RNA的提取和纯化
rna制备
rna制备RNA制备是指通过一系列实验步骤和技术手段，从细胞或组织中提取RNA并纯化，以获得足够纯度和量的RNA样本，供后续实验使用。
RNA制备的过程可以分为细胞裂解、RNA提取和RNA纯化三个步骤。
第一步：细胞裂解细胞裂解是RNA制备的第一步，其目的是使细胞孤立的RNA释放出来。
常见的细胞裂解方法有化学法和物理法两种。
化学法主要是利用细胞壁破裂剂，如SDS、蛋白酶K等，来破坏细胞膜结构，使细胞内容物释放到溶液中，其中包括RNA。
物理法主要是利用高频振荡器、高压破碎仪等机械手段来破坏细胞膜，使细胞内容物释放出来。
第二步：RNA提取RNA提取是RNA制备的核心步骤，其目的是将裂解后的细胞中的RNA从其他生物大分子（如DNA、蛋白质和碳水化合物）中分离出来。
常见的RNA提取方法有酚-氯仿法、硅基膜柱法以及磁珠法等。
酚-氯仿法：该方法主要是利用酚和氯仿的相溶性差异，蛋白质、RNA和DNA在酚-氯仿溶液中的溶解度不同，从而实现RNA的提取。
首先将细胞裂解液加入到等体积的酚醇中，轻轻混合，使蛋白质和DNA被酚沉淀下来。
然后将上清液转移到新离心管中，加入等体积的氯仿，轻轻混合，使RNA在上清液中，DNA、RNA在氯仿相中。
最后进行离心分离，收集上清液中的RNA。
硅基膜柱法：该方法主要是利用硅基膜上的离子交换和疏水相互作用原理，使RNA固定在硅基膜上，而其他杂质则被洗脱下来。
首先将细胞裂解液与硅基膜结合，然后进行洗涤和洗脱步骤，最后收集硅基膜上的RNA。
磁珠法：该方法主要是利用带有磁性的磁珠，结合RNA提取试剂盒中的特定缓冲液，在磁场下将RNA与其他杂质分离。
首先将细胞裂解液与磁珠结合，然后洗涤去除其他杂质，最后在磁场下分离磁珠，将RNA溶于溶剂中。
第三步：RNA纯化RNA纯化是为了去除RNA样品中的杂质，提高RNA的纯度。
主要包括DNaseI消化、乙酰胆碱酯酶消化、酚醇沉淀等方法。
DNaseI消化：该步骤主要是通过在反应体系中加入具有DNaseI活性的酶来去除RNA样品中可能存在的DNA污染。
rna提取的原理
rna提取的原理
rna提取是一种用于分离和纯化RNA分子的技术。
它是基于RNA在生物体中具有碱性特性以及RNA与DNA之间的化学
差异。
首先，需要将样品（如细胞组织、细胞培养物等）收集并打碎，以释放细胞内的RNA分子。
然后，通过加入裂解缓冲液，可
以使RNA保持在溶液中而不受降解的影响。
接下来，需要加
入含有离子的溶液，如乙酸或盐溶液，以中和RNA分子的碱
性特性。
这样一来，RNA分子会以氢键和离子键的形式与溶
液中的离子结合，形成稳定的RNA-离子复合物。
为了进一步纯化RNA，可以使用酚/氯仿提取法。
该方法利用
酚的亲水特性和氯仿与酚相互不相溶的性质，将RNA-离子复
合物从其他细胞组分中分离出来。
在这个过程中，酚会与
RNA-离子复合物结合，而其他细胞组分则会保留在无机相
（如下层的氯仿相）中。
接下来，离心可将上层的RNA-酚复合物沉淀到底部。
然后，
通过加入冷酒精，可进一步沉淀和纯化RNA分子。
冷酒精中
的离子和RNA结合形成了RNA-离子复合物，这样可以使
RNA从水溶液中沉淀出来。
最后，通过离心将RNA沉淀到管底。
随后，可以使用酚/氯仿
再次提取以去除可能残留的污染物。
最终，用无脂乳状液或其他适当的溶液溶解RNA，在纯化过程完成后就可以得到纯的RNA样品了。
通过RNA提取技术，可以获得高质量的RNA分子，以用于后续的实验和研究，如逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Northern印迹、测序等。
RNA的提取和纯化
总RNA的提取时间:2013-01-05 22:32 来源:作者:生物界--------------------------------------------------------------------------------完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。
所有ＲＮＡ的提取过程中都有五个关键点，即１）：样品细胞或组织的有效破碎；２），有效地使核蛋白复合体变性；３），对内源ＲＮＡ酶的有效抑制；４）有效地将ＲＮＡ从ＤＮＡ和蛋白混合物中分离；5），对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。
但其中最关键的是抑制ＲＮＡ酶活性。
RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径，1),提取总核酸，再用氯化锂将RNA沉淀出来；2),直接在酸性条件下抽提，酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA 留在水相。
第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失，目前该方法的使用频率已很低。
方法一:总RNA的试剂盒快速提取一些公司推出的总RNA提取试剂盒,可以用来制备咧柿康目捎糜诮 獾腞NA。
该总RNA纯化系统采用两种著名的RNA酶抑制剂,异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基乙醇,加上整个操作都在冰浴下进行,这样就能显著降低RNA的降解速率。
GTC和N-十二烷基肌氨酸钠的联合使用,将促使核蛋白复合体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。
而进一步从复合体中纯化RNA,则根据Chomc zynski和Sacchi的一步快速抽提法进行,采用酸性酚-氯仿混合液抽提。
低pH 值的酚将使RNA进入水相,这样使其与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离。
水相中的RNA可用异丙醇沉淀浓缩。
进一步将上述RNA 沉淀复溶于GTC溶液中，接着用异丙醇进行二次沉淀，随后用乙醇洗涤沉淀，即可去除所有残留的蛋白质和无机盐，而RNA中如含无机盐,则有可能对以后操作中的一些酶促反应产生抑制。
rna纯化原理
rna纯化原理
RNA纯化是一种重要的实验步骤，目的是从混合样品中分离、纯化并富集RNA。
在进行RNA纯化的过程中，需要考虑到RNA的稳定性以及杂质的去除。
以下是一些常用的RNA纯化
方法和原理：
1. 酚/氯仿法：该方法利用RNA和DNA在酚相和水相中的差
异分配特性，将细胞裂解后的混合样品经酚酸盐处理，使
RNA富集在酚相中，而DNA和蛋白质则富集在水相中。
2. 硅胶柱层析法：该方法基于RNA与硅胶之间的结合性质，
通过将样品溶液滴入硅胶柱中，RNA会与硅胶发生结合，然
后通过洗脱步骤来去除杂质，最终得到纯化的RNA。
3. 离心过滤法（Ultrafiltration）：该方法利用超滤膜的孔径大
小来分离RNA和其他分子。
样品置于超滤膜中，通过离心加
速运动，分子会根据其大小通过膜孔，使得RNA被保留在滤
膜上，从而实现纯化。
4. 核酸磁珠法：该方法利用具有亲和性的磁珠来捕获RNA分子，然后通过磁场将磁珠与复合物分离出来，并进行洗脱步骤来去除杂质，使得RNA得到纯化。
这些方法各有优缺点，需要根据实验需求和样品特性选择最合适的方法进行RNA纯化。
在实验过程中，需要注意避免RNA 的降解，避免污染以及误差的引入，以确保最终纯化的RNA
质量和纯度的高度。
提取lncrna方法
提取lncrna方法
提取长非编码RNA（lncRNA）的方法可以依据以下步骤进行：
1. RNA提取：从细胞、组织或血液样本中提取总RNA。
可以使用商业化的RNA 提取试剂盒或其他标准的提取方法。
2. RNA纯化：纯化总RNA，去除DNA、蛋白质和其他污染物。
可通过RNA
纯化试剂盒使用离心管离心、针对总RNA进行酶处理等方法。
3. RNA定量：测定提取到的RNA的总量和质量。
可以使用比色法、荧光染料法或生物分析仪器等方法进行测量。
4. RNA逆转录合成cDNA：使用逆转录酶将总RNA转录为互补DNA(cDNA)。
通常使用随机引物或壳聚糖引物，同时添加核酸酶抑制剂等试剂来促进转录反应。
5. lncRNA的筛选和鉴定：通过各种高通量测序技术，如RNA测序（RNA-seq）或微阵列芯片分析，来鉴定lncRNA。
这些方法可通过测量转录组中的RNA表达水平来确定lncRNA的存在。
6. lncRNA的功能研究：通过多种实验技术，例如RNA干扰（RNAi）、基因编辑和表达等，进一步研究lncRNA的生物学功能。
这些实验可以帮助确定lncRNA 在基因调控、细胞增殖、信号转导等方面的作用。
需要注意的是，lncRNA是一类具有多样性和复杂性的RNA，其提取和鉴定方法需要根据具体研究目的和研究对象的不同进行优化和调整。
提取rna的步骤
提取rna的步骤
提取RNA是分子生物学研究中的重要步骤之一，它通常用于研究基因表达、基因调控和遗传变异等过程。
以下是提取RNA的基本步骤： 1.样品采集和处理：根据实验要求选择合适的样品，如细胞、组织、血清、尿液等。
采集后，立即加入RNA保护剂，并在低温条件下保存。
2.细胞破碎：使用机械方法或化学方法将细胞破碎，如用高速离心机、超声波器或液氮冷冻等方法。
3.RNA提取：通过离心、溶解、洗涤等步骤，将RNA分离出来。
通常使用酚/氯仿（Trizol）法、硅胶柱法或磁珠法等方法提取RNA。
4.纯化RNA：将提取的RNA经过凝胶净化或硅胶柱纯化，去除DNA、蛋白质等杂质，得到高质量的RNA样本。
5.RNA定量：使用紫外吸收光谱或荧光分析仪等方法测定RNA的浓度和纯度。
6.保存RNA：将RNA保存在-80°C的低温条件下，或加入RNase 抑制剂等物质，避免RNA的降解和污染。
以上是提取RNA的基本步骤，不同实验需要根据具体要求进行适当调整。
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提rna步骤及原理
提rna步骤及原理RNA是一种重要的生物大分子，它参与了许多基因表达和调控过程。
研究RNA的结构和功能对于理解生物体内的生物学过程至关重要。
下面将介绍RNA的提取步骤以及其原理。
1. 细胞破碎：首先需要破碎细胞壁，使RNA释放出来。
可以通过机械破碎、酶解或超声波破碎等方法，将待提取的细胞或组织进行处理，使其细胞壁破裂。
2. 蛋白质消化：为了去除细胞中的蛋白质，需要进行蛋白酶处理，将蛋白质分解释放RNA。
常用的蛋白酶有蛋白酶K、蛋白酶ase等。
3. RNA沉淀：利用盐溶液将RNA沉淀下来。
常用的盐溶液有醋酸钠、氯化钠等。
加入盐溶液后，RNA会形成带负电荷的物质，与阳离子结合形成沉淀。
4. RNA纯化：通过将RNA溶解于适当的缓冲液中，并加入醇类或其他试剂，去除干扰物质如DNA、蛋白质和多余的盐等。
这里主要利用了RNA在不同条件下的溶解性差异，从而将RNA纯化。
5. RNA沉淀及洗涤：使用无水乙醚、异丙醇等有机溶剂，将纯化后的RNA沉淀下来。
然后进行洗涤以去除残留的盐和其他杂质。
6. RNA溶解：将RNA沉淀融于适当的溶液中，如去离子水或缓冲液，以便后续实验的进行。
RNA提取的原理主要基于RNA具有独特的化学结构和物理性质。
RNA是由核苷酸组成的，与DNA相似，但其具有URACIL（U）碱基而非胸腺嘧啶（T）碱基。
RNA在细胞内参与转录和翻译过程，是转录过程产生的物质，通过提取RNA可以获得物种特异性的RNA序列，进而进行RNA测序、定量PCR等分子生物学实验。
在RNA提取过程中，细胞破碎、蛋白质消化、RNA沉淀、纯化及溶解等步骤的设计，使得RNA能够被高效地提取出来，并且不受到外界干扰物质的影响，确保获取纯净的RNA样品，用于后续的实验分析。
rna提取各步骤原理
rna提取各步骤原理RNA提取是分子生物学研究中的一项重要技术，用于从细胞或组织中提取RNA分子。
RNA提取的过程包括细胞破碎、RNA溶解、RNA纯化和RNA沉淀等步骤。
下面将分别介绍这些步骤的原理。
1. 细胞破碎细胞破碎是RNA提取的第一步，其目的是将细胞的细胞膜和细胞壁破坏，释放细胞内的RNA分子。
常见的细胞破碎方法有机械破碎、化学破碎和冻融破碎等。
机械破碎利用高速离心或超声波等力量将细胞破碎，化学破碎则通过加入细胞破碎缓冲液，使细胞发生溶解和破裂，冻融破碎则是通过反复冻结和融化来破坏细胞。
2. RNA溶解RNA提取的第二步是将细胞破碎后的RNA溶解在溶解液中，使其能够在后续的纯化步骤中更好地被提取出来。
RNA溶解液一般包含酸性物质和蛋白酶，酸性物质可以中和细胞碱性成分，使RNA分子得以溶解，而蛋白酶则可以降解细胞内的蛋白质，减少RNA与蛋白质的结合。
3. RNA纯化RNA提取的第三步是将RNA从其他细胞成分中纯化出来，以获得较纯的RNA样品。
RNA纯化的常见方法有酚/氯仿法、硅胶柱法和磁珠法等。
酚/氯仿法通过酚和氯仿的密度差异将RNA分离出来，硅胶柱法是利用硅胶柱的亲合性将RNA吸附在硅胶表面，磁珠法则利用磁珠表面的亲合配体与RNA的亲和性将RNA捕获。
4. RNA沉淀RNA提取的最后一步是将纯化后的RNA进行沉淀，以去除残余的杂质并集中RNA分子。
RNA沉淀常使用乙醇沉淀法，即在加入乙醇的条件下，使RNA分子与乙醇结合形成可见的沉淀物，然后通过离心将沉淀物沉淀下来。
沉淀后的RNA可以通过去除乙醇并溶解在适当的缓冲液中，得到最终的RNA样品。
总结起来，RNA提取的步骤包括细胞破碎、RNA溶解、RNA纯化和RNA沉淀，每一步都有其特定的原理和方法。
通过这些步骤，可以从细胞或组织中提取出纯度较高的RNA样品，为后续的RNA 分析和研究提供基础。
RNA提取技术的发展不仅在分子生物学研究中具有重要意义，也在临床诊断和药物研发等领域发挥着重要作用。
提rna步骤
提rna步骤RNA是一种重要的生物分子，它在细胞内起着传递遗传信息、调节基因表达等重要作用。
为了研究RNA的功能和机制，科学家们需要对RNA进行提取和纯化。
本文将介绍RNA提取的步骤和注意事项。
一、材料准备1.细胞样本：可以是组织、细胞培养物等。
2.离心管：用于分离样本中的细胞。
3.离心机：用于离心细胞。
4.细胞裂解液：可以是Trizol、RNAiso等商用试剂，也可以是自制的裂解液。
5.异丙醇：用于沉淀RNA。
6.洗涤液：可以是75%的乙醇、70%的乙醇等。
7.去离子水：用于稀释试剂和溶解RNA。
8.琼脂糖凝胶：用于纯化RNA。
二、提取步骤1.制备样品将细胞样本收集到离心管中，离心机离心10分钟，将上清液倒掉，留下细胞沉淀。
2.细胞裂解加入适量的细胞裂解液，使细胞完全裂解，释放RNA。
3.分离RNA加入等体积的异丙醇，混匀，离心10分钟，收集上清液，其中含有RNA。
4.沉淀RNA将上清液加入等体积的异丙醇，混匀，离心10分钟，收集沉淀，其中富含RNA。
5.洗涤RNA用75%的乙醇洗涤RNA沉淀，去除杂质。
6.溶解RNA用去离子水溶解RNA沉淀，制备1mg/ml的RNA溶液。
7.纯化RNA将RNA溶液加入琼脂糖凝胶管中，离心10分钟，收集上清液，其中含有纯化的RNA。
三、注意事项1.样品的处理要快速，避免RNA被降解。
2.细胞裂解液的选择要根据实验需要进行优化。
3.异丙醇的体积要与上清液相等，否则RNA沉淀不完全。
4.洗涤RNA时要用足够的乙醇，否则杂质无法完全去除。
5.制备RNA溶液时要使用去离子水，避免RNA被污染。
6.琼脂糖凝胶的选择要根据RNA大小和纯度要求进行优化。
7.操作过程中要注意无菌操作，避免RNA被污染。
总之，RNA提取是RNA研究的基础工作，正确的提取步骤和注意事项能够保证RNA的纯度和完整性，为后续实验提供可靠的基础。
rna的提取方法
rna的提取方法RNA的提取是从生物样品中获取RNA的过程，这个过程通常包括以下几个步骤：1. 样品收集：根据需求选择生物样品，如细胞、组织、血液等，并采用合适的方法收集。
2. 细胞破碎：通过细胞破碎，将细胞内的RNA释放到溶液中。
破碎方法包括机械破碎、超声波破碎、化学破碎等。
3. RNA分离：分离RNA和其他分子，如DNA、蛋白质等。
4. RNA纯化：将RNA纯化，去除杂质，获得高质量RNA。
纯化方法包括硅胶柱层析、离心管基质层析等。
下面详细介绍三种常用的RNA提取方法：1. 酚-氯仿法这种方法可用于组织和细胞的RNA提取。
首先使用酚将细胞或组织破碎，然后加入等体积的氯仿，混匀，使DNA和蛋白质沉淀于底部，RNA在上层水相中得到富集。
再通过异丙醇沉淀，将RNA分离出来。
最后，通过洗涤和纯化过程，得到高质量RNA。
酚-氯仿法是一种经济、简单和高收率的提取RNA的方法。
2. 硅胶柱纯化法该方法是一种高效、快速且高纯度的RNA提取方法，适用于多样品处理。
该方法使用硅胶柱将RNA分离，并消除DNA和酶的污染。
该方法能够从各种样本中提取高品质RNA，可用于测序、杂交和原位杂交等分子生物学应用。
3. 针头粘贴法这种方法是一种快速简单的RNA提取法，特别适用于某些免疫细胞和细胞样品。
利用针头从样品中取出细胞，将其粘贴在聚丙烯酰胺凝胶上，通过离心将RNA分配到凝胶上。
该方法提取RNA量小，但可以高度升质和纯化的RNA，是一种快速且相对简单的RNA提取方法。
总之，根据不同的实验目的，可选择适用于不同的RNA提取方法。
rna提取 步骤
rna提取步骤RNA提取是分子生物学实验中常用的一项技术，它可以从细胞或组织中提取RNA分子，为后续的RNA分析和研究提供基础。
RNA 提取的步骤包括样品收集、细胞破碎、RNA溶解、纯化和质量检测等。
下面将详细介绍RNA提取的步骤。
1. 样品收集在进行RNA提取之前，首先需要收集合适的样品。
样品可以是细胞培养物、动物组织或植物组织等。
在收集样品时，要注意避免RNA的降解。
可以将样品存储在RNA保护液中，或者迅速冷冻保存。
2. 细胞破碎将样品中的细胞破碎是RNA提取的关键步骤之一。
常用的方法有机械破碎、化学破碎和酶解等。
机械破碎可以通过离心或超声波处理来实现，化学破碎则是通过加入蛋白酶K等蛋白酶来破坏细胞膜，而酶解则是利用特定的酶来降解细胞壁和细胞膜。
3. RNA溶解破碎后的细胞中存在着大量的RNA酶，这些酶会降解RNA分子。
因此，在提取RNA之前，需要添加RNase抑制剂来阻止RNA的降解。
同时，还需要加入蛋白酶来破坏蛋白质，使RNA与蛋白质分离。
4. 纯化为了从混合物中分离出RNA分子，需要进行纯化步骤。
常用的纯化方法有酚/氯仿法、硅胶柱法和磁珠法等。
酚/氯仿法主要是通过酚和氯仿的密度差异来分离RNA和其他杂质。
硅胶柱法则是利用硅胶膜上的亲水性来吸附RNA分子。
磁珠法则是通过磁珠上的特定配体与RNA的结合来实现分离。
5. 质量检测提取到的RNA需要进行质量检测，以确保其完整性和纯度。
常用的检测方法有琼脂糖凝胶电泳、比色法和荧光测定等。
琼脂糖凝胶电泳可以根据RNA的大小和形态进行分析。
比色法和荧光测定则可以用来测定RNA的浓度和纯度。
RNA提取是一项复杂的实验技术，需要经过样品收集、细胞破碎、RNA溶解、纯化和质量检测等步骤。
每一步都需要仔细操作，以确保提取到高质量的RNA样品。
RNA提取的成功与否直接影响到后续的RNA分析和研究结果，因此在实验中应尽可能遵循标准操作规程，以获得准确可靠的实验结果。
实验四 RNA的提取及其纯度检测
实验四RNA的提取及其纯度检测实验目的：了解Trizol提取总RNA的原理，掌握高质量完整总RNA提取的技术以及电泳变性胶电泳检测和浓度及纯度鉴定方法。
实验原理Trizol是一种酚与异硫氰胍的混合物，非常容易把组织和细胞中的总RNA提取出来。
在加入氯仿离心后，RNA保留在水相中，与DNA和蛋白质分离开来（保留在有机相中）。
吸取水相，加入异丙醇成淀RNA，从而得到完整纯度高的总RNA。
实验内容材料小鼠新鲜肝试剂总RNA提取纯化试剂：Trizol(Invitrogen)；DEPC(Amersham)，无水乙醇，已丙醇；电泳试剂：TAE，上样缓冲液（50%甘油，10 mM EDTA，0.25% 溴酚蓝，0.25%二甲苯青），琼脂糖。
操作步骤总RNA的提取1小鼠肝组织的匀浆裂解断颈处死小鼠，立即解剖取出肝脏，取50-100mg到玻璃匀浆器中，假如1mlTrizol反复匀浆膜碎组织，使细胞完全裂解。
按1 ml Trizol加入0.2 ml氯仿，震荡15秒，室温放置3分钟，12000×g，4℃离心15分钟。
2 RNA的沉淀将离心的上清转移到新的离心管中，按1 ml Trizol加入0.5ml异丙醇，震荡15秒，室温放置10分钟，12000×g，4℃离心10分钟。
3 RNA的洗涤与溶解吸掉上清，加入1 ml 75% 乙醇洗涤沉淀，4℃，7500×g离心5分钟。
吸掉上清，空气干燥RNA沉淀10分钟，加入适量的DEPC处理水（50μl）溶解RNA，立即电泳和紫外浓度和纯度鉴定，剩余-70℃保存备用。
结果在凝胶上可以看到一般可以看到三条带，其中从上样孔开始对应的带的分别是28S,18S和5S，其中18S和28S的条带明显清晰，而5S的带比较弱，28S的带的亮度是18S带亮度的2背左右，说明RNA保持完整。
紫外分光光度法测定RNA的浓度和纯度总RNA用10mM的Tris-HCl(pH8.0)稀释，利用紫外分光光度计测定A260和A280值，根据1OD=40ug定量,并计算A260/A280比值，每一样品重复3次。
RNA的提取方法
RNA的提取方法RNA提取是一项关键的实验技术，用于从生物样本中分离和纯化RNA分子。
RNA的提取方法通常包括细胞破碎、RNA的溶解和纯化。
以下是几种常见的RNA提取方法：1.酚/氯仿提取法这是一种常见且经典的RNA提取方法。
首先将样品中的细胞进行破碎，然后将细胞裂解液与等体积的酚混合，并进行振荡离心。
酚可与蛋白质结合形成上清和有机相，而RNA会在有机相中沉淀。
接下来，用氯仿去除DNA等杂质，然后将上清转移到新离心管并加入异丙醇，以沉淀RNA。
最后，通过离心将RNA沉淀物收集并洗涤，最终得到纯化的RNA。
2.硅基膜或硅树脂提取法这是一种使用硅基膜或硅树脂来纯化RNA的高效方法。
在这种方法中，首先通过物理或化学方法破坏细胞膜，然后在硅基膜或硅树脂的表面上固定RNA。
接下来，通过对固定RNA进行洗涤和去除杂质的步骤，最终得到纯化的RNA。
3.列柱纯化法这是一种使用RNA捕获柱或硅膜柱等纯化RNA的方法。
在这种方法中，首先将裂解的细胞滤液加入到柱上，并经过多次洗涤，以去除杂质。
然后，通过改变柱的条件，如pH、盐浓度等，使RNA释放出来并收集。
这种方法具有高纯度、高通量和可自动化的优点。
4.磁珠提取法磁珠提取法是一种快速、高效的RNA提取方法。
在这种方法中，首先将裂解的细胞滤液与具有亲和性RNA结合能力的磁珠混合，并经过洗涤步骤去除杂质。
然后，通过改变磁场的条件，使磁珠内的RNA释放并收集。
这种方法适用于高通量的RNA提取，具有高产率和高纯度。
5.TRIZOL法TRIZOL法是一种常用的综合性RNA提取方法。
在这种方法中，样品中的细胞先与TRIZOL试剂混合，然后加入氯仿使得细胞的核酸沉淀。
接下来，将上清转移至新的离心管中，并加入异丙醇使得RNA沉淀。
最后，通过洗涤和离心将RNA沉淀物收集并纯化。
需要注意的是，不同的RNA提取方法适用于不同类型的样本和实验需求。
选择合适的RNA提取方法对于后续实验的成功与结果的准确性至关重要。
核酸提取与纯化
核酸提取与纯化引言核酸提取与纯化是生物学研究中常用的操作步骤之一。
核酸提取是指从生物样本中分离出DNA或RNA分子，纯化则是指将提取得到的核酸分子除去杂质，获得纯净的核酸样品。
本文将介绍核酸提取与纯化的基本原理、常用方法以及注意事项。
核酸提取原理核酸提取的基本原理是利用生物样本中DNA和RNA分子与其他组分（如蛋白质、细胞壁等）之间的化学或物理性质的差异，将核酸分子从样本中分离出来。
常见的提取方法有有机溶剂法、盐析法和离心法等。
有机溶剂法有机溶剂法是一种常用的核酸提取方法。
其原理是利用有机溶剂（如酚-氯仿混合液）与生物样本中的其他组分之间的亲和性差异，将核酸分子从样本中提取出来。
这种方法操作简单，适用于提取DNA和RNA。
具体操作步骤如下：1.准备生物样本，如细胞培养物或组织样本。
2.加入细胞裂解缓冲液，破坏细胞膜、核膜等结构，释放核酸分子。
3.加入酚-氯仿混合液，与细胞裂解液混合，形成两相体系。
4.离心分离两相，核酸分子会在有机相中分配到有机相中，而其他杂质会在水相中。
5.取出有机相，加入异丙醇或乙醇等沉淀剂，沉淀核酸分子。
6.离心沉淀，弃去上清液。
7.用乙醇洗涤沉淀，去除残留的盐和有机溶剂。
8.干燥沉淀，加入适量的去离子水溶解核酸。
盐析法盐析法是利用核酸分子与盐溶液中的离子交互作用的原理进行分离。
该方法适用于高含量的核酸样本（如DNA或RNA）。
其操作步骤如下：1.准备生物样本，如细胞裂解液。
2.加入适量的盐溶液，使盐浓度达到一定程度。
3.离心分离沉淀，核酸分子会与高浓度盐溶液结合形成沉淀，而其他杂质会在上清液中。
4.取出沉淀，用盐溶液洗涤核酸，去除杂质。
5.干燥沉淀，加入适量的去离子水溶解核酸。
离心法离心法是一种快速分离核酸的方法。
其原理是利用离心力将核酸分子从样本中沉淀下来。
离心法适用于小样本量和快速提取的情况。
具体步骤如下：1.准备生物样本，如细胞裂解液。
2.加入高盐缓冲液，增加核酸与其他组分之间的亲和性差异。
RNA提取的原理与方法
RNA提取的原理与方法1.细胞破碎：首先需要使细胞破碎，使RNA暴露在细胞外部。
这可以通过物理方法（如振荡器、超声波处理）或化学方法（如细胞裂解缓冲液的使用）来实现。
2. RNA稳定性保护：细胞破碎后，RNA容易被内源性核酸酶降解，因此需要加入RNase抑制剂来保护RNA的完整性。
3.蛋白质沉淀：为了去除DNA和蛋白质，可以加入蛋白酶K或其他蛋白质沉淀剂，如氯酸酚、酚/氯仿等，将蛋白质沉淀下来。
4.RNA纯化：在RNA与其他杂质分子被蛋白酶沉淀下来后，可以通过酚/氯仿法、硅胶膜法、离心柱法等方法纯化RNA。
其中最常用的方法是酚/氯仿法，利用RNA在酚相上溶解度较高、而DNA和蛋白质在水相上溶解度较高的差异来实现RNA的纯化。
5.RNA沉淀：将纯化后的RNA通过加入适量的醋酸乙酯或异丙醇进行沉淀，将RNA沉淀下来。
6. RNA溶解：将RNA沉淀物重悬于适当的缓冲液中，如RNase-free水或核酸稀释缓冲液。
1.酚/氯仿法：酚/氯仿法是一种经典的RNA提取方法，通过利用RNA、DNA和蛋白质在酚相和水相之间的差异来分离纯化RNA。
该方法简单易行，适用于大多数生物样本。
2.硅胶膜法：硅胶膜法是一种基于RNA与硅胶膜之间的亲和性质，将RNA结合在硅胶膜上，通过洗脱来纯化RNA。
该方法适用于RNA的小样本量提取，纯化效果较好，但操作较为复杂。
3.离心柱法：离心柱法是一种快速、方便的RNA提取方法，它基于在离心柱内含有离心柱膜，通过对样品进行破碎和混合，RNA能够在膜上固定，去除DNA和蛋白质等杂质。
该方法适用于多样本高通量分析。
4.磁珠法：磁珠法利用了具有特定亲和性的磁珠与RNA的结合来纯化RNA。
该方法高度自动化，适用于高通量分析，但对特定仪器设备的需求较高。
在进行RNA提取时，需要注意以下几点：1.细胞破碎后，尽快进行RNA提取，以避免RNA的降解。
2. 使用无RNase的试剂和消毒工具，以防止RNase的污染。
RNA的提取方法
RNA的提取方法RNA提取是生物学中一项非常重要的实验技术，它可以用于研究RNA在生物体内的表达以及功能调控。
RNA提取的方法有多种，下面将介绍一些常用的RNA提取方法。
1.总RNA提取：总RNA提取是最常用的RNA提取方法之一，它可以提取细胞或组织中的所有RNA种类，包括mRNA、rRNA和tRNA等。
总RNA提取的步骤包括细胞或组织的裂解、蛋白酶处理、RNA溶液的提取和纯化等。
提取时可以使用商业化的总RNA提取试剂盒，也可以自制试剂进行提取。
2.mRNA提取：mRNA是总RNA中占比相对较小的一部分，它包含了大部分的转录信息。
mRNA的提取主要是通过使用寡聚dT寡核苷酸的亲和浸润材料，富集含有poly(A)尾的RNA分子。
提取步骤包括细胞裂解、磁珠富集和纯化等。
3. miRNA提取：miRNA是一类长度较短的非编码RNA，具有多种生物学功能。
miRNA的提取相对较为复杂，步骤包括细胞裂解、蛋白酶处理、有机溶剂萃取、硅胶膜纯化和乙酸乙酯沉淀等。
商业化的miRNA提取试剂盒则简化了这一过程。
4.胚胎RNA提取：胚胎RNA提取主要适用于研究早期胚胎发育过程中的基因表达变化。
提取步骤包括选择合适的胚胎发育阶段、胚胎裂解、RNA的提取和纯化等。
在这个过程中，需要注意减少RNA的降解，因为胚胎RNA含有RNA酶。
5.组织RNA提取：组织RNA提取是为了研究不同组织中特定基因的表达差异。
提取组织RNA的步骤包括组织的裂解、蛋白酶处理、RNA的提取和纯化等。
组织RNA的含量通常较少，需要采取额外的措施来提高RNA的得率。
6.体液RNA提取：体液RNA的提取用于研究循环系统或分泌系统中的RNA信息。
体液RNA的提取步骤包括样本的离心、细胞裂解、RNA的提取和纯化等。
一般情况下，体液RNA的浓度较低，因此需要使用高敏感的RNA提取方法。
总的来说，RNA提取是RNA研究的基础，根据不同的研究目的和样本类型选择合适的RNA提取方法非常重要。
纯化rna的原理
纯化rna的原理纯化RNA是一种用于分离和纯化RNA分子的实验技术。
其原理主要基于RNA分子与其他组分（如DNA、蛋白质等）的不同化学或物理特性，通过选择性地去除杂质，从而获得高纯度的RNA样品。
以下是常用的纯化RNA的方法及其原理：1. 次氯酸盐氰胺纤维素柱（CTAB）法：该方法适用于从植物或真菌中纯化RNA。
次氯酸盐（如氯胺T）可以沉淀DNA，而胞外多糖（如CTAB）可以结合蛋白质，从而从混合物中去除这些杂质。
接下来，使用异丙醇或氯仿等有机溶剂使RNA 溶解，然后通过醇沉淀法浓缩纯化RNA。
2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳法：该方法利用RNA分子在电场中的迁移速度差异，将RNA分子从其他分子中分离出来。
首先，将RNA样品经过选择性沉淀或纯化步骤，使其成为单一的RNA分子。
然后将RNA样品加载到聚丙烯酰胺凝胶电泳胶槽中，经过电泳过程，RNA分子根据其长度和电荷迁移至不同的位置，从而实现分离和纯化。
3. 超滤法：该方法利用纳滤膜的孔径大小选择性地分离RNA 分子。
在超滤过程中，将混合物通过纳滤膜，小分子及水分子通过膜孔，而大分子如RNA则被滞留在膜上。
通过该方法，可以快速分离和浓缩RNA样品。
4. 碱性酚/氯仿提取法：该方法是分离RNA和DNA的经典方法之一。
在碱性条件下，RNA分子会被水解成碱性核酸盐（如RNA酸盐），而DNA分子则稳定存在。
随后，将膏状混合物经氯仿提取，使RNA分子溶解在水相，而DNA则溶解在有机相中。
进一步利用醇沉淀法可将RNA分子从水相中纯化出来。
5. 商业化RNA纯化试剂盒：目前市场上有多种商业化RNA纯化试剂盒可供选择。
这些试剂盒利用多种技术，如硅胶柱层析、磁珠吸附和离心膜等，以实现RNA的选择性富集和纯化。
综上所述，通过以上不同的方法，可以根据实验需求和样品类型选择适合的纯化RNA方法，以获得高质量和纯度的RNA。
提取rna有哪些方法
提取rna有哪些方法
提取RNA的方法有以下几种：
1. 酚/氯仿提取法：加入酚溶液和氯仿，使细胞裂解，并使RNA萃取至有机相中。
然后使用异丙醇和盐沉淀RNA，最后用乙醇洗涤和脱水。
2. 链霉亲和纯化法：利用链霉素结合特定序列（例如poly A序列）的能力，通过链霉素磁珠或石蜡树脂来纯化多聚A尾的mRNA。
3. 柱层析法：使用离子交换柱、凝胶层析柱或亲和层析柱（例如，根据RNA与硅胶柱或根据RNA酶的抗体选择性地结合）来分离和纯化RNA。
4. 总RNA提取法：将细胞或组织裂解，使用一种提取试剂（如TRIzol试剂）来提取总RNA。
总RNA中包含mRNA、rRNA和tRNA等各种类型的RNA。
5. 过滤提取法：通过使用尺寸排除膜或滤波器来去除细胞碎片和DNA，然后使用过滤盘或纤维膜纯化RNA。
需要根据实验需求和样品性质选择适合的RNA提取方法。
rna纯化方法及原理
rna纯化方法及原理RNA纯化是分离和提纯RNA分子的过程，常用于RNA的后续研究和应用。
本文将介绍几种常见的RNA纯化方法及其原理。
一、酚-氯仿法酚-氯仿法是一种经典的RNA纯化方法，其原理基于RNA在酚相中溶解度较低，而在氯仿相中溶解度较高的特点。
该方法主要包括细胞破碎、酚相和氯仿相的提取、RNA的沉淀和洗涤等步骤。
将待纯化的细胞破碎，释放出细胞内的RNA分子。
然后，将酚溶液加入细胞裂解液中，混合均匀。
酚与细胞裂解液中的蛋白质结合形成上层的酚相，而RNA则溶解在下层的水相中。
接着，加入等体积的氯仿，形成两层相。
RNA会从水相转移到氯仿相中。
通过离心，将RNA富集在上层的氯仿相中。
然后，将RNA沉淀下来，用乙醇洗涤去除杂质。
最后，将RNA溶解在适当的缓冲液中，即可得到纯化的RNA。
酚-氯仿法是一种简单有效的RNA纯化方法，适用于大量样品的处理，但存在RNA降解的风险。
二、硅胶柱法硅胶柱法是一种基于RNA与硅胶之间的亲和性纯化方法。
硅胶柱具有较大的比表面积和亲和力，可将RNA分子捕获在柱子上，而其他杂质则通过洗涤缓冲液的洗脱。
将待纯化的RNA样品与硅胶柱上的RNA结合缓冲液混合，使RNA与硅胶结合。
然后，将混合物加载到硅胶柱中，RNA会与硅胶发生亲和作用，结合在柱子上。
接着，通过洗脱缓冲液的洗涤，去除非特异性结合的杂质。
最后，使用洗脱缓冲液将纯化的RNA 从硅胶柱上洗脱下来。
硅胶柱法具有选择性好、纯化效果较好的优点，适用于小样本和高质量RNA的纯化，但操作较为繁琐。
三、磁珠法磁珠法是一种基于磁性珠子的RNA纯化方法。
磁性珠子表面修饰有亲和基团，可与RNA发生特异性结合，将RNA富集在磁珠上，然后通过外加磁场将磁珠与RNA分离。
将待纯化的RNA样品与磁珠上的亲和基团发生特异性结合。
然后，通过外加磁场，将磁珠与结合的RNA分离出来，形成磁珠-RNA复合物。
接着，用洗涤缓冲液洗脱非特异性结合的杂质。
最后，去除磁场，将纯化的RNA从磁珠上洗脱下来。
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三、质粒DNA的制备
(一）、碱裂解法 将细菌悬浮于高pH的阴离子洗涤剂中，细胞壁会破 裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清液 中。碱性溶液使碱基配对完全破坏，但是闭环质粒DNA 双链不会彼此分离，在拓扑学上是相互缠绕的，pH恢复 到中性时DNA双链就会再次形成。 在裂解过程中，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性 的染色体DNA相互缠绕成大型复合物，被SDS包盖。当K＋ 取代Na＋时这些复合物会从溶液中沉淀下来。离心后就 可以从上清液中回收质粒DNA。 12
分子生物学研究技术
柴团耀 中国科学院研究生院 tychai@ 88256343
1
第一章 分子克隆的工具酶和载体
2
第四节 质粒DNA的提取和纯化
3
从细菌中提纯质粒DNA有多种方法， 但是都包含以下3个步骤： 1）细菌培养物的生长。 2）细菌的收获和裂解。 3）质粒DNA的纯化。
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5）
所有方法只要略加修改，可适用于从1ml～1L 范围内的细菌培养物。它们都可以成功地应用 于从少量、大量和中等量的培养物中分离质粒 DNA。除以上3）所述情况之外，任何一种方法 都可适用于任何一种大肠杆菌菌株及任意量的 培养物。
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三、质粒DNA的制备
菌体经过收获后可用下列方法制备质粒： ☺碱裂解法 ☺煮沸法
4
一、细菌培养物的生长
从琼脂平板上桃取一个单菌落，接种 到培养物中（在含有适当抗生素的液体培养基中生 长），然后从中纯化质粒。
小量制备：单菌落接种到少量培养基中（常用3mL）培
养至对数生长后期（一般过夜），部分培养物用于小量 制备质粒。
大量制备：取上述过夜培养物作为大量培养的接种物，
扩大培养。培养时间和生长情况主要依赖于质粒DNA的 拷贝数以及其复制是松弛型或严紧型。
只以中等拷贝数进行复制的质粒，有必要通过扩增来提高质粒的 产量。新一代的质粒（如pΜC质粒）可复制达到很高的拷贝数， 因此无需扩增。但用氯霉素进行处理，具有抑制细菌复制的优 点，可减少细菌裂解物的体积和粘稠度，简化质粒纯化的过程.) 25
（二）细菌的收获和裂解 1、收获
1）于4℃以4000转/分(大转头），离心15分钟，弃上 清，敞开离心管口并倒置离心管使上清全部流尽。 2）将细菌沉淀重悬于100ml用冰预冷的STE中。 STE 0.1mol／L NaCl 10mmol／L Tris·Cl （pH8.0） 1mmol／L EDTA（pH8.0） 3）按步骤1）所述方法离心，以收集细菌细胞。
17
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（二）煮沸裂解法
把细菌悬浮于含有Triton X－100、溶菌 酶（消化细胞壁）的缓冲液中，然后加热到100 度，使其裂解。加热破坏了细胞壁，还有助于解 开DNA链的碱基对，并使蛋白质和染色体DNA变性。 但是闭环质粒DNA虽配对破坏，可是链彼此不会 分离，当温度下降恢复成超螺旋。离心除去变性 的染色体DNA和蛋白质，从上清液中回收质粒DNA。 （对小质粒很有效）
Tris·Cl（pH8.0）配制，振荡3秒钟以混匀之。如果溶 液的pH低于8.0，溶菌酶就不能有效发挥作用。 3）将离心管放入煮沸的水浴中，时间恰为40秒。 4）用微量离心机于室温以12000g离心10分钟。 5）用无菌牙签从微量离心管中去除细菌碎片。 6）在上清中加入40μl 5mol／L乙酸钠（pH5.2）和 420μl异丙醇，振荡混匀，于室温放置5分钟。 7）于4℃以12000g离心5分钟，回收核酸沉淀。 8）小心吸去上清液，将离心管倒置于一张纸巾上，以使 所有液体流出。再将附于管壁的液滴除尽。
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四、质粒DNA的大量制备
（一）在丰富培养基中扩增质粒
普遍认为在氯霉素存在下扩增质粒只对 生长在基本培养基上的细菌有效，然而在带有 pMB1或ColE1复制子的高拷贝数质粒的大肠杆 菌菌株中，用LB和Terrific肉汤培养基也可提 高产量至每500ml培养物2～5mg质粒DNA，而且 重复性也很好。
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方法Ⅱ：离子交换层析
1）用巴斯德吸管填装一支1ml体积的Dowex AG50柱，使 用之前，Dowex AG50树脂应按以下方法进行平衡：
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2）去掉树脂上的缓冲液，用2倍体积的TE （pH 8.0）洗柱，将含溴化乙锭和CsCl的DNA直 接加到树脂上。 3）立即开始从层析柱中收集流出物，当所有DNA 溶液进入柱子后，用1.2倍柱床体积的TE（PH8.0） 洗脱，同时继续收集流出物。 4）层析柱流干以后，用2倍体积的水稀释合并的 流出物。 5）用乙醇（6倍于合并流出物的原体积）于4℃沉 淀DNA l5分钟，于4℃以12000转／分离心15分钟 收集DNA。
3）加150μl用冰预冷的溶液Ⅲ 溶液Ⅲ： 5mol／L乙酸钾 60ml 冰乙酸 11.5ml 水 28.5ml 所配成的溶液对钾是3mol／L，对乙酸根是5mol／L。 盖紧管口，温和地振荡10秒钟使溶液Ⅲ在粘稠的细 菌裂解物中分散均匀，之后将管置于冰上3～5分钟。 4）用微量离心机于4℃以12000g离心5分钟，将上清转移 到另一离心管中。 5）可做可不做：加等量酚：氯仿，振荡混匀，用微量离 心机于4℃以12000g离心2分钟，将上清转移到另一离心 管中。（有些人认为不必用酚：氯仿进行抽提，然而由 于一些未知的原因，省略这一步．往往会得到可耐受限 制酶切反应的DNA。） 16
8
3）一些菌株（如HB101的一些变种和衍生株）用去污剂或 加热裂解时可释放相对大量的糖类，随后用氯化铯－ 溴化乙锭梯度平衡离心进行质粒纯化时会有麻烦。糖 类会在梯度中紧靠超螺旋质粒DNA所占位置形成一致 密的、模糊的区带，造成质粒DNA内污染有糖类，而 糖类可抑制多种限制酶的活性。这些菌株中大量制备 质粒时，不宜使用煮沸法。 4）从表达内切核酸酶A的大肠杆菌菌株（endA+株．如 HB101）中小量制备质粒时，不要用煮沸法。煮沸不 能完全灭活内切核酸酶A，以后在Mg2+存在下温育（如 用限制酶消化）时，质粒DNA会被降解。通过一个附 加步骤（用酚：氯仿进行抽提）可以避免此问题
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6）用以下任意一种方法从DNA溶液中去除CsCl： ☺ 通过微量浓缩器（Amicon）进行旋转透析，对 TE（pH8.0）透析24～48小时，并换液数次； ☺ 用3倍体积水进行稀释并于4℃用2倍体积乙醇 （即终体积相当于原未稀释体积的6倍）沉淀DNA l5分钟，再于4℃以10000g离心15分钟，将沉淀 的DNA溶于约1ml TE（pH8.0）中。 如果将DNA的乙醇溶液置于-20℃，CsCl会沉淀。 7）测定DNA终溶液的OD260值，计算DNA的浓度，将 DNA分成小份贮存于-20℃。
• 表1.4
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小量制备质粒DNA
1．收获
1）将3ml含相应抗生素的LB加入到容量为15ml并通气良 好（不盖紧）的试管中，然后接入一单菌落，于37℃剧 烈振摇下培养过夜。 2）将1.5ml培养物倒入微量离心管中，用微量离心机 于4℃以12000g离心30秒，将剩余的培养物贮存于4℃。 3）吸去培养液，使细菌沉淀尽可能干燥。
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（三）从经过纯化的质粒DNA中去除溴 化乙锭
下面两种方法对于从经过氯化铯－溴化乙 锭梯度平衡离心纯化的DNA中去除溴化乙锭都 同样奏效。 ☻小心：溴化乙锭是一种强诱变剂，
并有中度毒性。
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方法I：有机溶剂抽提
1）将DNA溶液放入玻璃或塑料管中，加等体积的 水饱和1－丁醇或异戊醇。 2）振荡混匀两相。 3）用台式离心机于室温以1500转／分 离心3分钟。 4）用巴斯德吸管将下层水相移至一干净的玻璃或 塑料管内。 5）反复抽提（步骤1-4）4～6次直到粉红色从水 相和有机相中均消失。
现在用的质粒复制量大，小量制备质粒就可以满 足完成一系列工作。如：限制酶图谱绘制、细菌转化、 特定DNA片断的分离，常规亚克隆及放射性标记探针的 制备等。所以，很少大量制备并纯化质粒DNA。
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质粒DNA的纯化
1.聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA 2.氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA 3.从经过纯化的质粒DNA中去除溴化乙锭 方法：1.有机溶剂抽提 2.离子交换层析 4.从质粒DNA制品中去除RNA
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9）加1ml 70％乙醇，于4℃以12000g离心2分钟。 10）按步骤8）所述再次轻轻地吸去上清，这一步操作要 格外小心，因为有时沉淀块贴壁不紧，去除管壁上形成 的所有乙醇液滴，打开管口，放于室温直至乙醇挥发殆 尽，管内无可见的液体（2～5分钟）。 11）用50μl含无DNA酶的胰RNA酶（20 μ g／ml）的TE （pH8.0）溶解核酸，稍加振荡，贮存于-20℃。
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2.煮沸裂解
1）将细菌沉淀（收获细菌的步骤3所得）重悬于350μl STET中。 STET： 0.1mol／L NaCl 10mmol／L Tris·Cl（pH8.0） 1mmol／L EDTA（pH8.0） 5％Triton X－100
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2）加25μl新配制的溶菌酶溶液10mg／ml、用10mmol／L
2）小质粒可用更剧烈的方法来分离。在加入EDTA后，有 时还在加入溶菌酶后让细菌暴露于去污剂，通过煮沸 或碱处理使之裂解。破坏碱基配对，可使宿主的线状 染色体DNA变性，但闭环质粒DNA链由于处于拓扑缠绕 状态而不能彼此分开。条件恢复正常时，质粒DNA链 迅速得到准确配置，重新形成完全天然的超螺旋分子。
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2、裂解
1）.煮沸裂解法： 2）.碱裂解法： 3）.SDS裂解法：产量低，适用于大质粒 (不用NaOH，改用高浓度Nacl，酚：氯仿抽提）
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五、质粒DNA的纯化
（一）原理： ☺质粒DNA相对较小； ☺共价闭合环状。
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（二）方法（略）
1.氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心； 2.聚乙二醇分级沉淀； 3.离子交换层析； 4.凝胶过滤层析。 其中，前两种方法常用。
6）用2倍体积的乙醇于室温沉淀双链DNA。振荡混合，于 室温放置2分钟。 7）用微量离心机于4℃以12000g离心5分钟。 8）小心吸去上清液，将离心管倒置于一张纸巾上，以使 所有液体流出。再将附于管壁的液滴除尽。 9）用1ml 70％乙醇于4℃洗涤双链DNA沉淀，去掉上清， 在空气中使核酸沉淀干燥10分钟。 10）用50μl含无DNA的胰RNA酶（20μ g／ml）的TE重新 溶解核酸，振荡，贮存于 -20℃。