原生质体紫外诱变脂肪酶高产菌株

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微生物育种资料名词解释1．富集培养目的微生物含量较少时，根据

微生物育种资料名词解释1．富集培养：目的微生物含量较少时，根据微生物生理特点，设计一种选择性培养基，创造有利生长条件，是目的微生物在最适环境下迅速生长繁殖，数量增加，由劣种变为优势种，以利用分离所需要的菌种。

2．营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养（氨基酸、维生素、核酸等）的能力，只有在基本培养基中补充所缺失的营养因子才能生长。

3．常规杂交育种：通过接合、转化、转导、溶源转化和转染等方式来获得重组体的杂交育种方法。

4．原生质体融合育种：通过酶解破除细胞壁后，制备微生物原生质体，然后诱导原生质体融合杂交，双亲本不受亲和力限制，甚至可以打破种属间遗传障碍。

获得远缘杂交重组体的特殊方式。

5．原生质体再生育种：微生物制备原生质体后直接再生，从再生菌落中分离筛选变异菌株，最终得到优良性状提高的正变菌株。

6．原生质体诱变育种：以微生物原生质体为育种材料，采用物理或化学诱变剂处理，然后分离到再生培养基中再生，并从再生菌落中筛选高产突变菌株。

解答1．工业生产的微生物菌种的特性①在遗传上必须是稳定的②易于产生许多营养细胞、包子或其他繁殖体②必须是纯种，不应带有其他杂菌及噬菌体④种子的生长必须旺盛、迅速⑤产生所需要的产物时间短⑥比较容易分离提纯⑦有自身保护机制，抵抗杂菌污染能力强⑧能保持较长的良好经济性能⑨菌株诱变处理较敏感，从而可以选育出高产菌株⑩在规定时间内，菌株必须产生与其数量的目的产物，并保持相对地稳定2．工业微生物的发展史（1）诱变育种。

以人工诱变手段诱发微生物基因突变，改变遗传结构和功能，通过筛选，从多种多样的变异体中筛选出产量高、性状优良的变异株，并找出发挥这个变株最佳培养基和培养条件，使其在最是环境条件下合成有效产物。

（2）杂交育种。

使双亲或多亲的遗传物质重新组合，以获得综合双亲优良性状的新品种的育种方法。

（3）代谢控制育种。

进行内因改变，通过定向选育某种特定的突变型，以达到大量积累由于产物的目的，定向选育包括改变代谢代谢通路；降低支路代谢终产物产生或切断支路代谢途径及提高细胞膜通透性。

桑黄菌原生质体紫外线诱变及高产菌株选育

时间段内菌丝体产量高，种后发菌快。此在生产中，注意接因要分时段抽样检验，观测菌丝体的生长情况，时终止培养。以及深层发酵菌种一旦培养终止，应尽快使用，一般在２用４ｈ内完。长时间存放，丝易老化、菌自溶，去活力影响出草。失
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食用菌
表２培养时间对深层发酵效果的影晌
ＥＤＩＢＬＥＦＵＮＧＩ
２０（）０７５
桑黄茵原生质体紫外线诱变及高产菌株选育
祝子坪马海乐
（苏大学食品与生物工程学院，苏镇江２３０）江江１２３
养基。３２泰山虫草深层发酵菌种生产最佳培养时问为４～２ｈ该－８７，
化等药用价值３因而被深入研究、发。１，开原生质体诱变是一种行之有效的育种新方法Ｉ１目前广４，
列方法检验杂菌：气味法：种培养过程中，发酵罐呼吸 ① 菌闻器排出的气体昧，淡淡的虫草清香味，异昧，明未感染有无表
杂菌。若有异昧，表明已感染杂菌，及时停止发酵。Ｈ值试 ②ｐ
纸法：种培养过程中，样检验ｐ值，Ｈ值急剧变化，菌取Ｈｐ表
试验观察，深层发酵菌种生产培养初期，养料昧浓。随培

产脂肪酶菌株的筛选及紫外-光复活诱变

产脂肪酶菌株的筛选及紫外-光复活诱变王金主1，袁建国2，杨丹2，徐军庆2，谭少君2，刘建民2，王元秀1，李峰2*（1.济南大学化学化工学院，山东济南250022；2.山东食品发酵工业研究设计院，山东济南250013）摘要：目的从土壤中分离选育出脂肪酶高产菌株。

方法通过罗丹明B 指示平板法分离出产脂肪酶量高的菌株，通过紫外-光复活诱变选育提高产量。

结果从土壤中筛得脂肪酶产量为6.75U/mL 的菌株白地霉L-8，通过紫外-光复活诱变提高产量到12.08U/mL 。

结论获得了一株高产脂肪酶的白地霉菌株，结果表明从土壤中分离出产脂肪酶的菌株，再通过紫外-光复活诱变提高其产量的高产菌株的筛选方法是可行的。

关键词：脂肪酶；罗丹明B ；白地霉；紫外-光复活诱变中图分类号：Q814.1文献标识码：A文章编号：1672-979X （2011）05-0192-04收稿日期：2011-1-11作者简介：王金主()，男，山东临沂人，硕士研究生，研究方向发酵工程：x @*通讯作者：李峰，男，高级工程师，研究方向发酵工程和酶工程：j @Screening of Lipase Producing Strains and Its Breeding by UV -photoreactivation MutagenesisWANG Jin-zhu 1,YUAN Jian-guo 2,Y ANG Dan 2,XU Jun-qing 2,TAN Shao-jun 2,LIU Jian-min 2,W ANG Y uan-xiu 1,LI Feng 2(1.School of Chemistryand Chemical Engineering,University of Jinan,Jinan 250022,China;2.Shandong F ood &Fermentation Industry Research and Design Institute,Jinan 250013,China)Abstr act:Object ive To isolate and select a high-yield lipase producing strain from soil.Methods A high-yield strain was isolated by flat separation using Rhodamine B as indicator.Its production was improved by ultraviolet photoreactivation mutagenesis.R esult s We obtained Geotrichum candidum L-8from soil.Its lipase yield was improved from 6.75U/mL to 12.08U/mL through ultraviolet photoreactivation mutagenesis.Conclusion A high-yield lipase producing strain was obtained.The methods to isolate it from soil and to improve its production of lipase were feasible.Key Words:lipase;Rhodamine B;Geotrichum candidum;ultraviolet photoreactivation mutagenesis脂肪酶是一种特殊的酯键水解酶[1]，它能水解甘油三酯产生脂肪酸、甘油二脂、甘油单脂和甘油[2]。

运用紫外诱变获得并筛选植酸酶高产菌株

运用紫外诱变获得并筛选植酸酶高产菌株摘要本文介绍了运用紫外诱变技术获得植酸酶高产菌株的方法，并对其进行筛选、鉴定及酶活测定。

通过实验验证，成功选育出一株植酸酶高产菌株，其酶活达到了较高水平。

介绍植酸酶是一种具有解除植物中植酸盐抗营养因子作用的酶。

在动物、人类体内，它能够释放无机磷以提高对磷的利用效率。

因此，植酸酶在生物技术和农业生产中具有极高的价值。

目前，获得植酸酶高产菌株的方法有很多，例如基因工程、长期培养筛选等。

然而，这些方法对设备、时间、技术水平等要求比较高，成本也比较高。

相比之下，运用紫外诱变技术获得植酸酶高产菌株更具优势。

紫外诱变是一种传统的微生物术语。

它是指用紫外线辐射处理微生物，产生突变，从而改变微生物的某些性状的过程。

它有着速度快、操作简便、筛选效果显著等优点。

实验材料和方法实验菌株以原繁压菌作为研究对象。

原繁压菌是一种常见的生物菌株，可用于生物技术、医药、环保等领域。

实验中使用的原繁压菌来自于某生物技术公司。

实验设备和试剂实验设备包括无菌工作台、高压灭菌器、紫外线灯、恒温振荡培养箱、分光光度计等。

试剂包括琼脂、LB培养基、植酸盐、硝酸钠、Na2HPO4等。

实验步骤1.取10微升的原繁压菌液放置于琼脂平板上，待其全面涂布后将其放入无菌工作台上恒温培养。

2.取1平板用紫外线灯辐照1分钟，同时对照组以同样方式处理。

3.将受照试验组培养菌悬浮于LB液体培养基中，恒温振荡培养，选取菌株后进行次级发酵。

4.通过过筛试验及酶活测定鉴定所获得的高产菌株。

实验结果及分析经过实验验证，紫外诱变成功激发原繁压菌中某些菌株的植酸酶高产潜力。

在恒温振荡扩大培养的过程中，筛选和鉴定了一类植酸酶高产菌株。

经过次级发酵，该高产菌株平均比对照组酶活测定提高了50%左右，酶活达到了200u/g左右。

本实验成功地运用了紫外诱变技术获得植酸酶高产菌株。

该方法操作简便，快速，能够筛选出带有目的性的高产菌株。

本实验结果可以为利用微生物生产高附加值产品提供实验参考。

利用原生质体诱变筛选植酸酶高产菌株

１．菌种筛选．１２１．１菌种初筛．１２．
．４２将实验室保存的菌种运用稀释平板法分离，０℃ １．植酸酶酶活的测定３以植酸钠为底物，采用钒钼酸铵法测定植酸酶的培养３ｄ选取单菌落（０株）入斜面培养基，种，５接每菌株斜面接入到１三角瓶进行发酵．５ｌ角个２０ｍ三瓶装液量为５１３０ｎ，０℃、０ｍｎ摇瓶培养７，ｌ２０ｒｉ／２ｈ测
再生平板培养基：０ｍ培养基中含葡萄糖４、１ｌ０．ｇ０
ＮＡＮ０３０．ＫＣ１０．５ｇ、ｇ０４７０．５ｇ、ｅ３ｇ、０ＭＳ ‘ Ｈ２００ＦＳ０４‘
７２．１、ＨＰ４．１，０ｏｌａ１Ｈ０００ＫＥＯ０用．ｍｌＣ溶液配０ｇ０ｇ６／Ｎ制，自然ｐＨ值，２Ｃ菌２ｉ。１１ｏ灭０ｍｎ
酶活。
将培养７２ｈ的发酵液经４００ｒｉ０ｒｎ离心除去菌／ａ
体，利用截流分子量为１０ａ的透析袋在无离子０００Ｄ水中将上清液透析２ｈ得到去除无机磷的酶液。吸取，
李秀珍，山东轻工业学院，５３３山东省济南市西部新２０５，
植酸钠（由美国Ｓｍｉａ公司提供）钼酸铵、醋面接入３个三角瓶进行平行发酵试验，５ｌｇ、冰２０ｍ三角瓶０ｎ，０ｏ２０ｒｉｌＣ／２ｈ测定酸、磷酸二氢钾、水乙酸钠、三偏钒酸铵、萄糖、化装液量为５ｌ３、０ｍｎ摇瓶培养７，葡氯

紫外诱变原生质体选育高产L-乳酸菌株的研究

菌中的乳酸菌；一类是真菌中的根霉菌．另在工业生产中，目前大多采用前者［．文以干酪乳杆菌的原生３本］质体为材料，进行紫外诱变处理，以期望得到高产量Ｌｇ酸的突变菌株．－Ｌ
１材料与方法
１１菌种．
干酪乳杆菌Ｚ — （ａｔｂｃｌｓｃｓｉ，安徽工程大学生物与化学工程学院保藏．ＺＬＬｃｏａｉｕ．ａｅｌ）
１２培养基与试剂．
种子培养基（良的ＭＲ改Ｓ培养基）蛋白胨１／酵母提取物５ｇＬ、檬酸二铵２ｇＬ、萄糖：０ｇＬ、／柠／葡
斜面培养基：在种子培养基的基础上，添加琼脂２／．０ｇＬ筛选培养基：良的ＭＲ改Ｓ培养基中加入００溴钾酚绿．．１高渗再生培养基：采用双层琼脂法，０７ｍｏ／Ｎａ１制ＭＲ用．ｌＬＣ配Ｓ培养基，层含２琼脂，层含上下
的形成率为８．，生率为４．％，到最佳水平．对原生质体进行了紫外诱变育种．过平板和静置发９５再７７达并通酵实验．选得到８株突变株产量比出发菌株高的突变株。中菌株Ｚ－６的Ｌ乳酸产量达７．／，出筛其Ｚ０＿８６ｇＬ比
３的琼脂．发酵培养基：萄糖９／，牛肉膏１／葡０ｇＬ２ｇＬ，麦芽汁１／２ｍｌＬ，ＭｇＯＳ・７Ｏ０６ｇＬ，ａＯＨｚ．／ＣＣ

原生质体紫外诱变选育纤维素酶高产菌株

摘要：以绿色木霉Ｔ为出发茵株，其进行原生质体紫外诱变，过刚果红透明圈平板初筛和油菜籽皮固态发酵０对通
复筛，到株稳定性好的纤维素酶高产茵株Ｕ，ＣＭＣ酶活达到了１２．４Ｕ・ｇ。比出发茵株Ｔ提高了得ＶＴ其００２＿，０
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圈开发应用
２８ｏ５ｏ亿ｅｓ０。Ｉ．Ｃｍ与生物Ｚ程０Ｖ．Ｎ８ｉ２ｈｔ
ｒ＆Ｂｉｅｇｎｅｉｇｙｏｎｉｅｒｎ
原生质体紫外诱变选育纤维素酶高产菌株
胡婷婷。雁临邱（北工业大学生物工程学院，湖湖北武汉４０６）３０８
ＫＨ２Ｏ４０４，Ｓ．４，ａ１００，量．ＭｇＯ４００ＣＣ２．５装Ｐ
５。
ｍａ是产纤维素酶最高的菌种［］目前，少学者利７。不
用各种诱变剂处理孢子来选育高纤维素酶活的突变
按牛酶、．溶蜗溶壁酶，高渗缓冲溶液中充分溶解，１０于经０００ｒ・ｍｉ－离心１ｎ后，上清液置３紫外灯下处ｎ１０ｍｉ取０ｗ理３ｎ倒人已灭菌的带有小玻璃珠的小三角瓶０ｍｉ，
株，但是通过原生质体诱变选育优良菌株的报道还很
少。由于去除了细胞壁，生质体对诱变剂更加敏感，原更容易得到优良的突变株，因此，者对出发菌株Ｔ作。进行原生质体紫外诱变，得了较好的效果。取

紫外诱变选育林可霉素高产菌株

１２１２５８７６４７９５
产量（十亿／罐）平均产量
３００８９２５６２１
增长率
１２．８％
——
增长率
１４
８％
——
４结论与讨论４．１以上罐批实验数据可见，２８＃（诱变）菌株生产水平明显高于我们现在生产使用的菌株，此结论与我们的摇瓶试验数据相吻合；４．２紫外线能引起变异，主要是它的作用光谱与核酸的吸收光谱相一致，因而ＤＮＡ最容易受影响，紫外线的诱变效应主要是因为它引起了ＤＮＡ变化而造成的；４．３菌种选育是抗生索工业生产及科研工作的主
２００５年１２月
紫外诱变选育林可霉素高产菌株
１３７
紫外诱变选育林可霉素高产菌株
杨玲喻红邹晖
邹美珍

（江西国药有限责任公司）
摘要：林可霉索是一种抗革兰氏阳性菌的抗生素，Ｉ临床主要用于治疗革兰氏阳性菌所引起的感染，具有疗效显著，副反应少等特点，广泛运用于临床。目前，我厂林可霉素的生产水平与国内先进厂家相比还有一定的差距。因此，为了提高我厂林可霉索的生产水平，我们从菌种着手，采用紫外（ｔｒＹ）诱变处理，通过诱发基因突变，改变遗传基因特性，选育出效价高，生产能力强，性能稳定的高产菌株。关键词：林可霉素ｕｖ高产
ｌ材料与方法１．１出发菌株：２８＃１．２培养基：分离培养基斜面培养基母瓶培养基发酵培养基１．３诱变手段：紫外（ＵＶ）２５３７埃１５Ｗ距离：３３ｅｒａ照射时间：，矿１．４步骤：将适量无菌水吸人２８＃菌种斜面内，制成一定浓度的孢子菌悬液，将ｌＯｍｌ孢子悬浮液于直径９ｃｍ培养皿中，在磁力搅拌器上用紫外线照射３０秒，将处理过的孢子悬浮液稀释后分离于培养皿中３０℃恒温培养７天，挑选单菌落接小试管斜面，培养成熟后，进行
初筛，再埋砂土，然后再进行三次复筛。２林可霉素生物效价的测定管碟法：以藤黄八叠球菌为指示菌３实验结果３．１初筛

香蕉保鲜技术研究进展

Ａｂｔｅ：Ｔｅｆｅｈｋｅｉｇｔｃｎｑｅｆａａａｉｃｕｉｇｐｙｉａ．ｈｍｉａｎｏｔｇｄｕｔｒｇｔｏｓａｅｒｖｅｄａｒｔｈｓ — ｅｐｅｈｉｕｓｏｎｎｌｄｎｈｓ１ｃｅｃａｄｃａｎｒｇｓｏａｅｍｅｄＴｅｉｗｅａｒｎｂｎｃｌｉｈｉｈｓｐｐｒｎｔｉａｅ．Ｍｅｎｈｌ，ｔｅａｐｃｆｎｏａｕａｏｙａｃａｉｅｎｔｅｂｎｎｓｅａｏａｅ，ａｄｔｅｍａｎｒｓａｃａｗｉｅｈｐｈａｏｆｎｔｒｌｐｌｓｃｈｒｉｅｒｈｉｄｈｈｅｄｒｃｏｉｈｕｕｅｉｄｓｕｓｄｉｔｎｎｔｅｆｔｒｓｉｓｅ．ｅｉｃ
２化学贮藏
ＭＡ含量和果皮细胞膜的渗透性，减轻果皮褐变程Ｄ度，较好地保持香蕉果实的贮藏品质。但是二氧化氯处理提高了多酚氧化酶的活性。
３涂膜保鲜
海金萍等人究不同酸度、不同浓度壳聚糖涂研膜保鲜剂对香蕉的保鲜效果。结果表明，壳聚糖对香蕉具有较好的保鲜效果，浸涂保鲜剂的香蕉在贮藏期间其水分、总酸和ＶＣ的含量均高于对照，而还原糖含量低于对照，涂膜保鲜剂中酸浓度不宜超过。李雯等人旧以巴西香蕉果实为材料，研究了不同浓度（质量分数０．，０％，１％，２％）的壳聚糖溶液对５．０．０香蕉果实贮藏保鲜的影响。结果表明，壳聚糖处理可明显延缓香蕉果实的软化进程和病情指数的升高；同时维持了果实较低的细胞膜透性、多酚氧化酶（Ｐ）活性和较高的苯丙氨酸解氨酶（Ａ）ＰＯＰＬ、Ｂ— ，３ｌ一葡聚糖酶（Ｕ）的活性。在４种处理中，ＧＮ以质量分数２壳聚糖处理效果最好。％

红曲霉菌的原生质体紫外诱变与融合选育及MonacolinK检测

吴学倩，芳安汪
（武汉工业学院食品学院，北武汉４０２）湖３０３
摘要：以高产Ｍｏａｏｎ的Ｑ一１为原始菌株，用原生质体紫外诱变及其融合的双重技术，得１株稳定高产ｎｃｈＫ１采获ＭｏａｌＫ的红曲菌株。试验确定了原生质体酶解最佳条件：龄３ｈ酶解温度２ ℃ ，解时间２５￣ｈ酶系统ｎｃｉｏｎ菌６，８酶．３，ｈ
ｌｔｎ２ｃｉａｃｒ０ｌＯ，ｎｅｄａａａｈｄ８．９％．ｈｒｏｌｓｆｓｎｒｅｏ一０ａｄＱａａａ０ｍｄｓｎｅｏ￣Ｏｓａｄｔｅｔｒｔｒｃｅ８７ｍｐｔｆ８ｈｈｅｅ％－１Ｔｅｐｏｐａｔｕｉｔｆ６ｎ一ｔｏａＸ
（．０％溶菌酶＋．３０５％蜗牛酶＋．０５％纤维素酶）红曲霉原生质体在２Ｗ紫外灯下２ｃ处照射８ｓ１０，致死率达。５０ｍ０－０ｓ
８．一１８％９％；经诱变所得高产Ｍｏａｏｉ菌株ｘ一０与Ｑ一１的原生质体融合率为３５％０融合子Ｒ一８菌株７ｎｃｌＫｎ６１．６，５Ｍｏａｏｎ含量迭２３．ｕ／，产量分别比Ｑ一１和ｘ一０提高８％和４．。Ｒ一８经发酵条件优化后ｎｃｌＫｉ１９６ｇｇ３１６６３１％５
Ａｓａｔｈｒｉａｓａ１，ｈｃａｉｅｉｌｏＭｏａｏｉＫｗｓａｏｔｈｕｌｔｈｏｇｆＵｂｔｃ：ＴｅｏｇｌｔｉＱ－ｗｉｈｈｄｈｇｒｙｅｆｎｃｌａｄｐｅｔｅｄａｅｎｌｙｏＶｒｉｎｒｎ１ｈｄｎｄｃｏ

紫外诱变高产monaconlin-k菌株的筛选定稿

水塔（北京）老陈醋生物科学有限公司
红曲霉目前主要的研究方向
红曲色素：是由微生物代谢产生的天然色素，稳定性好，在红曲霉的代谢产物中，色素的研究最为广泛和深入。现已广泛应用在食品中。提高色素产量（色价）；改善色素在水中的溶解性及对日光的稳定性。水溶性色素由于用途广泛受到青睐，所以将水不溶性色素改性为水溶性色素的研究专利很多。红曲色素的一个最大缺点就是对日光不稳定，在日光下易褪色。有研究人员针对这两点不足，设计了含有谷氨酸的半合成培养基，这样得到的红色素既有很好的水溶性，又有较强的抗日光作用。降胆固醇的物质monacolins的研究。（后面介绍）
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获得高产monaconlin-k方法-----诱变育种
紫外线物理因素激光微波
诱变育种常用
化学因素

：能导致遗传物质改变的一些化学
药物。（亚硝基胍）
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紫外诱变的原理
紫外线是一种最常用的物理诱变因素。它的主要作用是使DNA双链之间或同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，阻碍双链的分开，复制和碱基的正常配对，从而引起突变。紫外线照射引起的DNA 损伤，可由光复活酶的作用进行修复，是胸腺嘧啶二聚体解开恢复原状。因此，为了避免光复活，用紫外线照射处理时以及处理后的操作应在红光下进行，并且将照射处理后的微生物放在暗处培养。
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筛选高产moanconlin-k红曲菌株的具体步骤
流程简图
生理盐水振荡器四层过滤纸
活化菌种
血细胞计数板器
将孢子洗下
吸取10ml
振荡均匀
磁力搅拌
过滤
吸取200vl

用原生质体法诱变选育林可霉素高产菌株

紫外诱变
１材料
２３１在超净工作台上，．．用无菌生理盐水将新鲜斜面上的菌落轻轻洗下，放入无菌的含石英砂、璃珠的摇玻
１１菌种：可霉素生产菌Ｇ（．林江西国药有限责任公
司保存）１２培养基．斜面培养基：淀粉、豆饼粉、ＨＰＦＳＫＯＫ：Ｏ、ｅＯ、Ｎ ”
点，我们以林可霉素生产菌Ｇ为出发菌株，首先制备原生质体，再通过对原生质体进行紫
外诱变，经过平皿再生，经过摇瓶初筛、筛，再复得到一株生产性能比出发菌株提高３２．％
的突变株Ｙ９１。
关键词：可霉素林
原生质体
效＼序＼ｌ等
Ｙｌ９Ｇ４
六次
２３４５６
平均
３６２６３６ｌ２
３３３５３２２７３５３４２４０９３９９３５６４４３８２７３１２８３６３４０７９５２７８５４２３６
天；
平板再生培养基：蔗糖，聚胨，葡萄糖，酵母膏，ｅＦ—
Ｓ４ＫＯ，Ｈ２Ｏ，Ｓ４琼脂Ｏ，Ｎ３ＫＰ４ＭｇＯ，
２步骤２１酶液及酶解时间的选择．
林可霉素生产菌属放线菌，细胞壁的主要成分其
为肽聚糖，我们选用溶菌酶为制备原生质体的酶液，通过实验确定溶菌酶溶度为ｌｇｍ，ｍ／ｌ酶解时间为３小时。２２紫外线照射剂量的选择．ＵＶ照射与原生质体死亡率之间关系进行实验，见

脂肪酶高产菌株的筛选及产酶条件优化

ｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔ，ｗｈｏｓｅｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｕｐｔｏ１０．７９Ｕ／ｍＬ．Ｔｈｅｎｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｉｅｓｏｎｈｅｔｌｉｐａｓｅｐｒｏｄｕｃｉｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．
Ｖｌ０ｌ，３３Ｎｏ．９Ｓｅｐ．２０１３
脂肪酶高产菌株的筛选及产酶条件优化
夏宇，周文化，邓学良，伍金娥
（１．中南林业００４；
２．稻谷及副产品深加工国家工程实验室，湖南长沙４１０００４）摘要：为获得高产脂肪酶菌株，对包括白地霉在内的数十种微生物进行了筛选。在采用油脂培养基进行仞步
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｈｉｇｈｌｉｐａｓｅ — ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｓｔｒａｉｎｓａｎｄｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆ
ｌｉｐａｓｅｐｒｏｄｕｃｉｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
ＸＩＡＹｕ，ＺＨＯＵＷｅｎ — ｈｕａ，ＤＥＮＧＸｕｅ — ｌｉａｎｇ，ＷＵＪｉｎ — ｅ
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｉｒｎｇ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０００４，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ

运用紫外诱变获得并筛选植酸酶高产菌株

应用微生物技术实验设计班级：姓名：学号：运用紫外诱变获得并筛选植酸酶高产菌株一.实验目的1.学会从土壤中筛选到植酸酶菌株。

2.掌握紫外诱变菌株的方法。

3.学会从变异的菌株中筛选高产菌。

二.实验原理植酸（又称为肌醇六磷酸）在多种植物组织（特别是米糠与种子）中作为磷的主要储存形式，其结构是肌醇的6个羟基均被磷酸酯化生成的肌醇衍生物。

植酸以植酸钙镁钾盐的形式广泛存在于植物种子内，也存在于动物有核红细胞内，可促进氧合血红蛋白中氧的释放，改善血红细胞功能，延长血红细胞的生存期。

植酸本身就是对人体有益的营养品，植酸在人体内水解产物为肌醇和磷脂，前者具有抗衰老作用，后者是人体细胞重要组成部分。

植酸酶，是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶。

具有特殊的空间结构。

植酸酶作为一种新型的饲料添加剂，能分解饲料中的植酸，形成禽畜可利用的磷酸，提高饲料中有机磷的利用率，减少添加无机磷，降低饲料成本，减轻磷污染，同时解除植酸的抗营养作用，提高饲料的营养价值，具有非常可观的经济效益和生态效益。

以微生物的自然变异作为基础的筛选菌种的机率并不很高。

因为自发突变率小，一个基因的自发突变率仅为10-6~10-10左右。

为了加大突变频率，可采用物理或化学的因素进行诱发突变。

物理因素中目前使用得最方便且十分有效是UV，UV诱变一般采用15w的紫外灭菌灯，其光谱比较集中在253.7nm处，这与DNA的吸收波长一致，可引起DNA分子结构发生变化，特别是嘧啶间形成胸腺嘧啶二聚体，从而引起菌种的遗传特性发生变易。

在生产和科研中可利用此法获得突变株。

从土壤中筛选到一株植酸酶高产菌株，利用紫外线对该菌株进行诱变提高植酸酶产量，并采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素阴离子交换层析和sephadex G-100凝胶过滤层析对植酸酶进行分离纯化。

三.实验材料1.材料（1）筛选培养基：1%植酸钙，3%葡萄糖，200U/ml 青霉素钠，0.5%NH4NO3，0.05%KCl，0.003%，MnSO4.4H2O，0.05%MgSO4.7H2O，0.003% FeSO4·7H2O，1.5%琼脂，pH5.5。

原生质体紫外诱变选育D—核糖高产菌株的研究

原生质体紫外诱变选育D—核糖高产菌株的研究以枯草芽孢杆菌XB02为出发菌株，采用紫外诱变原生质体的方法，获得了1株D-核糖高产菌株T32，其摇瓶发酵产糖达103.6g/L。

遗传性状稳定良好。

标签：D-核糖；草芽孢杆菌；原生质体；紫外诱变D-核糖是一种五碳糖，是RNA等的组成糖，在医药中间体、医疗保健、运动营养等领域具有广泛的用途。

发酵法是目前最先进的D-核糖生产方法，D-核糖高产菌株的选育一直是国内外从业者关注的问题[1]。

去除了细胞壁的原生质体经诱变更易发生突变[2]，本实验旨在对D-核糖产生菌进行原生质体诱变，以期获得高产菌株。

1 材料与方法1.1 菌种枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）转酮醇酶变异株XB02。

1.2 培养基1.2.1 完全培养基牛肉膏0.5%，蛋白胨1.0%，葡萄糖0.1%，NaCl 0.5%，琼脂2.0%，pH6.7-7.0。

1.2.2 再生培养基完全培养基加入0.5mol/L的蔗糖和0.02mol/L的MgCl2，pH6.7-7.0。

1.2.3 筛选培养基[3]完全培养基中加入6.0%的D-核糖，pH6.7-7.0。

1.2.4 发酵培养基葡萄糖20%、玉米浆3%、（NH4）2SO4 0.6%、CaCO3 3.6%、MnSO4·4H2O 0.005%。

pH 6.7-7.0。

1.3 溶液1.3.1 高渗缓冲液丁二酸钠42.57g/L，蔗糖170.0g/L，MgCl2 4.06g/L，pH 6.7，115℃灭菌20min1.3.2 蛋清溶菌酶溶液高渗溶液配制浓度为1mg/ mL的蛋清溶菌酶液，微孔过滤除菌。

1.4 方法1.4.1 出发菌株的培养出发菌株接种于20mL /250mL完全培养基培养基的三角瓶，220r/min，36℃培养。

定时测定OD590nm，用对数中后期的菌体进行原生质体制备及诱变。

1.4.2 原生质体制备取5mL培养液，4500r/min，离心15min，弃上清。

紫外线诱变纤维素酶高产菌株的筛选及其酶活力

紫外线诱变纤维素酶高产菌株的筛选及其酶活力张君胜;张力;张尧【摘要】为筛选产纤维素酶酶活力高的菌株应用于秸秆饲料发酵,利用紫外线诱变对1株产纤维素酶绿色木霉菌进行了试验研究.结果表明:筛选出1株纤维素酶产酶量高且性状稳定的高产菌株ZJUV18,其发酵72h纤维素酶滤纸酶活达68.07 U/g,较原始菌株提高4.45倍.%A Trichoderma viride strain was treated with ultraviolet to screen out a high cellulase-producing strain and apply in straw feed fermentation. The results showed that a high cellulase-producing strain with high cellulose yield and stable characteristics, which was named ZJUV18, was screened out. The FPA could be up to 68. 07 U/g after fermented for 72 hours, which was 4. 45 times the activity of the original strain.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2011(039)010【总页数】3页(P125-127)【关键词】纤维素酶;诱变;紫外线;酶活力【作者】张君胜;张力;张尧【作者单位】江苏畜牧兽医职业技术学院,江苏泰州225300;江苏畜牧兽医职业技术学院,江苏泰州225300;江苏畜牧兽医职业技术学院,江苏泰州225300【正文语种】中文【中图分类】S182粮食短缺、能源危机是目前全球所面临的危机。

而我国由于受人口多、耕地少的双重制约，粮食供应形势尤为严峻。

因此，我国畜牧业要稳定持久发展，就必须减少对粮食的依赖[1]。

利用孢子紫外诱变选育秀珍菇新菌株

利用孢子紫外诱变选育秀珍菇新菌株闫静;王伟科;陆娜;宋吉玲;周祖法【期刊名称】《中国食用菌》【年(卷),期】2024(43)2【摘要】为缓解高温胁迫对南方地区秀珍菇夏季设施栽培的影响,开展秀珍菇耐高温新品种选育工作,以台秀5766为亲本,采用孢子紫外线诱变、多孢自交、高温筛选、系统选育等组合育种方法选育获得秀珍菇耐高温新菌株。

经拮抗试验、分子遗传鉴定和出菇筛选获得耐高温菌株P71。

经rDNA ITS测序,其序列长度为693 bp,在GeneBank中经BLAST比对确定其为侧耳属秀珍菇(Pleurotus pulmonarius)。

该菌株菌丝在35℃条件下培养,显微镜观察未发现菌丝收缩、变形、受损情况,且菌丝洁白、生长势较强,15 d内能缓慢生长。

在35~38℃高温条件下出菇,P71菌株前2潮菇产量和单菇质量均显著优于亲本台秀5766。

由此可见,新菌株P71与亲本台秀5766相比,菌丝生长阶段和出菇阶段均具有耐高温的特点,值得进一步在南方地区进行秀珍菇夏季设施栽培的试验、示范和推广应用,从而突破秀珍菇耐高温品种短缺造成的产业发展瓶颈。

【总页数】8页(P38-45)【作者】闫静;王伟科;陆娜;宋吉玲;周祖法【作者单位】杭州市农业科学研究院【正文语种】中文【中图分类】S646.1【相关文献】1.用紫外诱变及紫外+硫酸二乙酯复合诱变方法选育高产异淀粉酶菌株2.原生质体紫外诱变法选育高产γ-氨基丁酸秀珍菇菌株3.紫外线诱变原生质体己酸高产菌株的选育(Ⅱ)——原生质体的制备、诱变及选育己酸高产菌株4.利用原生质体紫外诱变技术选育可常温发酵的中国被毛孢新菌株因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

原生质体紫外诱变选育鸟苷高产菌株

见文献［５］。将原生质体悬浮于培养皿
１．２．４原生质体诱变
内进行紫外诱变，诱变条件为：紫外灯功率１５Ｗ，照射距离３０ＣＩＴＩ。照射至所需时间后，离心，用ＳＭＭ缓冲液适当浓缩，系列稀释适当浓度，然后涂于再生基本补充培养基的平板上。同时，以非诱变再生平板为对照，进行致死率的测定ｒ７］。计算原生质体的致死率：原生质体致死率＝
酶试剂的配制见文献［７］。
１．２实验方法
１．２．１
最小抑制质量浓度的选择配制含不同质
量浓度药物的平板，将出发菌株的菌悬液稀释到合适的质量浓度后涂布于药物平板。将涂菌平板置于培养箱内培养３ｄ，选择完全抑制鸟苷产生菌生长的最小药物质量浓度。１．２．２原生质体的制备见文献［５］。
１．２．３原生质体的再生
１材料与方法
１．１试验材料
１．１．１
试验菌种
ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＪＳＩＭ—Ｇ５１８。
学×１００％
其中：Ｄ为再生培养基平板上菌落数；Ｅ为诱变处理后再生培养基平板上菌落数。
１．２．５
ｏｎ
ＢｒｅｅｄｉｎｇｕｐＨｉｇｈ—ｙｉｅｌｄＳｔｒａｉｎｏｆＧｕａｎｏｓｉｎｅｂｙＰｒｏｔｏｐｌａｓｔ
Ｍｕｔａｇｅｎｓｉｓ
ＬＵＭａｏ—ｌｉｎ¨’２
ＳＨＥＮＧＣｕｉｌ，
（１．Ｓｃｈｏｏｌｏｆｏｆ
ＺＨＡＮＧＹｉ—ｐｉｎ９２，
ＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＰｈａｒｍａｅｅｕｔｉｃｓ，ＳｏｕｔｈｅｒｎＹａｎｇｔｚｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ２１４１２２，Ｃｈｉｎａ；２．ＪｉａｎｇｓｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅ
ｓｔｒａｉｎｗｈｉｃｈｈａｖｅｌａｃｋ－ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｈｙｄｒｏｌｙａｓｅ（ＮＨａｓｅ），ｓｕｌｆａｇｕａｎｉｄｉｎｅ（ＳＧ），ｄｅｃｏｙｉｎｉｎｅ（Ｄｅｃ），ｐｓｉｃｏｆｕｒａｎｉｎｅ（Ｐｓｉ）ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙＵＶｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ．Ｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｇｕａｎｏｓｉｎｅｗａｓ２４ｇ／Ｌ，ｗａｓｈｉｇｈｅｒ３０％ｔｈａｎｔｈａｔｏｆＢａｃｚｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＪＳＩＭ—ＧＵ一１２４－１９ｉＳ