶＮＴＲ ａ ａｙ ｉ，ＭＬ ｎ ｌｓｓ ＶＡ ） ＭＩ 。 ＶＡ 的 原 理 是 利 用
率 的不 同来 反 映生 物 个 体 间 遗传 基 础 的差 异 ， 法 该
的不足 之处 在 于实验 结果 不 能在各 个 实验 室 间进行 比较 。 ＭＩ Ｔ 通 过 分 析 多 个 管 家 基 因 （ ｕ ｅ Ｓ Ｈｏ ｓ—
１ 期 １
常 慎重 。
２ 多 位 点 序 列 分 析
蒋 秀 高： 端 螺旋 体的 分子 分型 方 法 钩
１ ２ ０５
ｔｎ ｅ ｒｐ ａ ， ａ ｄ ｍ ｅ ｅ ｔ ＶＮＴ ） 染 色体 基 因组 上 有 一定 Ｒ 是
排列 规律 的 Ｄ ＮＡ 短 序 列 ， 称 小 卫 星序 列 。其 特 也
体 菌株 的 Ｐ ＧＥ 图谱 分 析 结 果 与 血 清 学 分 型 结 果 Ｆ
一
致 。１ ８株 临 床 分 离 中 ， １ 有 ３株 钩 体 的 Ｐ ＧＥ 图 Ｆ 于 ２０ ０ ０年采 用 Ｐ Ｇ Ｆ Ｅ法 检 测 了 我 国 １ ５群 １ ５型 钩
谱 分析结 果 符合血 清学 分 型结果 。我 国蒋 秀 高等 端 螺旋 体 标 准 菌 株 ， 果 从 ５ ～ １ ０ ０ ｋ 结 ０ ０ ｂ范 围 的
ｒｓ ） ｒ２ 和两 个候 选基 因 （ｅＹ ， ｉ Ｌ １ 设 计 引 物 ， ｓｃ Ｌ ｐ ４ ） 对 １ ０株 钩体 菌 株 （ 括 ４ 株 代 表不 同地 方来 源 的标 ２ 包 １ 准菌 株 ） 进行 基 因分 型 。结果 显示 ， 所选 取 的 ６ 基 个
因 中 ，ｄ ， ｃ Ａ 和 ｓｃ 高 度 可 变 ， ｉ Ｌ ２ ｒｓ ａ ｋ ｉｄ ｅＹ Ｌ ｐ ３ ，ｒ２和
网络 。
Ｐ ＧＥ较 其它 方法 具有 重复 性好 、 辨 率 高 、 Ｆ 分 结 果 稳定 、 验 室 间 结 果 易 于 比对 等 优 点 ； 是 ， Ｆ 实 但 Ｐ— ＧＥ也 存在 着费 时 费力 ， 验 费用 较 高 ， 要对 操作 实 需 人 员进行 专 门 的培训 等 不 足 。另 外 ， 应用 Ｐ Ｇ 分 Ｆ Ｅ 型结果 产生 的是 条带 ， 是序 列 ， 以在 解释 时要 非 不 所
Biblioteka Baidu
１９ ９ ６年美 国疾 病 预 防控 制 中心 建 立 了 以 Ｐ — Ｆ
ＧＥ技 术 为 基 础 的 实 验 室 分 子 分 型 网 络 体 系 ， 即
Ｐ ｌ Ｎｅ 。现 在 国 际 Ｐ ｌｅ ｔ已 经 形 成 由 全 球 二 ｕｓ ｔ ｅ ｕｓＮｅ
用 到钩体 分 子分 型上 。 １ 脉 冲场 凝胶 电泳 分型 脉 冲场 凝 胶 电泳 （ ｕｓｄｆ ｌ ｅ ｅｅｔｏ ｈ — Ｐ ｌ — ｅｄ ｇ ｌ ｌｃｒｐ ｏ ｅ ｉ ｒｓ ， Ｆ ） 原 理 将 细 菌包 埋 于 琼脂 块 中 ， 用 ｅｉ Ｐ ＧＥ 其 ｓ 选
致性 。
法 。 目前 国际上 已经公 布 的钩端 螺旋 体基 因 种有 ］ ２ ０个 ｌ 。基 因分 类 可 从 遗 传 学 和 分 子 生 物 学 水 平 ＿ ４ ］ 上 进一步 阐明不 同钩 体菌株 的 差别 。随 着近年 来分
子 生物 学技 术 的发展 ， 些 分 子分 型方 法 逐 渐 被应 一
适 当的 内切 酶切 割基 因组 ＤＮＡ， 获得 的 Ｄ ＮＡ 片 段 在 外加 脉 冲 电场 的琼 脂糖 凝胶 中进 行分 离 。当 电场
通 讯 作 者 ： 秀 高 ： ｍａ ：ｉ ｇ ｉｇｏ ｉ ｃｃ 蒋 Ｅ ｉ ｊ ｎ ｘｕ ａ＠ ｃ ．ｎ ｌ ａ ｄ 作 者 单 位 ：ｅ ｅ国 疾 病 预 防 控 制 中 心 传 染 病 预 防 控 制 所 ， 昌 平
与 ＶＮＴＲ位点 侧 翼 区互 补 的寡 核 苷 酸 引 物 相对 应
Ｄ ＮＡ 进行 Ｐ Ｒ扩 增 ， Ｃ 由扩 增 条 带 分 子量 来 推测 重
ｋ ｅ ｉｇｇ ｎ ） 内部 片 段 的 核 酸序 列 ， 而对 菌 株 ｅｐｎ ｅ ｅ 的 从 的等位 基 因进行 多 样性 的 比较 ， 同 的菌 株 对 应 不 不
中 国 人 兽 共 患 病 学 报
１ ２ ０ ４
Ｃｈｉ ｅ ｅ Ｊ ｕｒ １ ｏ ｏｎ ｅ ｎ ｓ ｏ ｎａ ｆ Ｚｏ ｏｓ ｓ
文 章 编 号 ：０ ２ ６ ４ ２ １ ） １ １２ —０ １０ —２ ９ （０ １ １ — ０ ４ ４
钩端螺旋体 的分子分 型方法
杨会棉 ， 秀高 蒋
做 问号钩 体血 清学 分 型 、 流行 病 学 和 系 统 发 生 学研
究 。 研 究 发 现 ， ． ｉ ｌｘ Ｌ ｂｆ ｅ ａ和 Ｌ． ｙ ｒ ７个 ＶＮＴＲ ｍｅ ｅｉ
作 主要应 用显 微 凝 集 试 验 （ ＭＡＴ） 和凝 集 素 交 叉 吸
ｕ ｒ ｓ软 件 分 析 ， 可 以 判 断 菌 株 之 间 的 图 谱 ｍｅｉ ｃ 就
异同。
１９ ９ ２年 Ｈｅｒ ｎ ｒｍａ ｎ等 ＿ 应 用 Ｐ Ｇ 对 致 病 性 ５ Ｆ Ｅ 钩 端螺旋 体 进行分 型 ， 结果 显示 ８ ． ９ （ ４ ７ ） ８ ８ ６ ／ ２ 钩
菌 的 分 型 ， 来 逐 渐 应 用 于 其 他 菌 。２ ０ 年 ， 后 ０６ Ａｈ ｄ等 Ｉ ｍｅ 】 首次 将 ＭＩ Ｔ技 术用 于 钩端 螺旋 体分 Ｓ 型 ， 们 选取 了 ４个 管 家基 因 （ ｄ 、ｃ Ａ、 ｐ ２ 他 ａ ｋ ｉｄ ＬｉＬ３ 、
ｌｃｒｐ ｏｅｉ，ＭＬ Ｅ） 进 而 来 的 一 种 细 菌 分 型 ｅｔｏ ｈ ｒｓ ｓ Ｅ 改 技术 。ＭＬ Ｅ是 根 据 多 种 代 谢 相 关 酶 的 电 泳 迁 移 Ｅ
在基 因组 的不 同位置 ， 多个 这样 不 同的位 点 联合 将
起来 进行 分析 可 大大提 高鉴 别 能力 ，该 方法 即为 多 位 点 可 变 数 量 串联 重 复 序 列 分 析 （ ｌ ｐｅｌｃ ｓ Ｍｕｔ ｌ ｏ ｕ ｉ
收试 验 （ ＡＡＴ） Ｃ 。该 方 法 需 要 保 存 大 量 的标 准 菌 株 ， 在操 作繁 琐 ， 存 费时 费力 等不 足之 处 。血 清 学分
型属 于 表 型 分 型 ， 能 反 映 菌 株 之 间 基 因 上 的 联 不 系 ］ 。基 因分类 是 通过 比较基 因 ＤＮＡ 片 段 核苷 酸 序列 同 源 性 对 钩 端 螺 旋 体 进 行 鉴 定 和 分 类 的 方
点是 种类 多 、 分布 广 、 高 度 的多 态 性 、 复 性 和个 有 重 体特 异性 。细菌 的基 因组 中存 在大 量 ＶＮＴ 分 布 Ｒ，
多 位 点序 列 分 型 （ ｌ ｌｃ ｓｓ ｑ ｅ ｃ ｙ ｉｇ Ｍｕｔｏ ｕ ｅ ｕ ｎ ｅｔｐｎ ， ｉ
ＭＬ Ｔ） 由多 位 点 酶 电泳 （ ｌ ｌｃ ｓｅ ｚ ｍｅ ｅ Ｓ 是 Ｍｕｔ ｏ ｕ ｎ ｙ — ｉ
择 。ＶＮＴ 位点 作为 基 因分 型 的标 记 物 ， 决 定该 Ｒ 是 方法 分 辨 力 高 低 的 关 键 因 素 。２ ０ ０ ５年 ， ｊｄ Ｍａｅ 等ｌ 基 于 问号 钩 端 螺 旋 体 赖 型 ５ ６ １株 的基 因组 ＿ １ ６０
序列 ， 取 了 ４ 选 ４个 ＶＮＴ 位 点 进 行 Ｐ Ｒ 分 析 ， Ｒ Ｃ 结 果有 七 个 位 点 （ ＶＮＴＲ 、 ４ ＶＮＴ 、 Ｒ７ ＶＮＴ 、 Ｎ— Ｒ９ Ｖ ＴＲ１ 、 ０ ＶＮＴＲ１ 、 １ ＶＮＴ ９ ＶＮＴＲ２ ） 实 可 用 来 Ｒ１ 、 ３证
同的序 列 型 （ ｅ ｕ ｎ ｅｔｐｎ ，Ｓ ， 过 比较 Ｓ Ｓ ｑ ｅ ｃ—ｙ ｉｇ Ｔ） 通 Ｔ 可 以发 现菌 株之 问 的相关 性 。 ＭＬ Ｔ最 初是 由 Ｍａｄ ｎ等 用 于脑 膜 炎奈 瑟 Ｓ ｉｅ
复 单 位 的 拷 贝 数 ， 后 对 多 组 数 据 进 行 聚 类 分 然 析 引。 ＭＬ ＶＡ 因 其 操 作 简 单 快 速 、 需 少 量 仅
体 目螺 旋体 科钩 端螺 旋体 属 ， 分为两 个种 ： 曲钩 端 双 螺 旋 体 （ ｅ ｔｓ ｉａｂｆ ｅ ａ） 问 号 钩 端 螺 旋 体 Ｌ ｐｏｐ ｒ ｉ ｌｘ 和 （ ｅ ｔｓ ｉ ｔｒｏ ａ ｓ ； 者 为腐 生性 钩 端 螺旋 Ｌ ｐｏｐ ｒ ｉ ｅｒｇ ｎ ） 前 ａｎ 体 ， 常对人 和 动物 不 致 病 ； 者 为 寄 生性 、 病性 通 后 致 钩 端螺 旋体 ， 引起 人 和 动 物 钩端 螺 旋 体 病 的 病原 是 体 。钩端 螺旋 体病 （ ｅ ｔｓ ｉ ｓ ， 称 钩体 病 ） 是 Ｌ ｐｏ ｐｒ ｉ 简 ｏｓ ， 由 问号 钩 端螺旋 体 引 起 的一 种 人 兽 共 患 疾病 ， 世 在 界 范 围广 泛 分 布 ， 其 流 行 于热 带 及 亚 热 带 地 区 。 尤 人 感染 钩体 病 主要 因为直 接或 间接 接触 了带 菌动 物 的尿液 、 污染 的 水 或 土壤 。人 患 钩体 病 的临 床 表 受 现轻 重不 一 ， 轻微 的 流感 样 症 状 到严 重 的 出现 黄 从 疸 、 出血 、 。 多器 官 衰 竭甚 至 死 亡 。 目前 ， 肺 肝 肾等 国 际上对 钩 端螺旋 体 的分 类 方法 主要 有 两 种 ： 清 学 血 分类 和基 因分类 。以血 清型 为基本 分类 单位 的血 清 学分类 ， 分类 基础 是 存 在 于 菌 体 外膜 上 的脂 多 糖 其 （Ｐ） Ｌ Ｓ 的抗原 决 定 基 。在 全 球 范 围 内 ， 体 至 少 包 钩 括２ ４个血 清群 ２ ０个血 清 型 ［ 。血 清学 分类 的操 ５ １
立 了应 用 内切酶 Ｎｏ Ｉ 生 的钩体 Ｐ ＧＥ图谱 数 据 ｔ产 Ｆ
库， 以便 对 钩体 菌 株 进 行 鉴定 和评 价 。Ｂ ａ ｃ ｌｎ ｏ等 对１ ４株 临 床分 离 钩体 菌株 进 行 ＭＡＴ 和 Ｐ ＧＥ分 Ｆ
析 ， 果 显 示 Ｐ ＧＥ 分 型 和 血 清 学 分 型 具 有 一 结 Ｆ
Ｄ ＮＡ片 段得 到很 好 的分离 效果 ， 各标 准菌 株均 具有
特征性 图 谱 。２ ０ ０ ８年 ， ｌ ｗａ Ｇａｌ ｙ等＿ 采 用 改 进 的 ｏ ７ ］
Ｐ ＧＥ法检测 ２ ６株钩 体 ， 果 ８ ． ３ （ ８ ／ ０ ） Ｆ ０ 结 ８ ８ １ ３ ２ ６
的菌株 产生 了特 征 性谱 型 ， 同一 血 清 型 的不 同 菌 株 显 示 出高度 相似 的 图谱 。通 过 这 次 研 究 ， 们 还 建 他
中 图分 类 号 ：３ ７５ Ｒ ７ ．
‘
文 献 标 识 码 ： Ａ
钩端 螺 旋体 （ ｅ ｔｓ ｉａ 简 称 钩 体 ） 属 于 螺旋 Ｌ ｐ ｏｐ ｒ ， ，
变换 方 向时 ， ＤＮＡ分 子在 新 的方 向泳动 前必 须重 新
定 向 。小 的 Ｄ ＮＡ 分 子 比大 的分 子 重 新 定 向 快 ， 在 凝胶 中移 动也 较快 。所 以通 过不 断地 交替 改变 电场 方 向 ， 同大小 的 Ｄ 不 ＮＡ 片 段 能够 被 分 离 ， 在凝 胶 上 按 片段长 度 的不 同而呈 现 出电泳 带型 。经染 色 脱色 后， 在成像 仪 上呈 现 酶切 后 的电 泳 图谱 ， 用 Ｂ ｏ — 再 ｉｎ
１ ２ ０ ０ ２ ６
十几 个 国 家参 与 的 一 个 比较 完 善 的 网络 。中 国于
２０ ０ ４年 建立 了 Ｐ ｌｅ ｔ ｈｎ ， ｕｓＮｅ Ｃ ｉａ 目前 正 在 建立 包 括
中国疾病 预 防控制 中心 传染 病所 中心 实验 室和 分布 于 各 省／ 的 网络 实 验 室 的 一 个 全 国性 疾 病 监 测 市
ＶＮＴＲ ａ ａｙ ｉ，ＭＬ ｎ ｌｓｓ ＶＡ ） ＭＩ 。 ＶＡ 的 原 理 是 利 用
率 的不 同来 反 映生 物 个 体 间 遗传 基 础 的差 异 ， 法 该
的不足 之处 在 于实验 结果 不 能在各 个 实验 室 间进行 比较 。 ＭＩ Ｔ 通 过 分 析 多 个 管 家 基 因 （ ｕ ｅ Ｓ Ｈｏ ｓ—
１ 期 １
常 慎重 。
２ 多 位 点 序 列 分 析
蒋 秀 高： 端 螺旋 体的 分子 分型 方 法 钩
１ ２ ０５
ｔｎ ｅ ｒｐ ａ ， ａ ｄ ｍ ｅ ｅ ｔ ＶＮＴ ） 染 色体 基 因组 上 有 一定 Ｒ 是
排列 规律 的 Ｄ ＮＡ 短 序 列 ， 称 小 卫 星序 列 。其 特 也
体 菌株 的 Ｐ ＧＥ 图谱 分 析 结 果 与 血 清 学 分 型 结 果 Ｆ
一
致 。１ ８株 临 床 分 离 中 ， １ 有 ３株 钩 体 的 Ｐ ＧＥ 图 Ｆ 于 ２０ ０ ０年采 用 Ｐ Ｇ Ｆ Ｅ法 检 测 了 我 国 １ ５群 １ ５型 钩
谱 分析结 果 符合血 清学 分 型结果 。我 国蒋 秀 高等 端 螺旋 体 标 准 菌 株 ， 果 从 ５ ～ １ ０ ０ ｋ 结 ０ ０ ｂ范 围 的
ｒｓ ） ｒ２ 和两 个候 选基 因 （ｅＹ ， ｉ Ｌ １ 设 计 引 物 ， ｓｃ Ｌ ｐ ４ ） 对 １ ０株 钩体 菌 株 （ 括 ４ 株 代 表不 同地 方来 源 的标 ２ 包 １ 准菌 株 ） 进行 基 因分 型 。结果 显示 ， 所选 取 的 ６ 基 个
因 中 ，ｄ ， ｃ Ａ 和 ｓｃ 高 度 可 变 ， ｉ Ｌ ２ ｒｓ ａ ｋ ｉｄ ｅＹ Ｌ ｐ ３ ，ｒ２和
网络 。
Ｐ ＧＥ较 其它 方法 具有 重复 性好 、 辨 率 高 、 Ｆ 分 结 果 稳定 、 验 室 间 结 果 易 于 比对 等 优 点 ； 是 ， Ｆ 实 但 Ｐ— ＧＥ也 存在 着费 时 费力 ， 验 费用 较 高 ， 要对 操作 实 需 人 员进行 专 门 的培训 等 不 足 。另 外 ， 应用 Ｐ Ｇ 分 Ｆ Ｅ 型结果 产生 的是 条带 ， 是序 列 ， 以在 解释 时要 非 不 所
Biblioteka Baidu
１９ ９ ６年美 国疾 病 预 防控 制 中心 建 立 了 以 Ｐ — Ｆ
ＧＥ技 术 为 基 础 的 实 验 室 分 子 分 型 网 络 体 系 ， 即
Ｐ ｌ Ｎｅ 。现 在 国 际 Ｐ ｌｅ ｔ已 经 形 成 由 全 球 二 ｕｓ ｔ ｅ ｕｓＮｅ
用 到钩体 分 子分 型上 。 １ 脉 冲场 凝胶 电泳 分型 脉 冲场 凝 胶 电泳 （ ｕｓｄｆ ｌ ｅ ｅｅｔｏ ｈ — Ｐ ｌ — ｅｄ ｇ ｌ ｌｃｒｐ ｏ ｅ ｉ ｒｓ ， Ｆ ） 原 理 将 细 菌包 埋 于 琼脂 块 中 ， 用 ｅｉ Ｐ ＧＥ 其 ｓ 选
致性 。
法 。 目前 国际上 已经公 布 的钩端 螺旋 体基 因 种有 ］ ２ ０个 ｌ 。基 因分 类 可 从 遗 传 学 和 分 子 生 物 学 水 平 ＿ ４ ］ 上 进一步 阐明不 同钩 体菌株 的 差别 。随 着近年 来分
子 生物 学技 术 的发展 ， 些 分 子分 型方 法 逐 渐 被应 一
适 当的 内切 酶切 割基 因组 ＤＮＡ， 获得 的 Ｄ ＮＡ 片 段 在 外加 脉 冲 电场 的琼 脂糖 凝胶 中进 行分 离 。当 电场
通 讯 作 者 ： 秀 高 ： ｍａ ：ｉ ｇ ｉｇｏ ｉ ｃｃ 蒋 Ｅ ｉ ｊ ｎ ｘｕ ａ＠ ｃ ．ｎ ｌ ａ ｄ 作 者 单 位 ：ｅ ｅ国 疾 病 预 防 控 制 中 心 传 染 病 预 防 控 制 所 ， 昌 平
与 ＶＮＴＲ位点 侧 翼 区互 补 的寡 核 苷 酸 引 物 相对 应
Ｄ ＮＡ 进行 Ｐ Ｒ扩 增 ， Ｃ 由扩 增 条 带 分 子量 来 推测 重
ｋ ｅ ｉｇｇ ｎ ） 内部 片 段 的 核 酸序 列 ， 而对 菌 株 ｅｐｎ ｅ ｅ 的 从 的等位 基 因进行 多 样性 的 比较 ， 同 的菌 株 对 应 不 不
中 国 人 兽 共 患 病 学 报
１ ２ ０ ４
Ｃｈｉ ｅ ｅ Ｊ ｕｒ １ ｏ ｏｎ ｅ ｎ ｓ ｏ ｎａ ｆ Ｚｏ ｏｓ ｓ
文 章 编 号 ：０ ２ ６ ４ ２ １ ） １ １２ —０ １０ —２ ９ （０ １ １ — ０ ４ ４
钩端螺旋体 的分子分 型方法
杨会棉 ， 秀高 蒋
做 问号钩 体血 清学 分 型 、 流行 病 学 和 系 统 发 生 学研
究 。 研 究 发 现 ， ． ｉ ｌｘ Ｌ ｂｆ ｅ ａ和 Ｌ． ｙ ｒ ７个 ＶＮＴＲ ｍｅ ｅｉ
作 主要应 用显 微 凝 集 试 验 （ ＭＡＴ） 和凝 集 素 交 叉 吸
ｕ ｒ ｓ软 件 分 析 ， 可 以 判 断 菌 株 之 间 的 图 谱 ｍｅｉ ｃ 就
异同。
１９ ９ ２年 Ｈｅｒ ｎ ｒｍａ ｎ等 ＿ 应 用 Ｐ Ｇ 对 致 病 性 ５ Ｆ Ｅ 钩 端螺旋 体 进行分 型 ， 结果 显示 ８ ． ９ （ ４ ７ ） ８ ８ ６ ／ ２ 钩