α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定方法

溶液配制

底物(pNPG)溶液：pH 值6.8 的0.1 mol/L 磷酸缓冲液配制成浓度为5 mmol/L (1.505mg/ml)

反应终止液：0.2 mol/L Na2CO3称取2.16g Na2CO3于烧杯中，加入适量蒸馏水溶解，并定容到100mL，4℃下保存，备用。

阳性对照药品阿卡波糖溶液:精密称取阿波卡糖样品，以磷酸缓冲液为溶剂溶解，配成10 mg/ml的浓度。

配制DNJ标准溶液（抑制剂）：精确称取0.0010g DNJ 标准品，用容量瓶准确定容到10mL，配制成1000μg/mL DNJ标准母液。将母液分别稀释成、1、5、10、20、40、60μg/mL六个不同梯度的标准品溶液，备用。

α-葡萄糖苷酶的酶溶液：用磷酸缓冲液配制成0.26 U/ml α-葡萄糖苷酶的酶溶液。OR 0.2 U/ml?

配制α-葡萄糖苷酶的酶溶液：将冻干酶粉（酶活力为14u/mg）用0.01mol/L磷酸缓冲液（pH为6.8）溶解，配制成2u/mL的母液。再将酶液分别稀释，配制成0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0u/mL的酶溶液，备用。

样品组

（药物种类*浓度组数*3）

样品空白组

（药物种类*浓度组数）

对照组

空白组

50 μl 磷酸缓冲液 +20 μl 药液 +20 μl PNPG

阳性对照组 60 μl 磷酸缓冲液 +20 μl 药液 +20 μl PNPG

50 μl 磷酸缓冲液 +20 μl 药液 +20 μl PNPG 70 μl 磷酸缓冲液 +20 μl PNPG

80 μl 磷酸缓冲液 +20 μl PNPG

振荡使充分混匀 37 ℃水浴10 min

+100 μl 酶溶液 振荡使充分混匀 37 ℃水浴20 min

+ 150 μl 0.2 mol/L Na 2CO 3

在酶标仪405nm 处 测定吸光度

+100 μl 酶溶液 +100 μl 酶溶液