GUS染色液

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gus染色原理

gus染色原理Gus染色原理Gus染色原理是一种常用的分子生物学实验技术，用于检测和观察基因的表达情况。

它基于酶反应原理，通过染色剂Gus的添加和酶反应的发生，使得目标基因在组织或细胞中显示出特定颜色，从而可以直观地观察基因的表达水平和组织分布情况。

Gus染色原理的基本步骤如下：1. 样品处理：首先需要获取待检测的组织样品或细胞，可以是植物组织、动物组织或细菌等。

样品需要经过一系列处理步骤，如固定、脱水、透明化等，以保证染色的准确性和可靠性。

2. Gus染色液制备：Gus染色液通常由染色底物、缓冲液和酶反应辅助物质组成。

常用的染色底物有X-β-Glucuronide，它是一种无色底物，在酶反应中会被酶催化分解为产生特定颜色的产物。

缓冲液的选择要根据实验的需要，可以是酸性缓冲液或碱性缓冲液。

3. Gus染色反应：将处理好的样品与Gus染色液进行充分混合，使得染色底物与目标基因的酶发生反应。

在反应过程中，底物被酶催化分解，产生特定颜色的产物。

染色的时间和温度需要根据实验要求进行控制，以保证染色效果的准确性和可靠性。

4. 观察结果：染色反应完成后，观察样品的颜色变化。

正常情况下，目标基因的表达区域会显示出特定颜色，可以是蓝色、紫色等，而未表达的区域则没有颜色变化。

观察结果可以使用显微镜或肉眼进行观察和记录。

Gus染色原理的优点在于其操作简单、成本低廉，可以在大量样品中快速进行检测。

同时，由于染色结果直观明了，可以用肉眼观察和记录，无需复杂的仪器设备。

因此，Gus染色在基因表达研究、遗传工程和植物学等领域得到广泛应用。

然而，Gus染色原理也存在一些限制和注意事项。

首先，染色结果的可视化程度受样品的固定和处理等步骤的影响，不同的样品处理方法可能导致染色结果的差异。

其次，染色结果只能显示目标基因的表达水平和组织分布情况，无法提供更详细的信息，如基因的调控机制和表达动力学等。

此外，由于染色底物的选择和反应条件的不同，染色结果可能存在一定的差异性，需要在实验设计和数据分析中进行合理控制。

GUS染色液

南京森贝伽生物科技有限公司网址：/第1页仅供科研版本号：181126GUS 染色液【产品组成】【保存条件】-20℃,避光;4℃,避光,12个月【产品概述】GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli 等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸酶的一种水解酶，该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。

GUS 受体基因系统有表达E.coliGUS 酶的稳定性和在植物内的低活性，绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。

5-Bromo-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide ，cyclohexylammonium salt(简称为X-Gluc 或X-GlcA)分子量为521.8，CAS 号为18656-96-7，是检测大肠杆菌中GUS 基因的底物，可快速检测植物中GUS 基因融合标记。

β-葡萄糖苷酶基因染色试剂盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)简称为GUS 染色液，其染色原理是适宜的反应条件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可将X-Gluc 水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有GUS 活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到，GUS 染色液可用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色，多用于转基因植物的GUS 基因表达分析。

该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

【使用方法】1、配制X-GlcA Solution ：取X-GlcA Solvent 229μl 加入至80mg X-GlcA 中或取适量上述2种物质溶解，使其浓度达到350mg/ml ，轻轻Vortex 混匀，即为Solution ，分装后，-20℃避光保存。

2、按下列比例配制GUS 染色液：3、固定(①取转基因植物组织，入3～5ml清洁小瓶或多孔板中。

GUS染色液配制

GUS染色液配制2篇【文章一】GUS染色液配制原理及方法GUS染色液是一种用于检测植物细胞中β-葡萄糖苷酸酯酶（GUS）活性的染色液。

本篇将介绍GUS染色液配制的原理及方法。

一、原理GUS染色液配制的原理是基于GUS酶催化水合酶活性，使含有1-甲基-β-吡喃糖苷（X-Gluc）的染色底物在酶的作用下发生蓝色沉淀反应。

该底物被GUS酶水解后可产生自由的5,5’-二溴-4,4’-二氯-3’-靛酚（X）和5-溴-4-氯-3-（2,6-二甲基-4-氧代酰基苯氨基）苯甲醇（Gal）。

这两种产物在碱性条件下进行聚合反应，生成可见的蓝色沉淀。

二、方法1. 准备所需材料：pH 5.0缓冲液、10% Triton X-100、X-Gluc染色底物（20mg/ml），甲醇，硫酸铵，硼酸，氢氧化钠，孵育液。

2. 配制pH 5.0的缓冲液：取适量的硼酸和氢氧化钠，配制一定浓度的缓冲液，并将溶液调至pH值为5.0。

3. 配制10%的Triton X-100：取适量的Triton X-100，加入适量蒸馏水溶解，使其浓度为10%。

4. 配制X-Gluc染色底物溶液：取适量X-Gluc，加入适量甲醇溶解，制成浓度为20mg/ml的X-Gluc溶液。

5. 配制孵育液：将硫酸铵和甲醇按一定比例混合，制成适量的孵育液。

配制步骤：1. 取适量的pH 5.0缓冲液，加入10% Triton X-100，并充分混合。

2. 加入适量的X-Gluc染色底物溶液，再次充分混合。

3. 加入适量的甲醇和孵育液，并充分混合。

4. 将配制好的GUS染色液过滤，以去除杂质颗粒，得到高纯度的染色液。

5. 将GUS染色液储存于4℃的冰箱中，避光保存。

三、注意事项1. 在配制GUS染色液时，应注意避免阳光直射和长时间的暴露。

2. 染色底物X-Gluc是一种易燃物质，使用时应注意安全操作。

3. 配制过程中的工具和容器应干净无杂质，以防止污染。

4. 孵育液的制备要按照所需配比进行，过量或不足都会影响染色效果。

GUS染液配方

GUS染液配方
100mM sodium phosphate buffer (pH7.0) 磷酸钠缓冲液
0.1% Triton X-100
0.1% N-laurylsarcosine（十二烷基肌氨酸纳）
10 mM Na2EDTA
1 mM K3Fe(CN)6铁氰化钾
1 mMK4Fe(CN)6亚铁氰化钾
0.5 mg/mL X-Gluc
100mM sodium phosphate buffer (pH7.0) 磷酸钠缓冲液的配制方法：
计算方法：
pH7.0时，Na2HPO4.12H2O占61%，NaH2PO4.2H2O占39%
配制100ml时，所需Na2HPO4.12H2O的量为：100*10-3*0.1*358.14*0.61=2.18 g 所需NaH2PO4.2H2O的量为：100*10-3*0.1*156.01*0.39=0.61 g
GUS染液配制方法（500ml）：
1. 分别称取10.92 g Na2HPO4.12H2O和3.04 g NaH2PO4.2H2O溶于400ml蒸馏水中；
2. 依次将0.5g十二烷基肌氨酸纳、1.86 g Na2EDTA、0.16 g铁氰化钾、0.21 g亚铁氰化钾和500ul Triton X-100加入磷酸缓冲液中，完全溶解后，定容至500 ml;
3. 根据实验需要取一定量的上述溶液，如100ml，称取0.05 g X-Gluc溶于溶液中，遮光保存。

若准备长时间之后用，将其分装后保存与-20度。

各种试剂分子量：Na2EDTA
K3Fe(CN)6
K4Fe(CN)6。

GUS染色方法

GUS染色一.试剂配置：PBS：100mM磷酸盐缓冲液A液：3.582g Na2HPO4·12H2O溶解于无菌蒸馏水，定容至10ml；B液：1.56g NaH2PO4·2H2O溶解于无菌蒸馏水，定容至10ml；取5.77ml A试剂、4.23ml B试剂混合，无菌蒸馏水定容至100ml；50mL staining buffer：取40ml PBS，依次加入试剂：EDTA（终浓度10mM），六氰合铁(II)酸钾（终浓度0.5mM），六氰合铁(III)酸钾（终浓度0.5mM）（加入铁盐的目的：防止无色反应中间产物渗漏）用PBS定容至50ml，加入1% Trrton-X 100，避光保存；GUS染液：用EP管称取适量X-gluc粉末，加入少量DMSO或N,N-二甲基甲酰胺助溶（一般溶解10mg 粉末约10~20ul二甲基甲酰胺），然后用staining buffer配成终浓度为1 mg/ml的GUS染液，避光保存；固定液：无水乙醇：冰醋酸=9：1透明液：30 ml H2O80 g 水合氯醛10 ml 甘油搅拌约1小时，使之充分溶解二．GUS染色步骤1．取材（避免夹伤）；2．PBS漂洗3次；3．加入染色液，37℃避光反应（Col-0 3天黄化苗经染色约2小时，在根的上半部就会有明显蓝色出现）；4．回收染液；5．PBS漂洗3次；6．固定液室温固定2~4小时，或者过夜；7．95%乙醇（目的是使用接近固定液浓度的乙醇）漂洗数次至脱掉色素（室温或者37℃均可）；8．70%乙醇漂洗（目的是让材料在接近生理浓度时恢复形状）；9．透明液室温透明15’，或者过夜（推荐1~24h）；10．临时压片观察，照相。

注明：阴影字为快捷操作步骤，另外绿苗在此操作基础上需要进行脱色／透明操作，快捷步骤为100%乙醇、37℃漂洗数次至脱掉绿色。

三. GUS染色步骤：1.取材：将叶片、花瓣、根茎等组织剪成小片，放于1.5ml离心管中。

GUS染色液使用说明

GUS染色液使用说明货号：G3061有效期：6个月产品内容:名称规格贮存X-gluc粉末20℃X-gluc溶解液1ml RTGUS染色缓冲液50ml4℃产品说明:Gus(β-glucuronidase，β-D-葡萄糖苷酸酶)基因是目前常用的一种报告基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（x-gluc）分解为蓝色的物质，其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。

因为绝大多数植物细胞内不存在内源的GUS活性，因此gus 基因广泛用作转基因植物的报告基因，尤其是在研究外源基因瞬时表达的转化实验中广泛应用。

GUS染色试剂盒包含GUS染色的全部试剂，使用方便，只需将配制好的X-gluc溶液和缓冲液按照比例混合即配成GUS染色液。

该试剂盒可以配制50ml GUS染色液。

操作步骤：一、X-gluc溶液(50×)配制：吸取1ml X-gluc溶解液加入到X-gluc管中，彻底混匀，至粉末完全溶解，即配成X-gluc 溶液(50×)，该溶液-20℃避光保存。

注：正常的X-gluc溶液颜色为无色，如果溶液变为红色或棕色，表明溶液失效。

二、GUS染色工作液配制：GUS染色工作液配制量1ml5ml10mlX-gluc溶液(50×)20μl100μl200μlGUS染色缓冲液1ml5ml10ml注：GUS染色工作液最好现用现配，短期贮存可以-20℃保存2-3天。

三、GUS染色步骤：1.预处理：将叶片、花瓣、根茎等组织剪成小片，放于1.5ml离心管中，加入预冷的90%丙酮完全覆盖材料，常温处理20-30分钟。

此步骤可以预固定组织并且可以去除部分叶绿素。

注：用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。

例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。

gus染色原理

gus染色原理Gus染色原理。

Gus染色是一种常用的细胞染色技术，用于检测β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase）的活性。

β-葡萄糖苷酶是一种水解酶，能够水解含有葡萄糖醛酸酯的底物，产生游离的葡萄糖醛酸。

Gus染色的原理是利用β-葡萄糖苷酶水解底物后产生的蓝色产物，对细胞或组织进行染色，从而观察β-葡萄糖苷酶的活性和分布情况。

在进行Gus染色之前，首先需要准备Gus染色液和底物。

Gus染色液通常由染色缓冲液、染色底物和其它辅助试剂组成。

染色底物是一种含有葡萄糖醛酸酯的化合物，一般为5-溴-4-氯-3-吲哚基葡萄糖醛酸（X-gluc）。

X-gluc在β-葡萄糖苷酶的作用下会产生蓝色的沉淀物，用于显示β-葡萄糖苷酶的活性。

辅助试剂通常包括有机溶剂、金属离子螯合剂等，用于增强染色效果和稳定染色产物。

在实际操作中，将待检测的细胞或组织样品加入Gus染色液中进行染色处理。

在适当的温度和时间条件下，X-gluc会被β-葡萄糖苷酶水解，产生蓝色的沉淀物。

通过显微镜观察染色结果，可以直观地了解β-葡萄糖苷酶在样品中的活性和分布情况。

活性高的细胞或组织会呈现出深色的染色，而活性低的则呈现较浅的染色或无染色。

Gus染色技术在植物学、动物学和微生物学等领域得到了广泛的应用。

在植物学中，可以利用Gus染色观察植物各部位中β-葡萄糖苷酶的表达情况，从而研究植物的生长发育过程和应激响应机制。

在动物学中，Gus染色也可用于研究动物胚胎发育过程中的基因表达和细胞分化情况。

在微生物学中，Gus染色可以用于检测细菌和真菌中β-葡萄糖苷酶的活性，从而研究微生物的代谢特性和环境适应能力。

总之，Gus染色技术是一种简单、直观的细胞染色方法，能够有效地检测β-葡萄糖苷酶的活性和分布情况。

通过对样品进行Gus染色，可以为细胞生物学和生物化学研究提供重要的实验数据，促进对生物学问题的深入理解和探讨。

随着生物技术的不断发展，相信Gus染色技术在生命科学领域中会有更广泛的应用和深入的研究。

GUS染色步骤

10 mM
0.2 ml
X-Gluc
/
2 mM
10.4mg
ddH2O
/
/
定容至10ml
* 0.5M Na2HPO4配制方法：将17.907g Na2HPO4溶于水，定容至100ml。0.5M NaH2PO4的配制方法：将7.800g NaH2PO4溶于水，定容至100ml。
1.2 染色步骤
（1）将材料在90%丙酮中(冰浴)轻微固定15-20min；
（2）在缓冲液中(染色液去掉X-Gluc)漂洗3次，共计l0min；
（3）将需要染色的拟南芥植株或组织放在1.5 mL离心管中，加入染色液浸过材料抽气5-l0min，37℃过夜，染色12-16h；
（4）用50%，60%，70%，80%，90%乙醇依次脱水30min后，在100%乙醇中放置1h；观察、照相(BX50 OLYPUS，显微镜)。
0.1%
0.1 ml
铁氰化钾K3Fe(CN)6
100mM
将3.2924g铁氰化钾溶于水，定容至100ml。
2 mM
0.2 ml
亚铁氰化钾
K4[Fe(CN)6]·3 H2O
100mM
将4.2239g亚铁氰化钾溶于水，定容至100ml。
2 mM
0.2 ml
EDTA
0.5M
将18.61gNa2EDTA·2H20溶于水，调pH为8.0，定容至100ห้องสมุดไป่ตู้l水。
1.1 GUS染色底物的配制
按下表1配制GUS染色的底物。
表1. GUS染色底物的配制
试剂名称
母液浓度
母液配制方法
工作液浓度
工作液配制方法
磷酸缓冲液（pH 7.2）
0.5M

gus染色原理

gus染色原理Gus染色原理及应用引言：Gus染色原理是一种常用的实验方法，主要用于检测和定位β-葡萄糖苷酶的活性。

本文将介绍Gus染色原理的基本概念、实验步骤以及其在生物学研究中的应用。

一、Gus染色原理的基本概念Gus染色原理，即β-葡萄糖苷酶染色原理，是通过Gus染色剂对β-葡萄糖苷酶进行染色，从而观察其活性和分布情况。

Gus染色剂是一种人工合成的染料，它能与β-葡萄糖苷酶发生化学反应，形成蓝色沉淀物。

这种染色剂在染色过程中是无色的，但在与酶反应后会产生明显的颜色变化。

二、Gus染色的实验步骤1. 制备Gus染色剂：将Gus染色剂溶解于适当的缓冲液中，制备成一定浓度的染色溶液。

2. 取样：选择待检测的生物组织或细胞，进行取样。

3. 固定：将取样的生物组织或细胞进行固定处理，以保持其形态结构的完整性。

4. 染色：将固定的生物组织或细胞浸泡于Gus染色溶液中，进行染色反应。

5. 观察：观察染色结果，通过显微镜对染色的生物组织或细胞进行观察和记录。

三、Gus染色在生物学研究中的应用1. 植物生物学研究：Gus染色可以用于检测植物中β-葡萄糖苷酶的活性和分布情况，帮助研究植物生长和发育过程中的基因调控机制。

2. 动物生物学研究：Gus染色可用于检测动物组织和细胞中β-葡萄糖苷酶的表达情况，有助于研究动物发育、疾病发生和治疗等方面的问题。

3. 微生物学研究：Gus染色可以用于检测细菌和真菌中β-葡萄糖苷酶的活性和分布情况，对于研究微生物代谢途径和菌种鉴定等具有重要意义。

4. 分子生物学研究：Gus染色可以与基因表达报告载体结合，用于检测基因的活性和表达水平，为分子生物学研究提供了一个简便、直观的方法。

结论：Gus染色原理是一种常用的实验方法，通过对β-葡萄糖苷酶的染色反应，可以检测和定位其活性和分布情况。

该方法在植物学、动物学、微生物学和分子生物学等领域具有广泛的应用。

通过对Gus染色原理的了解和掌握，我们可以更好地开展生物学研究，揭示生物体内重要酶的功能和调控机制，为相关领域的研究提供有力的支持。

GUS染色及相关溶液配制

GUS染色（1）测量称重的同时另取20株幼苗经行GUS染色，注意选取长势近似的植株。

（2）用吸水纸吸干表面水分后切除苗，保持根部完整，装入量程适当的离心管中，贴好标签标记处理。

（3）用移液枪加入适量GUS缓冲液，加入缓冲液后用锡箔纸包裹离心管，盖好离心管后晃动几下，再加入GUS底物，保证1ml染液中GUS缓冲液950ul，GUS 底物50ul的比例，染液总量可浸没所有种子和根为宜。

（4）将用锡箔纸包裹好的离心管捆扎好，放于37℃ 200rad的摇床上过夜，可至24 h。

GUS染液的配方50 ml 100 ml 500 ml1 M NaH2PO47.8 g 15.6 g 78.005 g1 M Na2HPO417.91 g 35.81 g 179.08 g0.5 M9.31 g 18.61 g 93.1 gEDTA(PH=8)Triton X-100 10 ml 20 ml 100 ml0.5 M 亚铁氰化钾10.55 g 21.1g 105.5 g0.5 M 铁氰化钾8.25 g 16.5 g 82.5 gX-Gluc 50 mg 100 mg 500 mgGUS 染液的配置以500 ml GUS 染液为准，配比如下GUS母液配比（每500 ml）1 M NaH2PO421.15 ml1 M Na2HPO428.85 ml0.5 M EDTA(PH=8) 1 mlTriton X-100(20%) 25 ml0.5 M 亚铁氰化钾 5 ml0.5 M 铁氰化钾 5 mlX-Gluc 500 mg注：已知1 M的磷酸钠缓冲液（PH=7）中V（NaH2PO4）：V (Na2HPO4) = 42.3 : 57.7亚铁氰化钾K4Fe(CN)6.3H2O铁氰化钾K3Fe(CN)6GUS染液体系GUS 缓冲液GUS 底物3 mL 体系2850 μl150 μl5 mL 体系4750 μl250 μlGUS脱色（1）配置稀释过的NaClO溶液，浓度在3%左右（因NaClO易分解，详细浓度无法精确），配置好后封口避光保存。

GUS活性的组织化学检测

GUS染色液的配制GUS染色液的配制主要参照Jefferson（1987）的方法。

(1)配制50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）：A液：称取NaH2PO4.2H2O 3.12g 溶于无菌蒸馏水，定容至100ml。

B液：称取Na2HPO4.12H2O 7.7g 溶于溶于无菌蒸馏水，定容至100ml。

取39ml A液与61ml B液混合。

(2)配制X-Gluc(5-bromo-4chloro-3indolylglucuronide)母液：称5mg X-Gluc，溶于1mlDMF(二甲基甲酰胺)。

(3)染色液配制：磷酸钠缓冲液50 mmol/L（pH7.0），0.1%TritonX-100, 亚铁氰化钾5mmol/L，高铁氰化钾5mmol/L,X-Gluc 0.5mg/ml。

GUS活性的组织化学检测GUS活性的组织化学检测主要参照Jefferson（1987）的方法。

(1)愈伤组织瞬间表达及稳定转化的GUS检测愈伤组织瞬间表达的GUS检测：用带有重组质粒pOsMT2bL-GUS和35S-GUS的农杆菌EHA105感染水稻愈伤，共培养3d后，从每皿中各取10颗愈伤，用蒸馏水清洗除去愈伤表面附着的农杆菌。

滤纸吸干水分。

同时用未作任何处理的愈伤作阴性对照，将这些愈伤分别浸没在染色液中，37℃保温3-20h。

肉眼或显微镜下观察，愈伤上的蓝色小点即为GUS表达位点。

愈伤组织稳定转化的GUS检测：取经两轮抗性筛选后pOsMT2bL-GUS和35S-GUS转基因抗性愈伤，同时用未作任何处理的愈伤作阴性对照，将这些愈伤分别浸没在染色液中，37℃保温3-20h。

肉眼或显微镜下观察，愈伤上的蓝色小点即为GUS表达位点。

(2)根、茎、叶中的GUS检测剪取pOsMT2bL-GUS和35S-GUS转基因水稻及未转基因水稻成熟植株的根、茎、叶、叶鞘、叶舌叶耳结合部（其中根、茎、叶鞘用解剖刀横切），浸没在染色液中，37℃保温3-20h，转入70%乙醇中脱色2-3次，至阴性对照材料呈白色。

水稻的GUS 染色方法

我们用于水稻的GUS 染色方法：
取新鲜的材料（取根时要从近种子端基部完整取下，无菌蒸馏水冲洗干净，吸去表面水分）置于1.5 ml的离心管中，加入GUS染液（将材料全部浸在其中），染色液组成为：100 mM磷酸钠缓冲液（pH 7.0），10 mM EDTA （难溶，要查促溶的方法），Triton X-100 0.1%（v/v），亚铁氰化钾（pataxium ferrocyamide，分子量422.39g/mol）0.5 mM，铁氰化钾（pataxium ferricyamide,分子量329.25g/mol）0.5 mM （这些是终浓度，要配浓度大些的母液），甲醇（methanol）溶液20%（v/v），X-Glu 1 mM (用二甲基亚砜配成20倍母液，即10 mg X-Glu 加0.96ml, -20℃保存)。

37 ℃温浴12-36 h （或室温30-35℃条件下24 h 以上），期间摇晃几次使之染色均匀，直到蓝色不再加深为止。

然后取出材料放在指形管用70%酒精脱色3次，再用6% 次氯酸钠脱色8-10分钟（这一步可以不用），然后再置入含70% 酒精的青霉素小瓶中煮沸2次（煮沸1次后，降到室温，然后再煮沸1次）, 用灭菌水（如放时间较长，则用70%酒精）置于4℃冰箱保存，体式显微镜观察拍照。

（若染色材料为叶片，则在煮沸时可加入90% 的酒精，煮沸，直到叶绿素全部降解，即叶片无绿色为止）。

Gus染色试剂配制及使用方法

Gus染⾊试剂配制及使⽤⽅法●产品简介：gus(β-glucuronidase，β-D- 葡萄糖苷酸酶)基因是⽬前常⽤的⼀种报告基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)是⼀种⽔解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的⽔解，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X-gluc.htm' target=_blank>x-gluc）分解为蓝⾊的物质，其检测⽅法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。

因为绝⼤多数植物细胞内不存在内源的GUS活性，因此gus基因⼴泛⽤作转基因植物的报告基因，尤其是在研究外源基因瞬时表达的转化实验中⼴泛应⽤。

该试剂盒包含GUS染⾊的全部试剂，使⽤⽅便，只需将染⾊液和缓冲液按照⽐例混合即配成GUS染⾊液。

该试剂盒可以配制50ml GUS染⾊液。

●贮存和效期：X-gluc染⾊液-20℃保存；GUS染⾊缓冲液4℃贮存。

⾃开封之⽇起有效期⼀年。

●使⽤说明：⼀. GUS染⾊液配制：X-gluc染⾊液为50×浓缩液，使⽤前⽤GUS染⾊缓冲液稀释50倍即配成GUS染⾊液。

如0.1 ml X-gluc染⾊液加⼊到5 ml GUS 染⾊缓冲液中，即配成5 ml GUS染⾊溶液。

该染⾊溶液最好现⽤现配，短期贮存可以-20℃保存2-3天。

⼆. GUS染⾊步骤：1.将准备好的材料浸泡在GUS染⾊液中，于25-37℃保温1⼩时⾄过夜。

2.叶⽚等绿⾊材料转⼊70%⼄醇中脱⾊2-3次，⾄阴性对照材料呈⽩⾊。

3.⾁眼或显微镜下观察，⽩⾊背景上的蓝⾊⼩点即为GUS表达位点。

注：⽤于染⾊的植物材料的制备⽅法要因涉及的特定组织和器官的不同⽽异。

例如，拟南芥的根、花和叶⽚以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理⽽直接染⾊。

但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染⾊前切成薄⽚（1-3mm）。

当操作⼤的组织和样品时，可以选⽤真空渗⼊法来帮助底物和酶渗⼊细胞。

GUS能与显⾊底物X-gluc 反应，显现蓝⾊，因⽽可以通过组织化学染⾊定性研究GUS的表达⽔平和表达模式。

植物组织GUS染色方法

GUS染色试剂配制1. 50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）：A液：称取NaH2PO4●2H2O 3.12g溶于无菌蒸馏水，定容100ml；B液：称取Na2HPO4●12H2O 7.17g溶于无菌蒸馏水，定容100ml；取39ml A液与61ml B液混合。

2．染色液：50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中含有：0.1 mol/L K3[Fe(CN)6]，0.1 mol/L K4[Fe(CN)6]，10mmol/L Na2EDTA，0.001%（v/v）Triton-X100，20%甲醇，0.5mg/ml X-Gluc。

3．一般固定液：1%甲醛，50mmol/L磷酸钠缓冲液，0.05% Triton X-100（或Tween-20）。

4．FAA固定脱色液：5%甲醛，5%乙酸，5%乙醇。

染色直接染色法1．将准备好的试材浸泡在染液中，于25~37℃保温1h至过夜。

2．叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2~3次，至阴性对照材料呈白色。

3．肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。

固定染色法1．将材料浸入固定液，必要时刻抽真空1min，室温下轻摇30~60min。

2．取出材料，用磷酸钠缓冲液漂洗3~4次。

3．将材料放入无菌离心管中，加入染色液，浸没材料，盖上盖子，于37℃水浴中保温几分钟至过夜。

4．取出材料，用75%的乙醇漂洗，或放入FAA固定液中20min。

5．先后用20%乙醇，50%乙醇个浸泡20min以上。

6．显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。

7．染色后的材料可浸入含80%乙醇的FAA固定液中保存。

GUS组织化学染色

GUS组织化学染色试剂：GUS染色液（200ml）：X-Gluc 100mg； 50mM k4[Fe(CN)6] 2 ml; 50 mM k3[Fe(CN)6] 2 ml；0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 4 ml; 甲醇 5ml；Triton X-100 0.2ml; 加入50mM 磷酸缓冲液（pH 7.0）补足200ml；无菌膜过滤。

X-Gluc：100mg溶于1ml DMF，保存于4℃50 mM k3[Fe(CN)6]： 0.824g溶于50ml ddH2O，避光保存于4℃50 mM k4[Fe(CN)6]： 1.056g溶于50ml ddH2O，避光保存于4℃50mM 磷酸缓冲液（pH 7.0）：先配:0.2M Na2HPO4：称取71.632g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水中，0.2 M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水中，然后：62ml的0.2M Na2HPO4与38ml的0.2 M NaH2PO4混合，加蒸馏水稀释至400ml。

二、实验步骤：1. 取新鲜烟草叶片组织于90%丙酮中固定20 min；2. 弃丙酮，加入适量GUS染色液（不含X-Gluc）润洗一遍；3. 加入GUS染色液，真空处理20 min；4. 37℃孵育24h；5. 无水乙醇浸泡24h，除去叶绿素；6. 观察结果并照相。

烟草叶片GUS活性的荧光定量测定MrBAS基因启动子转基因烟草叶片组织器官的GUS活性定量分析以GUS蛋白荧光测定完成,表2 GUS蛋白提取缓冲液TabIe.2 GUS protein extraction buffer组分母液体积50 mmol/L 磷酸缓冲液(pH 7.0) 0.1 mol/L 磷酸缓冲液(pH 7.0) 50 mL10 mmol/L Na2-EDTA 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 2 mL10 mmol/L β-巯基乙醇β-巯基乙醇100μl0.1% TritonX-100 Triton X-100 100μl0.1% SDS 10% SDS 1 mLddH20 补足 100 mL烟草叶片总蛋白的提取1) 取超低温冰箱保存的样品材料并用液氮充分研磨成粉末，分别称取1.2g样品组织于离心管中；2) 向离心管中分别加入1mL GUS蛋白提取缓冲液，涡旋混匀，冰上放置2h至沉淀；3) 4℃ 6000 r/min 离心 20min，收集上清液；4) 滤纸过滤，去除植物组织残渣；5)吸取200μl上清液，保存在4℃冰箱中待用(考虑到GUS蛋白的活性,时间以一周内为宜)。

GUS染色液配制

一染色液配制1）X－Gluc母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺(DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100µL，保存于-20℃。

2）X－Gluc基液（50mM PBS，pH7.0）。

配制方法：50mM NaH2PO4·0.78g/100ml；50mM Na2HPO4 1.79g/100ml共同溶解；Na2EDTA （10mM，372mg），Triton-100（0.1％，100μl）,K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）（0.5mM，16.5mg）K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾）（0.5mM，21.1mg）染色液：50μl X-Gluc母液＋450μl基液需要试剂：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）；N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ；NaH2PO4；Na2HPO4 ；Na2EDTA ；Triton-100；K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）；K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾）二染色方法：1.将准备好的试材浸泡在染液，于25—37℃保温1小时至过夜。

2.叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。

3.肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。

三实验原理适宜的反应条件下，β- 葡萄糖苷酸酶（GUS）可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。

gus基因是目前常用的一种报告基因，是β－D－葡萄糖苷酸酶(gus)基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)能催化裂解一系列的β－葡萄糖苷酸，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）分解为蓝色的物质,也可以将4-甲基-伞形花酮-β-D-葡萄糖苷酯(4-MUG)分解为蓝色物质。

其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。

gus基因的最大优点是它能测定外源基因表达的具体细胞和组织部位，这是其它报告基因所不能及的。

GUS染色液

GUS 染色液简介：GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli 等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸酶的一种水解酶，该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。

β-葡萄糖苷酶基因染色试剂盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)简称为GUS 染色液，其染色原理是适宜的反应条件下，β-葡萄糖苷酶(GUS)可将X-Gluc 水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有GUS 活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。

GUS 染色液多用于转基因植物的GUS 基因表达分析。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、配制X- GlcA Solution ：X- GlcA 溶解于X-GlcA solvent 使其浓度达到,轻轻Vortex混匀，即为X- GlcA Solution 。

2、按下列比例配制GUS 染色液：组分体积 GUS Buffer A 2.5ml GUS Buffer B 10μl GUS Buffer C 10μl Deionized water 5.5ml 甲醇2.0ml X-GlcA Solution20μl编号名称DP0011110mlStorage 试剂(A): GUS Buffer A 50ml RT 试剂(B): GUS Buffer B 0.2ml 4℃ 避光试剂(C): GUS Buffer C 0.2ml 4℃ 避光试剂(D): 2×Fixation Buffer 25ml RT 避光试剂(E): X-GlcA80mg -20℃ 避光试剂(G): Deionized water 100mlRT 使用说明书1份T atal volume ～10ml3、固定(固定不是必须的步骤，如果不需要固定，直接进行操作步骤4)：①取转基因植物组织，入清洁小瓶或多孔板中。

GUS染色液

gus染色原理

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