刘希伟费林试剂热滴定定糖法
费林试剂热滴定定糖法
费林试剂热滴定定糖法一、实验目的1、初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2、正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。
二、实验原理还原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的单糖和某些二糖(如：乳糖、麦芽糖)。
所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。
大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。
一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。
还原后，自己会变成糖酸。
如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。
在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原，而糖本身被氧化成各种羟酸类化合物。
该特性常用于糖的定性和定量测定。
本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。
甲液含质量分数为0.05 g/mL的硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含质量分数为0.1 g/mL的氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。
在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物，该含Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色Cu2O的沉淀。
因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
费林试剂热滴定定糖法的基本原理, 是在沸热条件下, 用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时, 将费林试剂中的铜离子还原为氧化亚铜, 以亚甲基蓝为指示剂, 稍过量的还原糖立即将蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝, 指示滴定终点。
三、试剂和器材试剂：1. 面粉2. 6M HCl3. 蒸馏水4. 碘液5. 酚酞试剂6. 10%氢氧化钠7. 菲林试剂（甲、乙液）8. 标准葡萄糖（1mg/ml）器材：(1)25毫升碱滴定管。
(6) 万能夹(2)移液管(5、10毫升) (7) 铁架台(3)100毫升溶量瓶(8) 点滴板(4)100毫升锥形瓶(9) 水浴锅(5)滴管(10) 600瓦电炉四、实验步骤1. 总糖的提取准确称取面粉1克，加入6mol/L盐酸10毫升，蒸馏水15毫升，混匀。
费林试剂测定植物可溶性糖的含量
费林试剂测定植物可溶性糖的含量可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖，是植物品质的重要构成性状之一，果实中可溶性糖与酸的含量及其配比是影响风味品质的重要因素。
对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。
因此，可溶性糖的定量研究对果实的品质具有重要意义。
一、试材及用具1．试材新鲜或冷冻的植物材料2．仪器及试剂高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W调温电炉以及200mL、250mL 容量瓶、250mL锥形瓶及50mL碱式滴定管等玻璃仪器；试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝溶液等。
二、原理在加热条件下，用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时，将费林试剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。
通过实验，学习并掌握用费林试剂滴定法测定可溶性糖的原理和方法。
三、方法步骤（一）试剂配制1．费林试剂甲：称取硫酸铜（CuSO4•5H2O，分析纯）34.6g溶于水中，稀释至500mL，过滤，贮于棕色瓶内。
2．费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4O6H4•4H2O，分析纯）138g 溶于水中，稀释至500mL，用石棉垫漏斗抽滤。
3．转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖（分析纯）用水溶解后转入1000mL容量瓶中，加入6mol/L HCl（分析纯）10mL，加水至100mL。
在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容（此为酸化的1%转化糖液，可保存3～4个月）。
测定时，取1%转化糖液25.00mL 放入250mL容量瓶中，加入甲基红指示剂一滴，用1mol/L NaOH溶液中和后用水定容，即为1mg/mL转化糖标准溶液。
4．亚甲基蓝溶液：称取0.5g亚甲基蓝（分析纯）溶于10mL水中。
5．乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌[Zn(OAC)2•2H2O，分析纯]溶于水中，加冰乙酸3mL 稀释至100mL。
葡萄酒的检测讲解
2.酒精度的测定(密度瓶法)
原理
仪器 试样的制备
根据馏出液（酒精水溶液）的密度，查附录A（规 范性附录），求得20℃时乙醇的体积百分数，％ （体积分数），即酒精度。
•分析天平 全玻璃蒸馏器 高精度恒温水浴附温度计 密度瓶
Ｘ——干葡萄酒或半干葡萄酒总糖或还原糖的含量， （ｇ/Ｌ）; Ｆ——费林溶液Ⅰ、Ⅱ各5ml相当于葡萄糖的克数g ｃ——葡萄糖标准溶液的浓度ｇ/ml； V——消耗葡萄糖标准溶液的总体积（ml）； Ｖ１——吸取样品的体积ml）； Ｖ２——样品稀释后或水解定容的体积（ml）； Ｖ３——消耗试样的体积，（ml）。
Ｆ－ｃ×Ｖ
正式实验
Ｘ=—————---------------------------×１０００
（ Ｖ１/Ｖ２）×Ｖ３
吸取费林溶液Ⅰ、Ⅱ各5.00ml 于250ml三角瓶中，加50ml水比 预备试验少1ml的葡萄糖标准溶 液，加热至沸腾，并保持2min， 加 状2态滴下次于甲1基mi蓝n内指用示葡液Dt萄he，esc糖co在rinp标ttei沸onn准tso腾f溶 液滴至终点，记录消耗葡萄糖标 准溶液的总体积（V）。
用容量瓶准确量取样品（液温 20℃）于 蒸馏瓶中分三 次冲洗容量瓶，洗液并入蒸馏瓶中，再加几颗玻璃珠， 连接冷凝器，开启冷却水，缓慢加热蒸馏。收集馏出 液接近刻度，取下容量瓶，盖塞。于20 ℃水浴中保温 30 min，补加水至刻度，混匀，备用。
标定计算：
C—NaoH标准液的浓度。mol/L M—邻苯二甲酸氢钾 标定时所消耗的NaOH的体积 ml 空白实验所消耗NaOH的体积 ml 204.2—的摩尔质量g/mol
总糖和还原糖的测定──费林试剂比色法
实验一 总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂比色法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。
实验原理将一定量的碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO 4 = Cu(OH)2+ Na 2SO4所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。
Cu 2O + K 4Fe(CN)6 + H 2O K 2Cu 2Fe(CN)6 + 2KOH（氧化亚铜） （淡黄色）滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。
因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据样液量可计算出还原糖含量。
2 O试剂和器材一、试剂碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000ml。
碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。
6mol/LHCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120gNaOH溶于500ml蒸馏水中。
实验一 费林( Fehling)试剂热滴定法定糖
1）甲液+乙液(硫酸铜与氢氧化钠)生成氢氧化铜沉淀 2）氢氧化铜沉淀+酒石酸钾钠生成酒石酸钾钠铜(可溶 性络合物) 3）还原糖+酒石酸钾钠铜(Cu2+ )生成氧化亚铜(砖红色) 4）氧化亚铜+亚铁氰化钾生成可溶性复盐 5）还原糖(过量)+次甲基蓝生(蓝色)生成次甲基蓝(无 色)
三 实验材料、试剂和仪器
注意事项（不用掌握）
（4）样品溶液应预测，其目的：通过预测可 以知道样液大概消耗量，以便在正式测定时， 预先加入比实际用量少1ml左右的样液，只留 下1ml左右样液在继续滴定时加入，以保证在 1分钟之内完成继续滴定工作，提高测定的准 确度。 （5）必须严格控制反应液的体积，标定和测 定时消耗的体积应接近，使反应体系碱度一致。
二 实验原理
反应原理： 5）滴定时以次甲基蓝为氧化－还原指示剂。 因为次甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜 离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色 的氧化型次甲基蓝还原为无色的还原型的次甲 基蓝，即达滴定终点。
次甲基蓝（兰色氧化型）+葡萄糖+ H2O -->次甲基蓝（无色还原型）+葡萄糖酸
二 实验原理
二 实验原理
3）还原糖性质：在碱性溶液中，还原糖能将 Cu2+、Hg2+、Ag+等金属离子还原，而糖本 身被氧化成糖酸及其他产物。糖类的这种性 质常被用于糖的定性和定量测定。
二 实验原理
4）费林试剂热滴定法的原理 费林试剂的组成： 费林试剂由甲、乙两种溶液组成。甲液含硫 酸铜和次甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙液 含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
材料：葡萄 试剂：费林试剂甲乙溶液 标准葡萄糖溶液0.1%(0.001g/ml) 仪器： 锥形瓶(50ml)、碱性滴定管、吸量管 (5ml) 、容量瓶(100ml) 、电炉(垫铁盘)、石 棉网、铁台、蝴蝶夹。
薯干原料粗淀粉含量的快速测定
1999年第1期(总第91期)Liquor-making Science &T echnology酿酒科技69No.11999Tol.91潘小平四川通江银耳酒业有限责任公司(635700)摘要:探讨了用1B 4硫酸溶液水解薯干淀粉的快速测定法,并与传统法比较。
认为快速法作为指导生产实际的测定方法,具有一定的应用价值。
关键词:薯干;粗淀粉含量;水解时间;酸浓度;快速测定分类号:TS262.2/T S261.2文献标识码:A 论文编号:1001-9286(1999)01-0069-70薯干原料粗淀粉含量的快速测定收稿日期:1998)08)02作者简介:潘小平(1960.10),男,中专,生产技术部副主任,发表论文数篇。
淀粉出酒率和淀粉利用率是考核酒精生产的两个重要经济技术指标,并且原料淀粉含量的变化又会导致工艺参数的改变。
因此,如何快速、准确地测定原料淀粉的含量,就尤为重要。
为此,笔者在参照有关资料的基础上[1],采用1B 4硫酸溶液将薯干粉只需煮沸5分钟,即可使其淀粉完全水解成具有还原性的单糖。
与传统法比较,其测定结果基本一致,并且还能极大的缩短分析时间,这对于指导生产实际工作,具有一定的应用价值。
现将其试验过程整理出来,以供同行参考。
1材料和方法1.1原理提高水解液中的酸浓度可以缩短水解时间。
本法采用1B 4硫酸溶液水解薯干粉生成具有还原性的单糖,用斐林氏法定糖,再折算出粗淀粉的含量。
1.2试剂和材料1.2.1斐林试剂甲液称取69.3g 硫酸铜(CuSO 4#5H 2O),用水溶解并定容至1000ml 。
乙液称取346g 酒石酸钾钠,100g 氢氧化钠,用水溶解并定容至1000ml 。
1.2.22%盐酸溶液量取4.5ml 浓盐酸,用水稀释至100ml 。
1.2.320%氢氧化钠溶液称取200g 氢氧化钠,用水溶解并稀释至1000ml 。
1.2.41%次甲基蓝溶液称取1g 次甲基蓝,用水溶解,并稀释至100ml 。
费林试剂热滴定定糖法
,费林试剂热滴定定糖法1、目的和要求1、初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2、正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。
2、原理还原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的单糖和某些二糖(如：乳糖、麦芽糖)。
在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原，而糖本身被氧化成各种羟酸类化合物。
该特性常用于糖的定性和定量测定。
本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。
在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物。
3、测定1、空白测定准确吸取费林甲、乙液各5毫升和蒸馏水5毫升放入250毫升的锥形瓶中，再用滴定管加入一定量的标准葡萄糖液，混匀后放在石棉网上加热，应使瓶内溶液在2分钟内达到沸腾，以每滴4-5秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色消失为止。
沸腾前加入的标准葡萄糖液量与沸腾后滴定时所用的标准葡萄糖液量的总和，就是测定空白时耗用的标准葡萄糖液毫升数(V1)。
全部滴定过程必须在沸腾状态下快速进行，一般应在3分钟内完成。
因此，除控制滴定速度外，滴定前需加入一部分标准葡萄糖液。
加入该液的数量，应在正式滴定前的预备滴定试验时确定，同时练习掌握操作条件。
2、总糖的测定准确称取面粉1克，加入6N盐酸10毫升，蒸馏水15毫升，混匀。
沸水浴加热半小时后，取出几滴水解液用碘化钾-碘溶液检查水解是否完全，若已经水解完全，则不呈现蓝色。
冷却后用10%氢氧化钠中和至中性溶液，过滤，滤液定容至100毫升。
准确吸取该溶液10毫升，移入100毫升容量瓶内并定容至刻度，即为测定总糖的样品液。
准确吸取样品液5毫升放于100毫升锥形瓶内，加入费林甲液、乙液各5毫升，混匀，然后按测定空白同样操作进行滴定，记下耗用标准葡萄糖的毫升数。
826-实验三食品中还原糖的测定——费林氏容量法
实验三食品中还原糖的测定——费林氏容量法一、实验内容用直接滴定法（费林氏容量法）测定食品中的还原糖含量。
二、实验目的通过本实验，加深用直接滴定法（费林氏容量法）测定食品中的还原糖含量的原理的理解；掌握其操作要点，熟练基本操作技术。
三、实验原理样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定已标定过的费林氏液（碱性酒石酸铜溶液），费林氏液（碱性酒石酸铜溶液）被还原析出氧化亚铜。
以次甲基蓝为指示剂，在终点稍过量的还原糖立即将氧化型蓝色的次甲基蓝还原为无色的还原型次甲基蓝。
根据样品消耗体积，计算还原糖量。
GB5009.7-85，本方法适用于所有食品中还原糖的检测。
检出限0.1mg。
四、仪器和试剂（一）仪器：100mL、250mL烧杯，1000mL、250mL容量瓶，25mL酸碱滴定管，250mL锥形瓶，滤纸，玻璃珠，电炉，铁架台，漏斗等。
（二）试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
1．费林甲液（碱性酒石酸铜甲液）2．费林乙液（碱性酒石酸铜乙液）3．乙酸锌溶液4．亚铁氰化钾溶液5．盐酸6．葡萄糖标准溶液五、实验步骤（一）试剂配置1．费林甲液（碱性酒石酸铜甲液）称取15 g硫酸铜（CuSO4·5H2O），及0.05 g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000mL。
2．费林乙液（碱性酒石酸铜乙液）称取50 g酒石酸钾钠与75 g氢氧化钠，溶于水中，再加入4 g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
3．乙酸锌溶液称取21.9 g乙酸锌，加3 mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100 mL。
4．亚铁氰化钾溶液称取10.6g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100mL。
5．葡萄糖标准溶液精密称取1.000 g经过80 ℃干燥至恒量的葡萄糖（纯度在99%以上），加水溶解后加入5mL盐酸（如果即配即用就不加），并以水稀释至1000mL。
此溶液相当于1 mg/mL葡萄糖。
（二）样品处理：吸取20mL液体样品，置于250mL容量瓶中，加50mL蒸馏水，摇匀后慢慢加入5mL乙酸锌及5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，静置0.5h。
用铁氰化钾法测定王浆中总糖的含量
用铁氰化钾法测定王浆中总糖的含量黑龙江农业经济职业学院(157041) 李凤玉摘要:铁氢化钾法不但操作简便,容易掌握,而且比斐林氏容量法更具有结果准确和终点明显等优点,因此,建议在教学和科研上采用本法测定王浆中的总糖含量。
关键词:王浆中的总糖;铁氢化钾法;斐林试剂法;还原;滴定;滴定终点 王浆中总糖的含量是王浆产品等级和理化要求的一项重要检测指标。
王浆中的糖类物质占干物质中可溶性成分的78%,其中包括葡萄糖45%、果糖52%、麦芽糖1%、龙胆二糖1%、蔗糖1%。
97%是还原性的单糖。
目前应用的检测方法是斐林试剂法,原理是斐林试剂A、斐林试剂B混合时,生成的天蓝色氢氧化铜沉淀,立即与酒石酸钾钠反应,生成深蓝色的氧化铜与酒石酸钾钠的络合物———酒石酸钾钠铜,酒石酸钾钠铜被王浆样液中的还原糖还原,生成红色的氧化亚铜沉淀。
滴定达到终点时,稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝指示剂还原为无色的隐形体,而显示出氧化亚铜的鲜红色。
在具体的操作中由于不是用纯的还原糖液进行滴定,蓝色消失后不是出现氧化亚铜的鲜红色,而由蓝色———蓝红色———砖红色,并且颜色过度不明显,本实验操作又在是加热煮沸的条件下进行滴定,终点就更不容易判断,往往就造成实验误差。
用铁氰化钾法代替斐林试剂法测定王浆中总糖含量,滴定达到终点时,稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原为无色,蓝色消失时滴定终点明显,很容易判断,结果准确,且操作简便,容易掌握。
因此,建议在教学和科研上采用本法测定王浆中的总糖含量。
1 原理样品经除去蛋白质后,加入盐酸,在加热条件下使二糖水解转化为还原糖,还原糖在碱性溶液中能把铁氰化钾还原为亚铁氰化钾,根据铁氰化钾的溶液和王浆样液的量,便可计算出王浆中总糖的含量。
以葡萄糖为例,其反应式为: C6H12O6+6K3F e(C N)6+6K OH=(CH OH)4・(C OOH)2+6K4F e(C N)6+4H2O 葡萄糖 铁氰化钾 氢氧化钾 葡萄糖二酸 亚铁氰化钾 水 2 试剂2.1 铁氰化钾溶液(ρ=10g/L):溶解10g 铁氰化钾(分析纯)于蒸馏水中,并用蒸馏水稀释至1000m L,置于棕色瓶中保存。
实验一 费林( Fehling)试剂热滴定法定糖
四 实验步骤
1）样品中还原糖的提取：取10克左右葡萄， 洗净，滤纸擦干，研钵捣碎，葡萄原汁倒入 三角瓶，80℃恒温水浴中保温30min，过滤 到试管，取1mL定容到100mL。
1）甲液+乙液(硫酸铜与氢氧化钠)生成氢氧化铜沉淀 2）氢氧化铜沉淀+酒石酸钾钠生成酒石酸钾钠铜(可溶 性络合物) 3）还原糖+酒石酸钾钠铜(Cu2+ )生成氧化亚铜(砖红色) 4）氧化亚铜+亚铁氰化钾生成可溶性复盐 5）还原糖(过量)+次甲基蓝生(蓝色)生成次甲基蓝(无 色)
三 实验材料、试剂和仪器
反应原理： 3）在加热条件下，用样液滴定，样液中的还 原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还 原糖还原，产生砖红色氧化亚铜沉淀：
二 实验原理
反应原理： 4）反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的 亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐：
Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O--> 无色） K2Cu2Fe(CN)6（无色）+ 2KOH
注意事项（不用掌握）
（4）样品溶液应预测，其目的：通过预测可 以知道样液大概消耗量，以便在正式测定时， 预先加入比实际用量少1ml左右的样液，只留 下1ml左右样液在继续滴定时加入，以保证在 1分钟之内完成继续滴定工作，提高测定的准 确度。 （5）必须严格控制反应液的体积，标定和测 定时消耗的体积应接近，使反应体系碱度一致。
六 注意事项
（1）费林试剂甲液和乙液应分别贮存，用时 才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性 条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂 有效浓度降低。 （2）滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把 锥形瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入 反应溶液中。
20041230_fsptsmb002
行业文档FSPTSMB002 绵白糖还原糖分的测定廉爱农滴定法F_SP_TS_MB_002绵白糖—还原糖分的测定—廉爱农滴定法1 范围本方法采用廉爱农滴定法测定绵白糖中的还原糖分。
本方法适用于绵白糖的还原糖分的测定，以%（m/m）报告其结果。
2 原理样品经处理后，用费林试液滴定，计算还原糖分。
3 试剂3.1 费林氏甲液取化学纯硫酸铜（CuSO4·5H2O）69.28g放入1000mL烧杯中，加蒸馏水约500mL后置于沸腾水浴中加热使其溶解。
冷却后定容至1000mL。
3.2 费林氏乙液取化学纯酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）346g放入烧杯中，加入约500mL蒸馏水，加热溶解；用另一烧杯称取氢氧化钠100g，加入约250mL蒸馏水溶解；将两液混匀，冷却后定容至1000mL。
3.3 纯蔗糖制备取质量较好的白砂糖溶解于水中，在水浴上加热至70～80℃，继续加入白砂糖以玻璃棒搅拌，至不能溶解时为止。
用少量脱脂棉作过滤介质，在保温漏斗中过滤。
漏斗下放一杯无水乙醇，当热糖液滴下时，不停搅拌，使白砂糖溶液在乙醇中生成极细晶体。
当杯中蔗糖晶体达到所需数量时，将部分结成小块的晶粒取出，用乳钵研碎，然后一并在布氏漏斗中用真空吸滤法吸干。
再将晶体溶解于70～80℃水中至不能溶解为止。
重复上述操作方法，将已经吸滤的蔗糖在乳钵中研碎，在50℃和—0.053Mpa真空下干燥至恒重。
3.4 标准转化糖溶液制备（1g转化糖/100mL）取9.500g纯蔗糖溶解于100mL蒸馏水中，缓慢加入浓盐酸（ρ约1.19）5mL。
在20～25℃放置3d后于容量瓶中稀释至1000mL，倒入带有磨口瓶塞的瓶中保存备用。
此溶液是一种稳定的贮备液（可存放3～4月），使用前随时稀释3.5 转化糖溶液制备（0.2g转化糖/100mL）吸取标准转化糖溶液50mL于250mL容量瓶中，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液中和后（氢氧化钠用量系以酚酞为指示剂预先滴定计算而得），加蒸馏水至标线。
总糖和还原糖的测定费林试剂比色法
实验一 总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂比色法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。
实验原理将一定量的碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO 4 = Cu(OH)2+ Na 2SO4所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。
Cu 2O + K 4Fe(CN)6 + H 2O K 2Cu 2Fe(CN)6 + 2KOH（氧化亚铜） （淡黄色）滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。
因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据样液量可计算出还原糖含量。
2 O试剂和器材一、试剂碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000ml。
碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。
6mol/LHCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120gNaOH溶于500ml蒸馏水中。
原料糖蜜测定操作规程
原料糖蜜测定操作规程原料糖蜜分析操作规程⼀、取样每车取⼀个有代表性的样品 (约500g)作为分析样品。
⼆、分析项⽬1、锤度的测定⽅法⼀：密度法1.1 测定⽅法:将糖蜜试样搅拌均匀后，于⼯业天平上称取试样200克，再加⽔800 mL，搅拌均匀后即得5倍稀释糖液（也可⽤测总糖的样液A测定，此时N=43.333/G样液A）。
⽤少许稀释糖液将250 mL量筒内壁冲洗两次，然后再盛满稀释糖液，静⽌⽚刻，待内部⽓泡逸出后，吹除表⾯泡沫，然后徐徐插⼊糖锤度计和温度计，待温度计的温度不再上升（约5分钟左右）时，即读取锤度和温度。
1.2 结果计算密度锤度（%）=N×（Bx+K）式中：N——稀释倍数Bx——t℃样液的观测锤度，0Bx；K——t℃样液的观测锤度温度校正系数（查表1），0Bx表1：观测锤度温度更正表（20℃）续表续表续表⽅法⼆：折射法（QB/T 2684⼀2005）⽢蔗糖蜜经稀释⼀定倍数后，在折射仪上测其可溶性固体物质，经温度校正，乘以稀释倍数可得糖蜜的折射锤度。
1.1 仪器、设备1.1.1阿贝折射仪，折射率测量范围1.300-1.700。
分划板上折射率最⼩分度值0.001。
糖量浓度度测量范围(%)0~95。
分划板上糖量浓度(%)最⼩分度值0.5。
1.1.2 温度计，0℃-30℃，刻度0.1℃1.2 测定步骤1.2.1 糖蜜样品经充分搅拌后加蒸馏⽔进⾏质量稀释3-4倍，或直接⽤2.4.2样液测定。
1.2.2 校正_⽤蒸馏⽔校正仪器，20℃时蒸馏⽔的折射率为1.33299，若温度不在20℃，可查蒸馏⽔折射率表，调节仪器的⽰值与该温度对应的折射率相符即可。
1.2.3 测定打开折射仪的棱镜，滴加适量的样液于棱镜上，迅速闭合并锁紧。
待样液达到棱镜温度时，调节光源及读数反射镜，使视场明亮，转动棱镜⼿轮，使视场中明暗分界线恰在⼗字线中⼼，读取样液的折射锤度及测定时的温度。
1.2.4 计算及结果表⽰⽢蔗糖蜜的折射锤度按下式计算，数值以%表⽰，计算结果取到⼩数点后⼀位数。
蔗糖标准滴定液的配制和费林甲液F值标定
蔗糖标准滴定液的配制和费林甲液F值标定
配置：精确称取9.5g蔗糖（精制蔗糖），加100mL蒸馏水溶解，然后再加5mL浓盐酸，摇匀，室温放置一周，最后定容到1000mL。
费林甲液F值标定：吸取上述蔗糖液50mL于250mL容量瓶中，加2滴酚酞，用20%NaOH溶液调节到粉红色，最后定容至刻度（溶液呈粉红色），以备用，现用现配。
吸取费林氏乙、甲各5mL，然后加25mL 蒸馏水，预放24.5-25.5mL糖溶液在电炉上加热至沸腾，保持沸腾2min，立即加入2滴次（或四）甲基兰指示液（1%）（此时应呈蓝色，若为红色即说明加入糖液过多，应重新滴定），从碱式滴滴定管徐徐滴入糖液，使沸腾的糖液由兰色变为紫色，再变为红色，即为终点。
整过滴定过程控制在3min内。
（我们一般不做预报试验）用糖液标准滴定液滴定。
V
F= ━━
25
式中：
V----消耗糖液的mL数，
注：F尽量接近于1。
费林甲、乙氏试液
配制方法：费（斐）林氏溶液分甲液、乙液，分别配制贮存，在使用之前按规定迅速混合。
混合时要准确加入等容量的甲液于乙液
中，并严格按规定的次序加入，否则开始形成的氢氧化铜沉淀的再溶解会不完全。
a) 甲液:称取五水合硫酸铜(AR) 69.28 g，用蒸馏水溶解后，移入1000 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，过滤即成(我们一般不过滤)。
b) 乙液:称取酒石酸钾钠(NaKC4H4O6. 4 H20) 346 g溶于蒸馏水约500 mL中;另称取氢氧化钠100 g溶于蒸馏水约200 mL中。
将二者混合，移入1000 ML容量瓶中，加水至刻度，放置2d,如液面降低，应再加水至刻度，摇匀，过滤即成(我们一般不过滤)。
菲林试剂
SGD-Ⅳ型全自动还原糖测定仪使用说明书山东省科学院生物中心（生物研究所） 山东省生物传感器重点实验室一、基本原理全自动还原糖测定仪（SGD-Ⅳ型）是根据费林试剂测定原理设计而成的，其原理与目前国家标准一致；费林试剂是一种氧化剂，由甲、乙液组成。
测定时一定量的甲乙液混合，首先形成氢氧化铜，然后形成酒石酸钾铜络合物。
次甲基蓝作为滴定终点指示剂，在氧化溶液中呈蓝色，被还原后呈无色。
用标准还原糖滴定时，还原糖首先使铜还原，至铜被还原完毕，才使次甲基蓝还原成无色，即为滴定终点。
在滴定过程中，溶液颜色逐渐变化：蓝色→深蓝色→浅蓝色→紫红色→淡紫红色→在终点时突然变化至无色透明。
采用光电转换装置，检测滴定过程中透光率的变化（见图一）；根据电压变化曲线由仪器控制系统自动记录、采样、确定滴定终点；根据达到滴定终点时消耗的标准还原糖量，由控制系统自动计算出样品中还原糖含量，并显示和打印结果。
滴定过程电信号变化及控制原理（见图二）如下：图一滴定电压的变化曲线图二全自动还原糖测定仪控制原理图二、仪器结构仪器由反应系统、自动控制系统和机壳三部分组成。
1、反应系统核心部件为反应池，其剖面结构如图三所示。
图三 全自动还原糖测定仪反应池结构图反应系统由滴定池主体构成；滴定池左右两侧有入射光源和光电转换器，滴定池前后两侧有液体进出管道，滴定池内侧有温度传感器和液体加热电极，根据需要调整液体温度；滴定池底部有电磁搅拌器，使滴定液体均匀混合；上部是进样口，可用移液器将被测样品注入滴定池。
2、自动控制系统包括电源电路、控制电路、控制面板、微型打印机；按设定程序控制滴定池液体的进出、液体温度、搅拌、光电反应信息的收集和转换、计算、测定结果显示及打印。
注射泵自动加入标准液、滴定液、两个蠕动泵可自动完成清洗和排空。
全自动还原糖测定仪泵系统如图四所示。
图四全自动还原糖测定仪泵系统结构图泵管连接：（1）清洗泵右端口连接硅胶管接蒸馏水瓶（需将该连接硅胶管置于蒸馏水中），左端口连接硅胶管接反应池最上面不锈钢管道（出厂时已连接上）。
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费林试剂热滴定定糖法
姓名：XXX 学号：2011001400XX 年级：20XX级生物基地班学院：生命科学学院实验日期：2013年5月13日同组者：XXX
一、实验目的
1、初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2、正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。
二、实验原理
还原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的单糖和某些二糖(如：乳糖、麦芽糖)。
所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。
大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。
一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。
还原后，自己会变成糖酸。
如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。
在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原，而糖本身被氧化成各种羟酸类化合物。
该特性常用于糖的定性和定量测定。
本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。
甲液含质量分数为0.05 g/mL的硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含质量分数为0.1 g/mL的氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。
在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物，该含Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色Cu2O的沉淀。
因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
费林试剂热滴定定糖法的基本原理, 是在沸热条件下, 用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时, 将费林试剂中的铜离子还原为氧化亚铜, 以亚甲基蓝为指示剂, 稍过量的还原糖立即将蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝, 指示滴定终点。
三、实验器材：
(1)25毫升碱滴定管。
(6) 万能夹
(2)移液管(5、10毫升) (7) 铁架台
(3)100毫升溶量瓶 (8) 点滴板
(4)100毫升锥形瓶 (9) 水浴锅
(5)滴管 (10) 600瓦电炉
四、实验试剂：
［1］费林试剂(定量)：
(1)费林甲液：称取15克硫酸铜(CuSO
4·5H
2
O)和0.05克次甲基蓝，溶于1000
毫升水中。
(2)费林乙液：称取50克酒石酸钾钠、54克氢氧化钠和4克亚铁氰化钾溶
于1000毫升水中。
［2］标准葡萄糖溶液：称取葡萄糖(预先在105℃烘干，恒重)1克，用少量蒸馏水溶解后，加入8毫升浓盐酸(防止微生物生长)，再用蒸馏水定容至1000 毫升。
［3］6N盐酸溶液。
［4］10%氢氧化钠溶液。
［5］碘试剂：将碘化钾20克及碘10克溶于100毫升水中。
使用前需稀释10倍。
［6］PH1~14试纸。
五、实验步骤
1. 总糖的提取
准确称取面粉1克，加入6mol/L盐酸10毫升，蒸馏水15毫升，混匀。
沸水浴加热半小时后，取出几滴水解液用碘化钾-碘溶液检查水解是否完全，若已经水解完全，则不呈现蓝色。
冷却后用10%氢氧化钠中和至中性溶液，定容至100毫升。
准确吸取该溶液10ml，移入100ml容量瓶内并定容至刻度，即为测定总糖的样品液。
2、空白测定
准确吸取费林甲、乙液各5毫升和蒸馏水5毫升放入250毫升的锥形瓶中，再
用滴定管加入一定量的标准葡萄糖液，混匀后放在石棉网上加热，应使瓶内溶液
在2分钟内达到沸腾，以每滴4-5秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色消
失为止。
记录滴定完后滴定管的刻度，并同时记录滴定所需时间。
平行测定三次，
直至所得的平均数与各组的差值＜0.05ml。
沸腾前加入的标准葡萄糖液量与沸腾
后滴定时所用的标准葡萄糖液量的总和，就是测定空白时耗用的标准葡萄糖液毫
升数(V1)。
全部滴定过程必须在沸腾状态下快速进行，一般应在3分钟内完成。
因此，
除控制滴定速度外，滴定前需加入一部分标准葡萄糖液。
加入该液的数量，应在
正式滴定前的预备滴定试验时确定，同时练习掌握操作条件。
3、总糖的测定
准确称取面粉1克，加入6N盐酸10毫升，蒸馏水15毫升，混匀。
沸水浴
加热半小时后，取出几滴水解液用碘化钾-碘溶液检查水解是否完全，若已经水
解完全，则不呈现蓝色。
冷却后用10%氢氧化钠中和至中性溶液，过滤，滤液定
容至100毫升。
准确吸取该溶液10毫升，移入100毫升容量瓶内并定容至刻度，
即为测定总糖的样品液。
准确吸取样品液5毫升放于100毫升锥形瓶内，加入费林甲液、乙液各5毫升，
混匀，然后按测定空白同样操作进行滴定，记下耗用标准葡萄糖的毫升数。
平行
测定三次，直至所得的平均数与各组的差值＜0.1ml。
六、数据记录
实验测定数据如下表所示：
表一：费林试剂热滴定数据记录表
滴定组别空白测定样品测定
滴定次数 1 2 3 平均 1 2 3 平均
费林甲液/mL 5 5 5 -- 5 5 5 -- 费林乙液/mL 5 5 5 -- 5 5 5 -- 蒸馏水/mL 5 5 5 -- -- -- -- -- 样品液/mL -- -- -- -- 5 5 5 -- 预加葡萄糖
/ml 4.5
4.5
4.5
--
--
--
--
--
消耗葡萄糖量
V 1/ml 9.50 9.50 9.45 9.48 -- -- -- --
消耗葡萄糖量
V 2/ml -- -- -- -- 5.25 5.30 5.30 5.28
七、计算
(V 1-V 2)× 标准葡萄糖液浓度(克/毫升) ×稀释倍数
还原糖(或总糖)%= ×100 称取的样品量(克)×5
式中：V 1为测定空白时耗用标准葡萄糖液毫升数。
V 2为测定总糖时耗用的标准葡萄糖的毫升数 （9.48-5.28)×1×10-3×103
还原糖(或总糖)%= ×100=83.0%
1.012×5
八、 注意事项
1. 菲林试剂一般应现配现用，因为斐林试剂甲和斐林试剂乙混合后会因酒石酸有一定的还原性而自发地缓慢产生氧化亚铜沉淀。
2. 总糖的提取步骤中，面粉应在液体加入三角瓶之后再加入，因为这样可以使面粉更容易溶解，沸水浴30min后检查是否水解完全，若未则应继续加热。
3. 用酚酞作指示剂时用10%氢氧化钠调PH至7，应先计算大概需加入氢氧化钠溶液的体积，然后在接近拐点处应一滴一滴甚至半滴半滴的加，因为此处突变很大，避免加入氢氧化钠过量后再用盐酸调PH，因为这会使得葡萄糖溶液变得粘稠。
4. 空白滴定中一定以每滴1-2秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色变成黄色且在30s内颜色又变成深红色为止。
5. 为使空白测定与样品测定的时间一致，在样品滴定之前应提前加入一定量的葡萄糖。
6. 在滴定过程中，应注意在颜色由蓝色变为紫色时，应减慢滴速，当颜色变为土黄色时，立即停止加入葡萄糖，颜色会再度变回紫色时，不应再滴加葡萄糖。
7. 平行三次后所得的平均数与各组的差值＜0.05ml。
八、分析与小结
实验分析：
实验测得的面粉中的糖含量为83.0%，与实际值有一定的误差，产生误差的原因有以下几点：
（1) 面粉未完全溶解，仍有部分固体残渣被过滤出来，对测量结果有一定的影响。
对实验结果造成影响。
（2) 各组滴定的时间不完全一致，空气中的O
2
（3) 对滴定终点的把握不够精确，导致超过滴定终点，使得实验数据产生一些偏差。
实验小结：
此次试验我掌握了费林试剂热滴定定糖法的实验原理和操作方法，进一步熟练掌握了滴定管的使用方法和热滴定终点的确定。
实验中，特别注意了滴定过程中的操作，保持被滴定的液体始终处于沸腾状态。
最终得到的实验结果是面粉中的糖含量为83.0%，结果较准确，实验较成功。