药物分析03第三章 药物的杂质检查

例 2：
葡萄糖中重金属的检查：样4.0g溶于23ml水，加入 2ml缓冲盐，依法检查，其重金属不得超过 百万分之 五，取标准铅（ 10μg/ml），v=? C= 10μg/ml L= 5 10-6 S=4.0g
5 10 6
10 V 10 6 4.0
V = 2.0 ml
注意：供试品如有色，需经处理后方可检查。
如Al(OH)3的制酸力，反映主要质量；
明胶的凝冻度，控制物理性能； 利福平的结晶度，影响生物利用度 均一性 含量均一性 如“含量均匀度”试验
一、 概 述
药物纯度：药物的纯度是指药物的纯洁程度。

安全性
进行异常毒性、热原、降压物质和无菌等项目 纯度要求 对杂质限量进行检查 药物纯度的评价 把药物的性状、理化常数、杂质检查、含量测 定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。
酸度：水解试剂带入 乙醇中不溶物：水解中间体(糊精) SO32-：产品用H2SO3漂白 可溶性淀粉：水解不完全
2C6H12O6 葡萄糖
来自百度文库 2.贮藏过程中产生
外界条件影响：日光、空气、温度、湿度、 微生物等引起药物产生
O 例如： 麻醉乙醚
醛及有毒的 过氧化物
杂质的种类
(1)一般杂质： 在多种药物中普遍存在的杂质。 (Cl- SO42- Pb As Fe) 有害杂质 ( Pb As ) 信号杂质 （Cl- SO42-）：考察生产工艺，反映药物的 纯度水平 (2)特殊杂质： 个别药物的生产及贮藏中引入的杂质。
1、第一法 硫代乙酰胺法
适用对象：溶于水、稀酸和乙醇的药物
原 理： Pb2+ + 醋酸盐缓冲液 + 硫代乙酰胺(CH3CSNH2) PbS (黄~棕黑) 条件：
介质：醋酸盐缓冲液 (pH 3.5) 2ml 试剂：硫代乙酰胺 (CH3CSNH2) 2ml 杂质对照液： PbNO3 (10µg/ml) 灵敏度范围： 10~20 g / 27ml
3、杂质的限量检查（limit test）
杂质的限量：药物中所含杂质的最大允许量。
限量表示(g/g) ：百分之几（%） 百万分之几（10-6） 限量检查： 检查所含杂质是否超过杂质限量的规定，通常不要 求测定其准确含量。
杂质限量检查方法
取一定量 (C· 与被检杂质相同的纯品或对 V) 照品配成对照品溶液，与一定量(S)药物供试溶液
W
134 ΔG1 T1 226
草酸钙(CaC2O4· 2O)的热重曲线 H
398 T2 635 ΔG3 478 T3 838
ΔG2
0
200
400
600 T(℃)
800
1000
在温度T1时 在温度T2时 在温度T3时
CaC2O4· 2O H CaC2O4+H2O CaC2O4 CaCO3+CO CaCO3 CaO+CO2

恒温干燥


干燥剂干燥
减压干燥
热分析法 thermal analysis,TA
热重分析法
thermal gravimetric analysis,TGA :
在程序控制温度下,测量物质的质量与温度关系的方法
差示热分析法
differential thermal analysis,DTA: 在程序控制温度下,测定供试品与参比物质之间 的温差(ΔT)随温度变化的函数关系
△T
1 2
1、纯双氯青霉素转变成液态并降解 2、加入乳糖
3
4 5
3、加入硬脂酸镁
4、加入硬脂酸，主成分峰消失
5、单加入硬脂酸，主峰亦消失
0
100
200
℃
甲磺酸二氢麦角毒碱的DSC-TGA曲线
TGA
DSC
50
100
150
200
℃
不同纯度苯甲酸的DSC曲线
标准品
98.6% 97.2% 温度
15.00
第三章 药物的杂质检查
Test for purity
基本要求
一、掌握一般杂质检查的原理、方法和计 算。 二、熟悉特殊杂质检查的方法和原理。 三、了解热分析在药物分析中的应用。
返 回
第三章 药物的杂质检查 Test for purity
概 述 一般杂质检查 特殊杂质检查
一、 概
述
有效性 针对某些药效进行检查的项目
式中： L 杂质的限度（%） C 对照液浓度 （g/ml） V 对照液的加入体积（ml) S 供试品的量(g) 注意: 单位统一
例 1 ：
对乙酰氨基酚中氯化物的检查： 样 2.0g 溶于100ml水中，取25ml检查Cl-，与标 准NaCl溶液(10μg/ml) 5ml对照液相比，不得更深。 C= 10μg/ml V=5.0ml S= 25 2.0 100=0.5g 10 5.0 10 6 L 100% 0.01% 0.5
第二节 一般杂质检查方法
一 、氯化物（Chloride ）检查 原理：
药物：Cl AgNO3 HNO3 AgCl白色浑浊 对照：NaCl（c, V） AgNO3 HNO3 AgCl白色浑浊
条件：硝酸酸性条件（稀硝酸10ml） 反应试剂：硝酸银试液 1.0ml 杂质对照：NaCl (10µg/ml) 灵敏度范围： 50~80 g / 50ml 讨论：选择稀硝酸反应条件的意义。
0.002%供试品 20µ g/ml
高效液相色谱法 HPLC
分类
正相色谱 反相色谱
柱填充剂
硅胶 极性化学键合硅胶 十八烷基硅烷键合硅胶
流动相
极性小的有机溶剂 正己烷,氯仿,二氧六环等 甲醇/水 乙腈/水 四氢呋喃/水 RP流动相中加离子对试 剂 电解质水溶液 有机溶剂 水溶液
六、有机溶剂残留量测定
色谱系统与系统适用性试验 System Suitability Tests; SSTs 以直径为0.25~0.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多 孔小球作为固定相，柱温为80~170℃；并符合下列条件：
⑴用待测物的色谱峰计算的N应大于1000；
⑵内标物与待测物的两个色谱峰的R≥1.5； ⑶每个标准溶液进样5次，所得待测物与内标物峰面积之 比的RSD≤5%； 若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD≤10%
规定： 如显杂质斑点，不
得多于2个，其颜
色与对照品主斑点 相比较，不得更深。
地塞米松磷酸钠 20mg/ml
地塞米松 0.20mg/ml
氨苯砜中检查“有关 物质”规定：
如有1~2个杂质点超过 时，应不得深于0.01% 对照液的主斑点。
其中有1个杂质点应不 深于0.002%供试品的 主斑点。
0.01%供试品 1%供试品 100µ g/ml 10mg/ml
Zn+HCl
3
砷斑
HgBr2
黄棕
吡啶 Ag
Ag- DDC
红色胶态
白田道夫法
As As
SnCl2 HCl
3
有孔玻璃旋塞
溴化汞试纸
导气管
醋酸铅棉花
检 查 砷 盐 仪 器 装 置
AsH3发生瓶
18cm
8cm
二乙基二硫代氨基甲酸银法
Ag-diethyldithiocarbamate
λmax310nm
220
260
300
nm
薄层色谱原理图
最常用的薄层色谱也属于液固吸附色谱。同柱色谱不同的是 吸附剂被涂布在玻璃板上，形成 薄薄的平面涂层。干燥后在涂层 的一端点样，竖直放入一个盛有 少量展开剂的的有盖容器中。展 开剂接触到吸附剂涂层，借毛细 作用向上移动。与柱色谱过程相 同，经过在吸附剂和展开剂之间 的多次吸附-溶解作用，将混合 物中各组分分离成孤立的样点， 实现混合物的分离。
黄体酮及其中间体的比旋度（溶剂：乙醇）
化合物 黄体酮 醋酸双烯醇酮 浓度% 1～1.4 0.9 温度℃ 20～25 20 常温 [а]D +193°±4° -31°±2° +20°±2°
醋酸妊娠烯醇酮 ～1
肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线
HO HO O C CH2NHCH3
HO HO
OH CH CH2NHCH3
注
意：
1. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。 2. 平行操作原则。 3. 若供试品有色，需经处理后方可检查。
）干扰及排除
供试品有色处理方法
（1）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，
可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。
（2）内消色法：倍量法
二 、重金属（Heavy Metals ）的检查
在相同条件下处理后，比较反应结果，以确定杂
质含量是否超过规定。
NaCl对照液
葡萄糖
稀硝酸10ml 硝酸银1ml
稀硝酸10ml 硝酸银1ml
要求：对照液浊度 > 供试液浊度
杂质限量的计算：
杂质最大允许量 杂质限量 = 供试品量
杂质对照液浓度 其体积 供试品量
C V L 100% S
1. 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他 无干扰的有色溶液。 2. 内消色法。 3. 改用第四法，微孔滤膜过滤法。
第二法：灼烧后的硫代乙酰胺法
适用于含芳环或杂环有机药物，如苯佐卡因、甲硝唑
第三法: 硫化钠法 适用于溶于碱的药物或在稀酸产生沉淀的药物，如磺胺类、 巴比妥类 第四法：微孔滤膜法 适用于重金属限量低（2~5µg）的药物。
差示热分析仪主要结构简图
△T 加热炉 载气？ 至信号 放大器
⑵ ⑴ ⑶
T(℃) 热差曲线示意图
⑴热差曲线的直线 ⑵放热峰 ⑶吸热峰
· 样品
· 参比
·
加热器 炉温 导线 控制器
盐酸多巴酚丁胺的DTA-TGA曲线
233℃ 100
90 80
70
196℃ 60
DTA扫描图 15℃/min Program
第三节 特殊杂质检查
物理性质上差异：
嗅味及挥发性的差异
颜色的差异
溶解行为的差异
旋光性质的差异
吸附或分配性质的差异
对光选择吸收性质的差异
化学性质上差异：
酸、碱性质的差异 氧化还原性的差异 杂质与一定试剂产生沉淀 杂质与一定试剂产生颜色反应 杂质与一定试剂反应产生气体
旋光性质的差异
Ch.P规定黄体酮在乙醇中的比旋度为：＋186°～198°
吸附或分配性质的差异 薄层色谱法 TLC
原点至斑点中心的距离 Rf 原点至溶剂前沿的距离 比移值
常 用 方 法：

杂质对照品法 供试品自身对照法 对照药物法
枸橼酸乙胺嗪 I2蒸气显色
CON N N CH3 C 2H 5 C 2H 5
供试品10µl N-甲基哌嗪10µl 50mg/ml 50µg/ml

药物纯度
从用药安全、有效和药物稳定性的影响考虑。
比如：BaSO4 （可溶性钡盐检项）
二、杂质来源与种类
source and sorts of impurities
1. 制备过程中产生
(C6H10O5)x + H2O 淀粉 H+ (C6H10O5)y 糊精 H2O, H+ C12H22O11 麦芽糖
Ag-DDC法
C2H5 N C2H5 C S S Ag
原理：是利用砷化氢与Ag-DDC吡啶溶液作用，使AgDDC中的 银还原为红色胶态银，以Ag-DDC溶液为空白， 于510nm的波长处，测定吸收度，供试品溶液的吸收度不 得大于标准砷溶液的吸收度。
四、干燥失重 （ loss on drying）
干燥失重物主要指水分 (结晶水或吸附水) 或挥发性物质
微孔滤膜过滤法检查重金属装置
C 垫圈(外径10mm,内径6mm) D 滤膜(直径10mm,孔径3.0µm) E 辅助滤板
滤器上盖 A
C D E
B 连接头
F 滤器下部
三、砷盐检查法
国内外常用方法：
第一法 古蔡氏法 Gutzeit
第二法 Ag-DDC法
白田道夫法 Bettendorff
古蔡氏法：
As 3As O 3 H 2 AsH3 3AsO4
7.50
0.00
mcal/sec
盐酸舍曲林晶型Ⅰ的DSC曲线
50
80
110
140
170
200
230
260 290
温度(℃)
5.00
mcal/sec
盐酸舍曲林晶型Ⅲ的DSC曲线
2.50
0.00 50
80
110
140
170
200
230
260
290
温度(℃)
有机溶剂残留量测定法
有机溶剂 苯 氯仿 二氧六环 二氯甲烷 吡啶 甲苯 环氧乙烷 限度,% 0.01 0.005 0.01 0.01 0.01 0.01 0.001 Ch.P(95) 限度,% 0.0002 0.006 0.038 0.06 0.02 0.089 0.001 Ch.P(2000)


例：纯度要求
Pethidine Hydrochloride 盐酸哌替啶
CH3 N O O CH3 HCl
CH3 N
C2H5
N
OCH3 HCl
O
O O
CH3 HCl
无效异构体I
无效异构体 II
化学试剂纯度与药物纯度区别

化学试剂纯度
不考虑生理作用，杂质限量只是从可能引起化学 变化对使用影响来限定。