Trizol法提RNA步骤
Trizol_法提取细菌RNA的实验步骤
Trizol 法提取RNA实验步骤需要的试剂：氯仿异丙醇75%乙醇（in DEPC-treated water)RNase free水或者0.5% SDS溶液[准备不含RNase的水，将其装入不含RNase的玻璃瓶中，加入diethylpyrocarbonate (DEPC是为了减少RNase 的降解) to 0.01% (v/v)。
静置过夜，然后高压灭菌。
0.5% SDS溶液必须用DEPC预处理、高压灭菌的水]1、组织匀浆(1) 取出高温高压消毒后研钵，切取50-100mg冰冻组织置于研钵内，倒入液氮，研碎。
(2) 每50-100mg均浆组织标本中加入1ml的TRIZOL，标本的量不能超过TRIZOL体积的10%，否则会出现DNA污染。
(3) 将以上匀浆标本转移到1.5ml的EP管中，在15- 30°C放置5分钟，以彻底分离核蛋白复合体。
2、相分离加入0.2 ml的氯仿，加盖好后用手剧烈摇晃15秒，在15- 30°C放置2-3分钟，然后离心12,000× g，15 minutes ，2 - 8°C。
离心后分成三层，下面的红色为酚-氯仿相，一个中间层，一面是无色的水相。
RNA 只存在于水相中。
水相占总TRIZOL的60%。
3、RNA沉淀将上层水相转移到另一干净的EP管中，加入0.5ml异丙醇，静置10 minutes ，15 -30°C，然后离心12,000 rpm ，10 minutes，2 - 8°C。
离心前可以在管的侧壁和底部看到絮状胶样沉淀，这就是RNA沉淀。
4、RNA洗涤去上清，加入1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀，振荡器混匀，离心7,500 × g ，5 minutes，2 -8°C。
5、RNA再溶解去上清，置真空或空气中5-10分钟，干燥RNA沉淀，（不能在真空中离心干燥）。
注意不能将RNA沉淀完全干燥，这样会极大地降低它的溶解度。
TRIZOL试剂提取细胞RNA和蛋白步骤
TRIZOL试剂提取细胞RNA和蛋白步骤
1. 0.3-0.4 ml Trizol 加入每个6 cm皿，刮取细胞到离心管中，静置5-10分钟。
2. 加入0.1 ml氯仿，震荡，静置10分钟，4度13000 rpm 离心15分钟。
3. 取上清用于提取RNA，下层用于提取蛋白。
上清的处理(RNA)：
1、上清打入新的RNase free离心管，加等量异丙醇，震荡，静置10分钟。
2、4度12000 g离心15分钟，弃去上清（倒掉，枪头在管口吸），沉淀为RNA。
3、加入1 ml 75% 乙醇（现配，用DEPC水稀释无水乙醇）洗涤沉淀。
4、4度12000g 离心5分钟，弃去上清（倒掉，枪头在管口吸），管口倒置，在卫生纸上，晾干15分钟。
5、加入20微升DEPC水溶解沉淀，微量分光光度计测质量。
下层的处理(蛋白)：
1、把中层吸掉，下层液加200微升无水乙醇混匀，静置5分钟，4度5500rpm离心10分钟，取上清移入新的离心管。
2、往新的离心管液体里加入1毫升异丙醇，充分混匀，室温静置10分钟，4度13000rpm 离心10分钟，弃上清。
3、加入1毫升0.3 mol/L 95%乙醇盐酸胍溶液，室温静置20分钟，4度13000rpm离心10分钟，弃上清。
4、重复步骤3 2次
5、加入1毫升无水乙醇，室温静置20分钟，4度13000rpm离心10分钟，弃上清。
6、室温干燥15分钟，用现配1% sds溶液溶解蛋白，不溶物以4度12000rpm离心10分钟去除。
7、上清液与5x loading buffer混匀，煮沸10分钟，存于-20度冰箱待用。
RNA提取方法、
总RNA的提取方法（Trizol）
1、取1g植物材料，倒入液氮剧烈研磨，成粉（研磨成粉称重，无液氮时继续添加），转入离心管中，加入1ml Trizol混匀（除DNA）。
2、室温放置5min。
3、加200ul氯仿（1ml Trizol+0.2ml氯仿目的：除酚）剧烈震荡15s，室温放置3min（时间的控制）。
4、12000rpm，4℃,15min，取上层水相，大约600ul，下层有机相弃去。
5、加异丙醇（-20℃）混匀，室温放置10min（1ml Trizol+500ul异丙醇，目的：除盐，若盐少，可用无水乙醇）
6、12000rmp，4℃,10min，弃上清，RNA在管底和管壁形成胶状沉淀。
7、加1ml75﹪乙醇洗涤沉淀（用枪头吹打）低速离心5min，弃上清，4℃，,7500rmp，一般为7000rmp。
8、室温放置，晾干5至10min（不要过干，否则RNA难溶，另外，乙醇残留时会对RNA逆转录酶抑制）。
9、加25-30ulDEPC水，可用枪头吹打帮助溶解。
①看到沉淀时加30-50ulDEPC 水；②看不到沉淀时加20-25ulDEPC水。
注意事项：
1、DNA制备所需的水、溶液，都必须用DEPC 37℃预处理。
2、操作过程中要用到的Eppenolorf管，枪头必须经DEPC处理
3、玻璃器皿需高温干热（200℃）灭菌2-3h。
4、塑料制品和电泳槽等需要0.5mol/L的NaoH处理1-2h，然后用无菌水漂洗干净。
5、操作台和枪先用氯仿擦一遍。
6、操作中常换一次性手套，手是主要的污染源。
7、戴口罩，避免口中的RNA酶污染。
trizol组织提取rna步骤
trizol组织提取rna步骤Trizol组织提取RNA步骤引言：RNA是一种重要的生物大分子，它在生物体内起着基因表达和调控的重要作用。
为了研究RNA的结构和功能，科学家们经过不断的探索和研究，发展出了一系列有效的RNA提取方法。
其中，Trizol 组织提取RNA方法是目前应用较广泛的一种方法，本文将详细介绍Trizol组织提取RNA的步骤。
步骤一：样品准备需要准备好待提取RNA的组织样品。
样品可以是动植物组织，也可以是细胞。
样品应该新鲜、完整，并且需要在提取RNA前保存在液氮中，以保持RNA的完整性。
步骤二：组织破碎将样品从液氮中取出，放入细胞破碎液中。
细胞破碎液可以是Trizol试剂，也可以是其他适用的细胞破碎液。
然后，使用离心机将样品离心，以破碎组织细胞，并释放RNA。
步骤三：加入氯仿将破碎的组织样品转移到离心管中，加入适量的氯仿。
氯仿可以与Trizol试剂中的异丙醇和酚形成两相体系，用于分离RNA。
步骤四：离心分离将离心管盖紧，并放入离心机中进行高速离心。
离心的目的是将样品中的RNA分离到上清液中，底物中会残留DNA和蛋白质。
步骤五：收集上清液将离心管从离心机中取出，小心地将上清液转移到一个新的离心管中。
上清液中含有RNA，可以继续进行后续的提取。
步骤六：沉淀RNA向上清液中加入等体积的异丙醇，使其浓度达到70%。
然后，轻轻地摇晃离心管，使RNA与异丙醇充分混合。
接下来，将混合液放置在-20°C的冰箱中，使RNA沉淀。
步骤七：离心沉淀将离心管放入高速离心机中，进行高速离心。
离心的目的是使RNA 沉淀到离心管底部。
步骤八：去除上清液小心地将上清液倒出，注意不要损坏沉淀的RNA。
可以使用70%乙醇进行洗涤，以去除残留的盐和污染物。
步骤九：干燥RNA将离心管中的RNA沉淀放置在室温下，使其自然干燥。
注意不要过度干燥，以免影响RNA的质量。
步骤十：溶解RNA在干燥的RNA沉淀中加入适量的去离子水或RNase-free水，轻轻摇晃或振荡离心管，使RNA溶解。
RNA提取步骤trizol法
Trizol-RNA提取步骤
1；取1.5ml去核酸酶EP管，分别加入250ul样品和750Trizol裂解液剧烈震荡30S，室温静置10min。
；
2；直接往EP管中再加入200ul三氯甲烷（氯仿），剧烈震荡混匀30S 直至无分相出现，室温静置5min。
3；把样品放入事先预冷的离心机中，12000rpm,4℃离心15Min。
小心将样品取出。
4；另取干净的去核酸酶EP管，分别往EP管中加入600ul异丙醇。
将离心完后的样品管中的上清液（约600ul左右）小心转移到装有异丙醇的管子中并轻轻上下颠倒混匀，4℃静置10min.（注意：吸取上清液时严禁吸到中间蛋白层或下层液。
）
5；将样品放入预冷的离心机中12000rpm,4℃离心10Min.小心把样品管取出并轻轻倒掉上清液。
6；往样品管中加入1ml 75%乙醇溶液（DEPC水配制）。
轻轻上下颠倒几次，12000rpm,4℃离心5Min。
小心把样品管取出并轻轻倒掉上清液。
7；把样品放入抽干机中60℃抽干5-7分钟。
（或者尽量把乙醇去除干净后室温晾干10-15min直至乙醇挥发干净）。
此步骤勿关闭管盖。
8；将抽干好的样品取出，并根据需要加入20-50ul DEPC水（或Elution Buffer）溶解沉淀物。
此溶液即为总RNA溶液。
Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)
Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)一、实验步骤1. 涂布区域准备- 确保实验室台面干净整洁，并消毒工作区域。
- 准备所需的试剂和材料，包括Trizol试剂、异丙醇、70%乙醇、无菌乙酸纯水等。
2. 细胞样本处理- 从培养皿中收集所需的细胞样本，注意避免污染。
- 使用无菌PBS缓冲液洗涤细胞，以去除培养基和细胞碎片。
- 加入适量的Trizol试剂至细胞样本中，充分悬浮细胞。
- 注意：为了保护RNA的完整性，在细胞样本处理过程中尽量迅速操作，避免长时间接触Trizol试剂。
3. 提取RNA- 将含有细胞样本和Trizol试剂的混合物转移到无菌离心管中。
- 加入适量的氯仿，摇匀混合，并静置15分钟，使混合物体相分离。
- 低速离心10分钟，将上层的无色透明液体转移到新的无菌离心管中。
4. 分离RNA- 加入等体积的异丙醇，轻轻倾斜离心管，使RNA沉淀形成。
- 低速离心10分钟以沉淀RNA，上清液中通常含有DNA。
- 倒掉上清液，并加入70%乙醇洗涤RNA沉淀，轻轻颠倒离心管以洗涤RNA。
- 低速离心5分钟，倒掉乙醇。
5. 干燥RNA- 用洗涤过的无菌乙酸纯水溶解RNA沉淀，轻轻颠倒离心管以溶解RNA。
- 将溶解的RNA转移至无菌离心管中。
- 在室温或37摄氏度下迅速干燥RNA，避免长时间曝露。
6. 储存RNA- 使用RNase-free水溶解RNA沉淀，测定RNA的浓度和纯度。
- 分配等量的RNA至多个RNase-free离心管中，储存在-80摄氏度的冰箱中。
二、实验原理Trizol法是一种常用于提取RNA的方法，其原理如下：1. 细胞破裂- Trizol试剂能够迅速破坏细胞膜，使细胞释放出RNA。
- Trizol试剂中含有酚和氯仿，酚用于破坏脂质，氯仿用于改变混合物的密度，从而使RNA与其他细胞成分分离。
2. 分离RNA- 经过破裂后，细胞内的DNA、RNA和蛋白质等成分被混合在一起，形成上清液。
总RNA的提取（Trizol法自我总结）
总RNA的提取（Trizol法自我总结）Trizol法提取总RNA（改进的一步法）1.先取1.5ml RNA专用离心管加入1ml Trizol后编号称重；2.研钵清洗干净后用燃烧法燃烧15min左右，然后-20度预冷，在加入植物材料前先加入液氮再次冷冻研钵（同时将药匙预冷），将植物材料50-100mg置于研钵中，加入液氮充分研磨成面粉状，用预冷的药匙小头部位转至1.5ml RNA专用EP管中，立即震荡混匀，裂解5分钟,裂解过程中称重。
注：样品量一定要少于100mg，用药匙的小头加入4次就差不多了；研磨时尽量多加几次液氮，多研磨几次，保证样品研磨得足够细（呈面粉状），不能吸水变潮；研磨加入EP管中后，必须立即摇匀，不能等到样品变潮；用药匙转移样品时，每次少加点，不能将样品粘到管口，加完一个样品后立即用纸擦干净，加下一个样品时药匙必须重新用液氮冷冻。
总之，整个过程中必须保证样品和与样品接触物品的温度足够低，直到样品与Trizol接触为止，以免RNase将RNA降解。
3.离心（4℃，12000×g）10分钟，取上清至一新的EP管中。
4.分相：①加0.2ml的氯仿，用手剧烈摇晃15秒钟，15-30℃静置3分钟；②离心（4℃，12000×g，勿超过12000×g）15分钟。
5.沉淀，并去除多糖：①用200ul的枪取无色相（大约300ul）至一新的EP管中，切勿吸到中间层；②加入等体积异丙醇颠倒混匀（动作缓和），15-30℃静置10min；③离心（4℃，12000×g，勿超过12000×g）10分钟，倾去上清。
6.清洗（2次）：①用200ul的枪吸除多余上清，加1ml冰预冷的75%乙醇，旋涡震荡；②离心（4℃，7500×g）5分钟。
7.用真空泵吸除乙醇，37℃干燥10分钟。
切勿干燥彻底，否则极难溶解。
8.加适量的DEPC?H2O（一般40ul），枪打数次，使沉淀溶解。
RNA提取方法_高等教育-生物学
总RNA的提取（Trizol法提取）在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。
若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。
在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。
1.提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放臵5分钟；3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放臵2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟；4.取上层水相臵于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放臵10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟；5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5分钟，弃上清；6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥；7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。
PCR实验室常用DNA聚合酶有三种：TaKaRa Taq TM，TaKaRa E X Taq TM和Pyrobest TM DNA Polymerase。
TaKaRa Taq TM是一般的DNA聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。
TaKaRa E X Taq TM是具有Proof reading 活性的耐热性DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到T-vector可以用此酶。
Pyrobest TM DNA Polymerase也是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶，其特点是保真性极高，扩增得到的PCR产物为平滑末端。
Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)
Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)RNA提取是一种常用的实验技术，它可以用于研究基因表达、蛋白质合成等方面。
而Trizol法是一种常用的RNA提取方法，下面我将详细介绍该方法的实验步骤及原理。
一、实验材料和设备1. 细胞样本：如洋葱、酵母等植物或动物细胞；2. Trizol试剂盒：包括Trizol reagent、DMEM/F12培养基、异丙醇、氯仿等试剂。
3. 离心机：用于分离细胞和RNA;4. 紫外分光光度计：用于测定RNA的浓度和纯度。
二、实验步骤1. 取适量的细胞样本，加入适量的DMEM/F12培养基中，用离心机离心去除细胞碎片和杂质。
2. 将上清液转移到新的管子中，加入2 mL异丙醇，轻轻摇匀，使其与细胞充分混合。
3. 加入1 mL Trizol reagent,混匀后室温下静置10 min;4. 离心管中液体分为4层，从上往下分别是黄色(含有RNA)、白色(含有蛋白质)、透明(上清液)和红色(含有DNA)。
取出黄色层进行下一步处理。
5. 用吸头将黄色层的RNA吸取到一个新的试管中，加入适量的氯仿，轻轻摇匀。
6. 离心试管，将RNA和氯仿分离。
7. 用吸头将上层的白色RNA溶液吸出一部分，加入等量的异丙醇，混匀后离心。
8. 将上清液倒掉，留下含RNA的沉淀物。
9. 用紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度。
三、实验原理Trizol法提取RNA的原理是利用Trizol reagent中的Trizol和氯仿对细胞进行裂解，使RNA释放出来。
具体来说，Trizol reagent中的Trizol是一种有机溶剂，它能够破坏细胞膜并将细胞内的RNA溶解在水中。
而氯仿则是一种脂溶性溶剂，它能够与RNA结合形成复合物，使得RNA更容易被提取出来。
在实验过程中，首先加入异丙醇的作用是破坏细胞膜，使RNA更容易释放出来。
然后加入Trizol reagent,使其与细胞充分混合并裂解细胞。
RNA提取方法（TRIzol法）
RNA提取方法（TRIzol法）RNA 提取方法（TRIzol法）一、试剂准备1、TROzlo试剂、氯仿、75%乙醇（0.1% DEPC配制）。
2、塑料器皿需用0.1% DEPC 水浸泡。
3、0.1%DEPC水：100ml dd水中加入DEPC0.1ml，充分振荡，37℃孵育12h以上，121℃高压灭菌20min，于4℃保存。
二、操作步骤1、样品处理（1）组织：50-100mg组织中加入1ml TROzlo试剂。
（2）单层细胞：加入TROzlo 试剂1ml/cm2平板。
（3）悬浮细胞：处理前洗涤细胞，以防止RNA降解。
每5-10×105动物、植物或酵母细胞，或1×107细菌加入1 ml TROzlo试剂。
2、将上述样品于15-30℃静置5min，使核蛋白充分解离。
3、加入0.2ml（1 ml TROzlo试剂）氯仿，盖紧盖子，充分剧烈振荡15s并于15-30℃静置2-3min。
4、于2-8℃12000g离心15min。
离心后样品分层，上层水相中含RNA，下层有机相中含蛋白和DNA。
5、取上清，加入0.5ml异丙醇，轻轻混匀，于15-30℃静置10min后，在管底会出现胶状沉淀，即为RNA。
6、于2-8℃12000g离心10min后弃去上清。
7、向沉淀中加入1ml 75%乙醇，轻轻混匀。
8、于2-8℃7500g离心5min后弃上清9、将RNA样品凉干（不要彻底干燥），加入适量DEPC水溶解（可于55-60℃促溶10min）。
三、注意问题1、在加入氯仿之前（第1步），样品能于-60- -70℃保存至少一个月。
2、RNA沉淀（第6步）在75%乙醇中于2-8℃能保存至少一周，于-5- -20℃能保存至少一年。
四、RNA定量RNA（mg/mL）=40×OD260×稀释倍数（n）/1000 RNA纯品OD260/OD280=2.0 五、RNA电泳（1）用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
Trizol法提取总RNA(细胞和组织)
Trizol法提取总RNA
1、①提取组织RNA时，研钵高温高压灭菌，每50-100mg组织液氮研磨后，将粉末用液氮预冷的药匙转移至预先装有1ml Trizol的EP管中，充分混匀（粉末总体积不能超过Trizol体积的10%）用1ml Trizol 试剂裂解；
②提取细胞RNA时，每5-10×106个细胞用1ml Trizol裂解，反复吹打或剧烈振荡；
2、将上述裂解液，室温15-30℃静置5min；
3、每1ml Trizol加入0.2ml氯仿，在手中用力振荡15s，室温放置2-3min后，12000r离心15min（2-8℃）；
4、取上层水相置于新EP管中，按照每1ml Trizol加入0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，室温放置10min，12000r离心10min（2-8℃），弃上清；
5、向沉淀中按每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇（4℃），涡旋混合，进行洗涤，7500r离心5min（2-8℃）,弃上清；
6、将RNA沉淀在室温下自然干燥（5-10min）；
7、用30μl RNase-free water溶解RNA沉淀；
8、取出1μl，稀释10倍，测定RNA浓度并记录；
9、进行反转录或分装保存于-80℃。
Trizol法提取组织总RNA步骤
1.研磨制样：先向研钵中加入少量液氮，等液氮挥发使研钵预冷。
再向研钵内倒入适量液氮。
从-70度冰箱取出组织，用镊子从冻存管中夹取一小块放入研钵中。
迅速研磨组织块，成粉末时加入1ml的trizol，继续研磨，可看到粉末成浆，由浓变稀，直至组织样全部溶解，用移液枪吸到无酶EP管。
2. Trizol法提取RNA
1) 室温静置3-10min，使蛋白质变性；
2) 加入1/4~1/5体积的氯仿，颠倒震荡1min，室温静置3-5min，静置分层，然后4℃离心，12000rpm，5min。
（核蛋白复合体彻底裂解）
3) 吸取上清至无酶的EP管中，加入等体积的酚：氯仿，颠倒震荡1min，室温静置3-5min，静置分层，然后4℃离心，12000rpm，5min，取上清。
若是细胞RNA提取可只加等体积氯仿抽提一次，但对于组织一般都要重复该步骤，至没有蛋白层为止，一般抽提两次。
（离心后会分为三次：上层：水相，中间层：DNA，下层：蛋白。
为了降低水相和有机相分界处DNA污染，不要吸取水相的最下层）4) 加入等体积的预冷的异丙醇，颠倒混匀，冰上静置30min，然后4℃离心12000rpm，30min，弃上清。
（此步骤主要是充分沉淀RNA，然后收集。
故步骤中的冰置30min,也可以是在-20°放置半小时以上，甚至过夜）
5) 加入100ul 70%乙醇，将沉淀吹起来，注意不要吹散，然后4℃12000rpm，5min。
6) 弃上清，空气中挥发乙醇，至壁上无液滴。
7) 加入适量DEPC水，（一般为20ul）溶解。
8) 分光光度计检测RNA浓度和OD值，将Total RNA稀释至1ug/ul，备用。
Trizol法提取RNA
Trizol 法提取RNA实验步骤一、需要的试剂：1.氯仿2.异丙醇3.75%乙醇（in DEPC-treated water)4.RNase free水或者0.5% SDS溶液[准备不含RNase的水，将其装入不含RNase的玻璃瓶中，加入diethylpyrocarbonate (DEPC) to 0.01% (v/v)。
静置过夜，然后高压灭菌。
0.5% SDS溶液必须用DEPC预处理、高压灭菌的水]1、组织匀浆(1) 取出高温高压消毒后研钵，切取50-100mg冰冻组织置于研钵内，倒入液氮，研碎。
(2) 每50-100mg均浆组织标本中加入1ml的TRIZOL，标本的量不能超过TRIZOL体积的10%，否则会出现DNA污染。
(3) 将以上匀浆标本转移到1.5ml的EP管中，在15- 30°C放置5分钟，以彻底分离核蛋白复合体。
2、相分离加入0.2 ml的氯仿，加盖好后用手剧烈摇晃15秒，在15- 30°C放置2-3分钟，然后离心12,000×g，15 minutes ，2 - 8°C。
离心后分成三层，下面的红色为酚-氯仿相，一个中间层，一面是无色的水相。
RNA只存在于水相中。
水相占总TRIZOL的60%。
3、RNA沉淀将上层水相转移到另一干净的EP管中，加入0.5ml异丙醇，静置10 minutes ，15 -30°C，然后离心12,000 ×g ，10 minutes，2 - 8°C。
离心前可以在管的侧壁和底部看到絮状胶样沉淀，这就是RNA沉淀。
4、RNA洗涤去上清，加入1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀，振荡器混匀，离心7,500 ×g ，5 minutes，2 -8°C。
5、RNA再溶解去上清，置真空或空气中5-10分钟，干燥RNA沉淀，（不能在真空中离心干燥）。
注意不能将RNA沉淀完全干燥，这样会极大地降低它的溶解度。
trizol提取rna的方法
trizol提取rna的方法Trizol提取RNA的方法RNA是生物体内重要的核酸之一，其在基因表达、蛋白质合成等生物过程中起着重要的作用。
而Trizol是一种广泛应用于RNA提取的试剂，其提取RNA的方法简单、快速、高效。
下面将介绍Trizol提取RNA的方法。
1. 样品的准备首先需要准备好需要提取RNA的样品，可以是细胞、组织、血液等。
对于细胞和组织样品，需要先用PBS等缓冲液洗涤去除杂质，然后用RNase-free水洗涤，最后用组织匀浆器或超声波破碎仪将样品破碎。
2. Trizol的添加将破碎后的样品加入Trizol试剂中，按照样品量与试剂量的比例加入。
一般来说，每1ml Trizol试剂可以处理100mg组织或1×10^7个细胞。
加入后充分混合，使样品与试剂充分接触。
3. 分离RNA加入Trizol试剂后，需要将样品离心，使其分为有机相、界面相和水相。
有机相中含有RNA，界面相中含有DNA和蛋白质，水相中含有多余的盐和杂质。
将上清液转移到新的离心管中，加入同等体积的异丙醇，充分混合后离心，使RNA沉淀到离心管底部。
4. 洗涤RNA将RNA沉淀用70%乙酸乙酯洗涤，使其去除异丙醇和杂质。
然后用75%乙酸乙酯洗涤，使RNA更加纯净。
最后用RNase-free水洗涤，使RNA更加纯净。
5. 测量RNA浓度和纯度用紫外分光光度计测量RNA的浓度和纯度。
RNA的纯度可以通过A260/A280比值来判断，一般来说，纯度在1.8-2.0之间为较好的RNA。
6. 储存RNA将提取好的RNA用RNase-free水稀释至适当浓度，然后分装到RNase-free离心管中，储存在-80℃冰箱中。
总之，Trizol提取RNA的方法简单、快速、高效，适用于各种类型的样品。
在操作过程中需要注意使用RNase-free试剂和器具，避免RNA的降解和污染。
trizol法提取rna步骤
trizol法提取rna步骤TRIzol法提取RNA步骤RNA是一种重要的生物大分子，具有多种功能。
在研究生物学、医学等领域中，需要从细胞或组织中提取RNA。
TRIzol法是一种常用的RNA提取方法，其原理是利用TRIzol试剂将细胞或组织中的RNA溶解，并与其他生物大分子分离。
本文将详细介绍TRIzol法提取RNA 的步骤。
材料准备- TRIzol试剂- 高纯度异丙醇- DEPC水- RNase-free微量离心管和移液器- 1.5 mL离心管- 无菌手套和口罩- 冰桶和冰块步骤一：样品采集首先需要采集样品，可以是细胞或组织。
对于细胞，可以使用离心机将其沉淀；对于组织，则需要切碎并加入适当量的PBS缓冲液。
步骤二：样品裂解将采集到的样品加入适量的TRIzol试剂，并使用移液器充分混合。
然后使用高速离心机将样品离心10分钟，使其裂解。
步骤三：RNA分离将上述裂解物转移至新的离心管中，并加入等体积的异丙醇。
充分混合后，使用高速离心机离心10分钟，使RNA沉淀到底部。
步骤四：RNA洗涤将上述沉淀物转移至新的离心管中，并加入75%的乙醇。
充分混合后，使用高速离心机离心5分钟，去除残留的TRIzol试剂和异丙醇。
步骤五：RNA溶解将上述沉淀物转移至新的离心管中，并加入适量的DEPC水。
充分混合后，在65℃下孵育10分钟，使RNA完全溶解。
步骤六：RNA保存将溶解后的RNA转移至RNase-free微量离心管中，并存放在-80℃冰箱中保存。
注意事项- 在操作过程中要穿戴无菌手套和口罩，以避免污染。
- TRIzol试剂具有强烈腐蚀性，需注意安全操作。
- 所有使用到的器材和试剂都要事先消毒处理。
- 操作过程中需保持低温环境，以避免RNA降解。
- RNA提取后需立即存放在-80℃冰箱中，以避免RNA降解。
详解Trizol提取RNA原理、步骤和注意事项
详解Trizol提取RNA原理、步骤和注意事项Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，采用变性剂即内含异硫氰酸胍酚和β-巯基乙醇等变性物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。
异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
β-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。
（一）试剂准备1．Trizol试剂。
2．氯仿3．异丙醇4．75%乙醇（DEPC水配制）5．DEPC水细胞裂解后，细胞释放出蛋白质、DNA、RNA等物质，再根据它们在不同的PH值和不同极性溶剂的溶解度不同而使得分开。
（二）操作步骤1．样品处理：（1）细胞：1）悬浮细胞：移入1.5ml离心管中，1200转，离心5min，弃上清，PBS洗，重复两次，最后弃ＰＢＳ，加入1ml Trizol，混匀，室温静置5min。
２）贴壁细胞：PBS洗两次，最后弃ＰＢＳ，加入1ml Trizol，混匀，室温静置5min。
（2）组织：取50-100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml 离心管中，加入1ml Trizol充分匀浆，室温静置５min。
2．加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置15min。
3．4℃离心，12000g×15min，取上清。
4．加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。
5．4℃离心，12000g×10min，弃上清。
6．加入1ml 75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。
4℃，8000g×5min，弃上清。
7. 晾干，加入适量的DEP水溶解（65℃促溶10-15min）。
（三）注意事项1．样品量和Trizol的加入量一定要按步骤（1）的比例，不能随意增加样品量或减少Trizol量，否则会使内源性RNase的抑制不完全，导致RNA降解。
2．实验过程必须严格防止RNsae的污染。
（四）总RNA定量RNA定量方法与DNA定量相似，RNA在260nm波长处有最大的吸收峰。
trizol提RNA步骤
3. 本实验cDNA文库的构建（一步法）3.1 提取mRNA（1）用液氮将蜘蛛研磨成粉末状，然后放入EP管中（2）取0.8mL动物组织悬液，于2.0m L离心管加1.0μL Trizol 轻轻混匀，室温静置15min（3）加0.2mL氯仿，漩涡振荡15s，室温静置10min。
4℃，12000g 离心15min。
（4）吸取上层水相至2.0mL离心管中，加入1.0mL异丙醇轻轻颠倒混匀，-20℃沉淀20min。
4℃，12000g离心15min，倒掉上清。
（5）沉淀中加入1mL 75%乙醇，10000g离心5min，弃乙醇。
（6）沉淀自然干燥后溶于25μL DEPC水中（-70℃冻存）3.2 电泳测定RNA提取是否成功（1）选择孔径大小合适的点样梳，垂直架在胶板的一端，使点样梳底部离电泳槽水平面的距离为0.5~1mm。
（2）用电子称称取0.25g琼脂糖（2.5%琼脂糖），小心移入三角瓶中，加入10μL ddH2O，稍稍混匀后加热至沸腾，然后保温于65℃水浴中。
（3）量取3.4mL甲醛，4mL 5×MOPS，2.6mL ddH2O，混匀后于65℃水浴中保温。
（4）将步骤（2）和（3）中的溶液在65℃水浴中混匀，并将混合液保温在65℃水浴中备用。
（5）加入1μL Goldviewma II，轻轻摇匀，倒入装配好的制胶槽中，胶厚3~5mm，小心将气泡赶走或吸出。
（6）待凝胶凝固后，小心取出点样梳。
（7）在电泳槽中加入1×MOPS电泳缓冲液，将胶板放入电泳槽中（点样孔一端靠近电泳槽的负极），使电泳缓冲液没过胶面。
（8）取待测样品各0.5μL ，以5:1的比例各加入3μL 点样缓冲液，用移液枪反复吹吸混匀。
混合后，移液枪点样，记录样品点样顺序及样量。
（9）连接电泳槽与电泳仪之间的电源线，正极为红色，负极为黑色。
（10）开启电源，开始电泳，最高电压不超过5V/cm。
（11）当指示剂跑过胶板的2/3，可终止电泳；切断电源后，戴好一次性塑料手套，小心取出电泳槽，滑出凝胶，置于凝胶成像仪中观察，拍照，保存照片。
trizol提取RNA
RNA的提取一、准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS（溶液均需用DEPC处理过的水配制）。
二、操作步骤：b. 单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积（即3.5cm 直径的培养板）加1ml，用移液器吸打几次。
TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。
TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c. 细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。
加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。
一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
1. 匀浆处理：a. 组织将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。
样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
2. 将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3. 可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。
离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。
处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。
取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。
样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。
RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。
用异丙醇沉淀水相中的RNA。
每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。
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准备材料：冷PBS、Trizol、三氯甲烷（氯仿）、异丙醇、100%酒精、DEPC水
①用冷的PBS将细胞洗两遍。
（最后一遍将PBS吸干净）
②按照6孔板每孔500μL的量加入Trizol，晃动后在冰上裂解2-3min（细胞密度比较大时，裂解时间适当延长，确保样品充分裂解）
③用枪吹打样品，尽可能干净地把裂解后的样品吸入EP管中
④每毫升Trizol加入0.2ml的氯仿，VOTEX混匀，至少15s，室温放置2-3min（这一步votex是整个实验的关键步骤，一定要充分震荡）
⑤离心：12000×g，4℃，15min，而后吸取上清，每毫升最初的Trizol量大概可以吸取
0.4~0.5ml的上清（实际条件为13500×g，这一步吸取时要小心，不能吸到下层的液体）
⑥每毫升最初的Trizol加入0.5ml异丙醇，点到混匀。
（此时可暂停，存于-80℃；可在此步骤加入少量醋酸钠，促进RNA沉淀，适用细胞少的情况；提取microRNA等小RNA，在此步骤放在-70℃过夜后往下进行）
⑦离心：12000×g，4℃，10min（实际转速需要为为15000×g）
⑧管底现RNA沉淀，弃上清（倒扣在卫生纸上吸吸水）
⑨按每毫升最初的Trizol量加入75%乙醇（提前用DEPC水勾兑，实际用量一般为1ml）⑩离心：7500×g，4℃，5min（实际转速为8000×g以上一点）
⑪ 弃上清，用卫生纸吸吸水，在风箱中放5min。
⑫ 每个EP管加入DEPC水20μL溶解RNA，放于-80℃保存。