生化课件
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《生化实验》课件
实验流程
1
实验准备
清洗仪器、准备试剂和标本，确保实验顺利进行。
2
实验操作
按照操作步骤进行样本处理、反应和测量。
3
数据记录
准确记录实验数据，便于后续分析和结果展示。
实验方案的制定
目标设定
定义实验目标和预期结果，指导实验方案的制定。
调整量
确保实验中只有一个变量改变，其他条件保持恒定。
《生化实验》PPT课件
探索生化实验的奥秘，了解其应用领域和实验室安全知识。学习实验流程、 制定实验方案和数据分析，解答常见问题。
生化实验简介
1 关键性实验技术
学习DNA测序、蛋白质表达、酶活性等生化 实验技术。
2 学术研究工具
了解生化实验在药物研发、基因工程和医学 诊断等方面的应用。
生化实验的应用
实验改进
提出改进实验方案的建议，优 化实验设计和操作。
数据分析和结果展示
统计分析
使用统计方法对实验数据进行分 析，发现规律和趋势。
图表展示
使用图表和图形呈现实验结果， 直观清晰地展示研究发现。
实验报告
撰写详细的实验报告，包括实验 目的、方法、结果和结论。
常见问题解答
实验失败
分析失败原因，如实验条件、 操作技巧和实验材料等。
结果解释
解释实验结果，讨论研究意义 和可能的应用。
医药研究
开发新药物、研究药物代谢和 毒性，为治疗疾病提供科学依 据。
基因工程
编辑基因序列、合成重组蛋白， 促进生命科学研究的进展。
食品安全
检测食品中的有害物质，确保 食品安全和卫生。
实验室安全
1 个人防护措施
佩戴实验室服装、手套和护目镜，避免与实验物质接触。
生化检验基本知识ppt课件
血清生化血库试验 快速血清分离生化免疫 全血血常规试验 惰性胶体+促凝剂 K2EDTA 或K3EDTA
全血血细胞沉降率试验 枸橼酸钠
血浆葡萄糖试验 氟化钠+草酸钾
血浆凝血试验 PT， TT， 凝血因子试验
枸橼酸钠 7
（二）尿液标本的采集
1、尿液标本分类
随机新鲜尿 8-20
定时尿
20-8
3h尿
24小时尿
第二章 临床生化检验基本知识-1
• 第一节 生化检验标本 • 第二节 生化检验质量管理要素 • 第三节 检测系统的评价与验证 • 第四节 试剂盒的选择和评价
复习思考题：
1.真空采血 法的优点？ 2. 生化检验常用的抗凝剂和防腐剂？ 3.生化检验血标本采集的注意事项？ 4.接收检测标本应核对的主要标记内容？ 5.血标本不能及时检测时应如何处理？ 6.拒收检测标本的原因？ 7.急诊、常规、危急值报告的时间和要求？ 8.生化检验流程包括哪些程序？
（四）年龄 （五）性别 （六）体形 （七）药 物
第二节 生化检验质量管理要素
一、生化检验前质量管理要素
主要包括：检验人员组成和素质的稳定；实验工作 环境的优化；检测方法的选择与评价；试剂盒的选 择与评价，病人的准备；标本的采集、处理和存储 等。
（一）生化检验申请（与临床医生沟通）
Ｓ申ＥＲ请ＵＭ单内容：条码号、门诊号，住院号；病人的 姓名，性别，出生日期；病房，床位号；临床诊 断，问题或特殊检验注意事项；申请检查项目； 标本类型；采样时间，标本接收时间（年、月、 日、时、分;有关治疗情况(用药情况)医生姓名等。
血浆的分离：取血后与抗凝剂充分混匀 后，可立即离心分离，2500~3000转/min，5min。
血清的分离：取血后将试管放37℃水浴 放置30min左右，离心分离。
实验室检查生化PPT课件
结合胆红素由胆道排入肠腔，被细菌还原成 尿胆原。 一部分尿胆原被肠粘膜吸收进入体内被肝细 胞摄取，其中一部分进入血循环从肾脏排出。 残留肠腔的尿胆原氧化后，以粪胆素排出 因此，当胆红素生成过多或肝细胞的摄取、 结合、转运、排泄等过程发生障碍，可导致 血中胆红素升高。
1.血清胆红素测定
包括总胆红素（STB），结合胆红素（CB） 和非结合胆红素（UCB）。
参考值： 总胆红素（STB） 1.7-17.1umol/L 结合胆红素（CB） 0-6.8umol/L 非结合胆红素（UCB）1.7-10.2umol/L
临床意义：
(1)根据总胆红素判断有无黄疸及黄疸的程度
STB 17.1—34.2 mol/L 隐性黄疸
34.2—171 mol/L 轻度黄疸
171—342mol/L 中度黄疸
实验室检查之
生化检验
第一节 肝功能检查
一.反映蛋白质代谢功能
1.总蛋白(TP) 60-80 g/L,是血清中所含各种蛋白
的总称，包括白蛋白和球蛋白,。
2.白蛋白(ALB) 40-50 g/L,为血液中的主要蛋白
质由肝脏合成，白蛋白主要维持血浆渗透 压，代谢物质转运，供能作用。
3.球蛋白(GLO) 20-30 g/L,为血清中总蛋白减去
(4) 结合胆红素还有助于早期发现处于隐 性黄疸肝胆疾病。
2.尿胆红素和尿胆原测定
非结合胆红素为脂溶性非极性物质，不能 透过肾小球滤过膜，溶血性黄疸尿胆红素 为阴性；
结合胆红素是水溶性极性物质，可以通过 肾小球滤过膜从尿中排出，肝细胞性和梗 阻性黄疸尿胆红素为阳性。
尿胆原在溶血性黄疸和肝细胞性黄疸时浓 度升高。
白蛋白以外的蛋白质(TP-A=G)，主要为免疫 球蛋白和补体，与机体的免疫状态有关。
《医学生化》课件
源自2心血管疾病的风险因素
探讨高胆固醇、高血压等因素对心血管健康的影响。
3
预防和治疗心血管疾病
了解健康饮食、体育锻炼和药物治疗等预防和治疗措施。
DNA、RNA和基因组学
1 遗传信息的携带者
研究DNA和RNA如何携带 细胞的遗传信息。
2 基因组学的重要性
探索基因组学在医学研究 和个性化医学中的应用。
3 基因表达的调控
了解基因表达的调控机制 以及它们在细胞功能中的 作用。
基因表达和蛋白质合成
研究基因表达的过程，从DNA转录为RNA，再翻译为蛋白质，揭示蛋白质合成 的机制。
探索不同类型的生化反应，了解它们的速率调控机制以及在生物体内的功能。
蛋白质、酶和代谢途径
深入研究蛋白质的结构和功能，了解酶的作用以及代谢途径中的关键步骤。
糖、脂质和核酸的结构和功能
糖的结构和功能
了解不同类型的糖分子的结构以 及它们在生物体内的功能。
脂质的结构和功能
核酸的结构和功能
探索脂质分子的结构和生理学功 能，包括细胞膜组成和能量储存。
《医学生化》PPT课件
我们的医学生化学课程将带您深入了解生化学的概念、作用以及其在医学领 域中的重要性和前景。
生化分子结构和生命起源
探索生命起源和生物分子的结构，从DNA到蛋白质，了解它们如何构建和维持生命。
生物化学基础知识
了解原子、元素和化学键等基础概念，揭示它们在生化过程中的关键作用。
生化反应类型和速率
研究DNA和RNA的结构以及它们 在遗传信息传递中的重要作用。
糖代谢和糖尿病
糖的代谢途径
探索糖在身体内被分解和利用的过程。
糖尿病的发生机制
了解糖尿病的原因以及与代谢紊乱相关的风险因素。
探讨高胆固醇、高血压等因素对心血管健康的影响。
3
预防和治疗心血管疾病
了解健康饮食、体育锻炼和药物治疗等预防和治疗措施。
DNA、RNA和基因组学
1 遗传信息的携带者
研究DNA和RNA如何携带 细胞的遗传信息。
2 基因组学的重要性
探索基因组学在医学研究 和个性化医学中的应用。
3 基因表达的调控
了解基因表达的调控机制 以及它们在细胞功能中的 作用。
基因表达和蛋白质合成
研究基因表达的过程，从DNA转录为RNA，再翻译为蛋白质，揭示蛋白质合成 的机制。
探索不同类型的生化反应，了解它们的速率调控机制以及在生物体内的功能。
蛋白质、酶和代谢途径
深入研究蛋白质的结构和功能，了解酶的作用以及代谢途径中的关键步骤。
糖、脂质和核酸的结构和功能
糖的结构和功能
了解不同类型的糖分子的结构以 及它们在生物体内的功能。
脂质的结构和功能
核酸的结构和功能
探索脂质分子的结构和生理学功 能，包括细胞膜组成和能量储存。
《医学生化》PPT课件
我们的医学生化学课程将带您深入了解生化学的概念、作用以及其在医学领 域中的重要性和前景。
生化分子结构和生命起源
探索生命起源和生物分子的结构，从DNA到蛋白质，了解它们如何构建和维持生命。
生物化学基础知识
了解原子、元素和化学键等基础概念，揭示它们在生化过程中的关键作用。
生化反应类型和速率
研究DNA和RNA的结构以及它们 在遗传信息传递中的重要作用。
糖代谢和糖尿病
糖的代谢途径
探索糖在身体内被分解和利用的过程。
糖尿病的发生机制
了解糖尿病的原因以及与代谢紊乱相关的风险因素。
检验科讲课—生化(PPT精选课件)
正常人 溶血性黄疸
DBIL 0~6.8 轻度增高
肝细胞性黄疸 中度增高
阻塞性黄疸 明显增高
IBIL 1.7~10.2 明显增高
中度增高
轻度增高
DBIL/TBIL >35% <20%
>35%
>35%
14
-谷氨酰转移酶（-GT）
• -GT广泛分布于肝、肾、胰、脾、脑、肺、骨骼肌、心肌等处。 在肝脏的活性强度居第三位，分布于肝细胞毛细血管一侧和整个 胆管系统，在胆汁淤滞，肝内-GT合成亢进。酒精性肝损害时此 酶亦升高。
• 血清胆红素分为结合与非结合胆红素，二者合称总胆红素。 TBIL=DBIL+IBIL
• TBIL:<34为隐性黄疸， <170为轻度黄疸， <340为中度黄疸， >340为高度黄疸，完全阻塞性黄疸为340~510；不完全阻塞者为 170~265，肝细胞性黄疸17~200；溶血性黄疸<85
13
三种黄疸的胆红素变化比较
• 影响ALT活力的生理因素，饮酒和剧烈运动后其轻度升高，但很 少超过100 IU
6
谷丙转氨酶GPT、ALAT
• ALT增高常在肝炎早期症状出现之前，约经4~8周后多数降至正常。 特别是乙型肝炎，此酶持续时间较长，且恢复正常较慢。但轻型 无黄疸肝炎仅有短暂或一时性升高，且程度不显著，甚至2~3天 后降至正常。如果此酶长期波动在较高水平，持续半年以上，应 考虑迁延型或慢性肝炎的活动期，至肝炎静止期或代偿期的肝硬 变，常不增加。
• AST/ALT<1 ，见于一般急、慢性肝炎； AST/ALT >2，则有肝硬变可能；12% 的肝硬化患者
>3 AST/ALT >3 ，则有肝癌变可能性，或应进行相关检
生化培训资料课件
生物化学物质分类
介绍生物化学物质的基本分类，包括糖类、脂类、蛋白质、核酸 等，以及各类物质的结构和性质。
生物化学反应类型
01
02
03
04
生物氧化
介绍生物氧化反应的类型和特 点，包括呼吸链、氧化磷酸化 等。
糖代谢
介绍糖的分解和合成代谢，包 括糖酵解、糖异生等。
脂代谢
介绍脂的分解和合成代谢，包 括脂肪酸氧化、脂肪合成等。
THANK YOU
感谢聆听
基于质谱分析的蛋白质组学技术为研 究蛋白质结构和功能提供了有力手段 ，有助于深入了解生物分子机制。
研究热点问题
肿瘤生物学
肿瘤的发生发展机制、肿瘤免疫 、肿瘤耐药性等是当前研究的热 点问题，对于肿瘤的诊断和治疗
具有重要意义。
神经生物学
神经退行性疾病、神经信号传导 、神经再生等是神经生物学研究 的热点，有助于深入了解神经系
农业领域
转基因作物
通过改变作物基因，提高 抗虫、抗病、抗旱等能力 ，增加产量。
生物农药
利用微生物、植物等天然 生物资源开发农药，减少 环境污染。
动物育种
通过基因编辑等技术，改 良动物品种，提高生产性 能和品质。
环境监测领域
污染治理
利用微生物降解污染物，净化水 体和土壤。
环境监测
利用生物传感器等手段监测空气、 水体等环境质量。
定期检查个人防护用品的完好性，如有损坏应及 时更换。
紧急处理措施
01
02
03
04
如发生火火灾、泄漏等紧急情况 ，应立即按照实验室的安全疏 散程序撤离。
如发生火灾、泄漏等紧急情况 ，应立即按照实验室的安全疏 散程序撤离。
如发生火灾、泄漏等紧急情况 ，应立即按照实验室的安全疏 散程序撤离。
介绍生物化学物质的基本分类，包括糖类、脂类、蛋白质、核酸 等，以及各类物质的结构和性质。
生物化学反应类型
01
02
03
04
生物氧化
介绍生物氧化反应的类型和特 点，包括呼吸链、氧化磷酸化 等。
糖代谢
介绍糖的分解和合成代谢，包 括糖酵解、糖异生等。
脂代谢
介绍脂的分解和合成代谢，包 括脂肪酸氧化、脂肪合成等。
THANK YOU
感谢聆听
基于质谱分析的蛋白质组学技术为研 究蛋白质结构和功能提供了有力手段 ，有助于深入了解生物分子机制。
研究热点问题
肿瘤生物学
肿瘤的发生发展机制、肿瘤免疫 、肿瘤耐药性等是当前研究的热 点问题，对于肿瘤的诊断和治疗
具有重要意义。
神经生物学
神经退行性疾病、神经信号传导 、神经再生等是神经生物学研究 的热点，有助于深入了解神经系
农业领域
转基因作物
通过改变作物基因，提高 抗虫、抗病、抗旱等能力 ，增加产量。
生物农药
利用微生物、植物等天然 生物资源开发农药，减少 环境污染。
动物育种
通过基因编辑等技术，改 良动物品种，提高生产性 能和品质。
环境监测领域
污染治理
利用微生物降解污染物，净化水 体和土壤。
环境监测
利用生物传感器等手段监测空气、 水体等环境质量。
定期检查个人防护用品的完好性，如有损坏应及 时更换。
紧急处理措施
01
02
03
04
如发生火火灾、泄漏等紧急情况 ，应立即按照实验室的安全疏 散程序撤离。
如发生火灾、泄漏等紧急情况 ，应立即按照实验室的安全疏 散程序撤离。
如发生火灾、泄漏等紧急情况 ，应立即按照实验室的安全疏 散程序撤离。
生化课件第十六章血液生化
约占1/2
2020/10/20
第一节 血 浆 蛋 白 Plasma ProteinБайду номын сангаас
血浆蛋白是维持体内代谢的重要物质
吉林大学白求恩医学院 杨成君
5
2020/10/20
一、血浆蛋白的分类与性质
血浆蛋白指血浆含有的蛋白质，是血浆中的主要的固体成分
血浆蛋白总浓度：70～75g/L
血浆蛋白的种类多，含量也不相同 通常按来源、分离方法和生理功能将血浆蛋白质
分类。 分离蛋白质的常用方法包括
电泳（electrophoresis）：血浆蛋白质 超速离心（ultra centrifuge）：血浆脂蛋白
吉林大学白求恩医学院 杨成君
6
2020/10/20
（一）血浆蛋白的分类
电泳(electrophoresis)
是最常用的分离蛋白质的方法,常据此分类
清蛋白（albumin） 1球蛋白（1 –globulin） 2球蛋白（ 2 –globulin ）
多种疾病导致血浆蛋白异常
风湿病
急性炎症反应和抗原刺激引起免疫系统增强，特征：
免疫球蛋白升高：特别是IgA，可有IgG和IgM升高 炎症期可有α1-AG、Hp、C3升高
肝脏疾病
急性炎症反应和抗原刺激引起免疫系统增强，特征
免疫球蛋白升高：特别是IgA，可有IgG和IgM升高？ 炎症期可有α1-AG、Hp、C3升高？
外分泌酶：外分泌腺分泌的酶
消化系统的蛋白酶、淀粉酶、酯酶 脏器受损时血浆含量增加，有助于临床诊断
细胞酶：存在于组织细胞内参与代谢的酶类
正常情况血浆含量甚微，小部分有器官特异性，用于诊断。
吉林大学白求恩医学院 杨成君
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2020/10/20
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第一节 血 浆 蛋 白 Plasma ProteinБайду номын сангаас
血浆蛋白是维持体内代谢的重要物质
吉林大学白求恩医学院 杨成君
5
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一、血浆蛋白的分类与性质
血浆蛋白指血浆含有的蛋白质，是血浆中的主要的固体成分
血浆蛋白总浓度：70～75g/L
血浆蛋白的种类多，含量也不相同 通常按来源、分离方法和生理功能将血浆蛋白质
分类。 分离蛋白质的常用方法包括
电泳（electrophoresis）：血浆蛋白质 超速离心（ultra centrifuge）：血浆脂蛋白
吉林大学白求恩医学院 杨成君
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（一）血浆蛋白的分类
电泳(electrophoresis)
是最常用的分离蛋白质的方法,常据此分类
清蛋白（albumin） 1球蛋白（1 –globulin） 2球蛋白（ 2 –globulin ）
多种疾病导致血浆蛋白异常
风湿病
急性炎症反应和抗原刺激引起免疫系统增强，特征：
免疫球蛋白升高：特别是IgA，可有IgG和IgM升高 炎症期可有α1-AG、Hp、C3升高
肝脏疾病
急性炎症反应和抗原刺激引起免疫系统增强，特征
免疫球蛋白升高：特别是IgA，可有IgG和IgM升高？ 炎症期可有α1-AG、Hp、C3升高？
外分泌酶：外分泌腺分泌的酶
消化系统的蛋白酶、淀粉酶、酯酶 脏器受损时血浆含量增加，有助于临床诊断
细胞酶：存在于组织细胞内参与代谢的酶类
正常情况血浆含量甚微，小部分有器官特异性，用于诊断。
吉林大学白求恩医学院 杨成君
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检验科讲课—生化课件
生化检验结果对于诊断、治疗和监测疾病具有重要意义，应正确应用于临床实践。
06
生化检验的新技术发展
自动化生化分析仪
自动化生化分析仪是生化检验领域的重要技术之一，它能够快速、准确 地完成大量生化样本的检测和分析。
自动化生化分析仪采用先进的机械臂和液体处理系统，实现了样本的自 动加样、混合、分离和检测等功能，大大提高了检测效率。
操作误差等。
03
误差纠正与预防
根据误差分析结果，采取相应的纠正措施，如维修仪器、更换试剂、培
训操作人员等。同时，还需要制定预防措施，防止类似误差再次发生。
05
生化检验的注意事项
患者准备
患者应提前了解生化检验的要 求，如饮食控制、禁食时间等 ，以便做好充分准备。
患者应避免剧烈运动、过度劳 累和情绪波动，以免影响检验 结果。
肾功能指标
评估肾脏功能，反映肾脏 健康状况。
尿素氮（BUN）：蛋白质 代谢产物，通过肾脏排泄
。
尿酸（UA）：嘌呤代谢产 物，反映肾功能和痛风。
肌酐（CREA）：肌肉代谢
尿蛋白（PRO）：检测肾
•·
产物，通过肾脏排泄。
脏病变和评估肾功能。
血糖血脂指标
在此添加您的文本17字
监测血糖和血脂水平，预防糖尿病和心血管疾病。
选择合适的质控品，将其与样本一同 检测，并根据质控品的结果评估实验 的准确性。
校准与校准验证
在开始实验前，必须对仪器进行校准 ，确保仪器处于正常工作状态。同时 ，还需要定期对校准结果进行验证， 以确保结果的准确性。
室间质量评价
参加评价计划
通过参加权威机构组织的室间质量评价计划，与其他实验室进行 比对，了解自身实验室的检测水平。
06
生化检验的新技术发展
自动化生化分析仪
自动化生化分析仪是生化检验领域的重要技术之一，它能够快速、准确 地完成大量生化样本的检测和分析。
自动化生化分析仪采用先进的机械臂和液体处理系统，实现了样本的自 动加样、混合、分离和检测等功能，大大提高了检测效率。
操作误差等。
03
误差纠正与预防
根据误差分析结果，采取相应的纠正措施，如维修仪器、更换试剂、培
训操作人员等。同时，还需要制定预防措施，防止类似误差再次发生。
05
生化检验的注意事项
患者准备
患者应提前了解生化检验的要 求，如饮食控制、禁食时间等 ，以便做好充分准备。
患者应避免剧烈运动、过度劳 累和情绪波动，以免影响检验 结果。
肾功能指标
评估肾脏功能，反映肾脏 健康状况。
尿素氮（BUN）：蛋白质 代谢产物，通过肾脏排泄
。
尿酸（UA）：嘌呤代谢产 物，反映肾功能和痛风。
肌酐（CREA）：肌肉代谢
尿蛋白（PRO）：检测肾
•·
产物，通过肾脏排泄。
脏病变和评估肾功能。
血糖血脂指标
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监测血糖和血脂水平，预防糖尿病和心血管疾病。
选择合适的质控品，将其与样本一同 检测，并根据质控品的结果评估实验 的准确性。
校准与校准验证
在开始实验前，必须对仪器进行校准 ，确保仪器处于正常工作状态。同时 ，还需要定期对校准结果进行验证， 以确保结果的准确性。
室间质量评价
参加评价计划
通过参加权威机构组织的室间质量评价计划，与其他实验室进行 比对，了解自身实验室的检测水平。
生化技术 课件 第一章 生命大分子物质的制备(共87张PPT)
• 相似相溶
3)水解酶：
• 无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或 核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然 物质量的减少。
• 参加抑制剂或调节提取液的pH、离子强度或极性 等方法使相应的水解酶失去活性，防止它们对欲提 纯的蛋白质、酶及核酸的降解作用。
参加二异丙基氟磷酸〔DFP〕可以抑制或减慢自溶作 用；
• 所需的样品量少、操作简单、反响迅速、灵敏广泛用于物 质的含量测定。
• 紫外光谱法、可见光光谱法、荧光光谱法、浊度法
紫外光谱法
利用某些生物大分子具有吸收紫外光的性质而建立 的一种方法。将一定浓度的待测物溶液，通过某一特定 波长的紫外分光光度计，测定此溶液的消光值即可换算 出待测物的浓度。
1.测定核酸含量
注意温度的影响
二、物理法：
1.超声波法：此法是 借助超声波的振动 力破碎细胞壁和细 胞器。破碎微生物 细菌和酵母菌时， 时间要长久一些。
2.压榨法：这是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。 在1.77×108Pa～3.54×108Pa 的高压下使细胞悬 液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎 。
对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备； 在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
简便、灵敏、准确、快速、专一 参加碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性； 吸附层析、盐析、凝胶过滤、 芳香族氨基酸的紫外吸收 离子交换层析、亲和层析、 ⑷许多生物大分子在生物材料中的含量极微，别离纯化的步骤繁多，流程长。 生物大分子制备的一般过程： 蛋白质的变性、复性、沉淀和凝固 RNA纯品: OD260/OD280 = 2. 最适于生物大分子尤其是蛋白质和酶的浓缩或脱盐，并具有本钱低，操作方便，条件温和，能较好地保持生物大分子的活性，回收率高 等优点。
3)水解酶：
• 无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或 核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然 物质量的减少。
• 参加抑制剂或调节提取液的pH、离子强度或极性 等方法使相应的水解酶失去活性，防止它们对欲提 纯的蛋白质、酶及核酸的降解作用。
参加二异丙基氟磷酸〔DFP〕可以抑制或减慢自溶作 用；
• 所需的样品量少、操作简单、反响迅速、灵敏广泛用于物 质的含量测定。
• 紫外光谱法、可见光光谱法、荧光光谱法、浊度法
紫外光谱法
利用某些生物大分子具有吸收紫外光的性质而建立 的一种方法。将一定浓度的待测物溶液，通过某一特定 波长的紫外分光光度计，测定此溶液的消光值即可换算 出待测物的浓度。
1.测定核酸含量
注意温度的影响
二、物理法：
1.超声波法：此法是 借助超声波的振动 力破碎细胞壁和细 胞器。破碎微生物 细菌和酵母菌时， 时间要长久一些。
2.压榨法：这是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。 在1.77×108Pa～3.54×108Pa 的高压下使细胞悬 液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎 。
对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备； 在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
简便、灵敏、准确、快速、专一 参加碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性； 吸附层析、盐析、凝胶过滤、 芳香族氨基酸的紫外吸收 离子交换层析、亲和层析、 ⑷许多生物大分子在生物材料中的含量极微，别离纯化的步骤繁多，流程长。 生物大分子制备的一般过程： 蛋白质的变性、复性、沉淀和凝固 RNA纯品: OD260/OD280 = 2. 最适于生物大分子尤其是蛋白质和酶的浓缩或脱盐，并具有本钱低，操作方便，条件温和，能较好地保持生物大分子的活性，回收率高 等优点。
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第七章
氨基酸代谢
Amino Acid Metabolism
The biochemistry and molecular biology department of CMU
第一节
蛋白质的营养作用
Nutritional Function of Proteins
一、蛋白质的主要功能
①维持组织细胞的生长、更新和修补； 维持组织细胞的生长、更新和修补； ②参与催化、运输和代谢调节； 参与催化、运输和代谢调节； ③提供能源。 提供能源。
• 主要是从脑、肌肉等组织向肝或肾运氨。 主要是从脑 肌肉等组织向肝或肾运氨。 等组织向肝或肾运氨
NH3 + ATP
COOH CH2 CH2 CHNH2 COOH
ADP + Pi
CONH2 CH2 CH2 CHNH2 COOH
Gln合成酶 合 （ 脑 、 肌肉 ）
Glu
谷 氨酰 胺 酶 （ 肝、 肾 ） NH3 H2O
氨基酸的来源和去路
NH3 食 物 蛋 白质
消 化 吸 收
肝
尿素 酮体 氧 化 供能 糖
作用 氨基 脱
组 织 蛋白 质
分解 合成
α -酮酸 酮 氨 基酸 代 谢 库 转变 其 他 含氮 化 合物
脱羧 基作 用
体 内 合 成的 非 必 需 氨基 酸
CO2
胺类
一、氨基酸的脱氨基作用
• • • • 转氨基 氧化脱氨基 联合脱氨基 非氧化脱氨基
第三节
氨基酸的一般代谢
General Metabolism of Amino Acid
• 蛋白质降解
– 不依赖 不依赖ATP的过程 的过程 – 依赖 依赖ATP和泛素的过程 和泛素的过程
• 泛素：是一种参与蛋白质降解的小分子蛋 泛素： 白质。 白质。
氨基酸代谢库
• 食物蛋白质经消化吸收产生的氨基酸（外 食物蛋白质经消化吸收产生的氨基酸（ 源性氨基酸） 源性氨基酸）与体内组织蛋白质降解生成 的氨基酸以及其它物质经代谢转变而来的 氨基酸（内源性氨基酸）混在一起， 氨基酸（内源性氨基酸）混在一起，分布 于体内各处，参与代谢，称为氨基酸代谢 于体内各处，参与代谢， 库（metabolic pool）。 ）。
R1
R2
转 氨酶
R1
R2
CHNH2 + C O COOH COOH
C O + CHNH2 COOH COOH
要点： 要点： ①反应可逆。 反应可逆。 和羟脯氨酸外， ②体内除Lys、Pro和羟脯氨酸外，大多数 体内除 、 和羟脯氨酸外 氨基酸都可进行转氨基作用。 氨基酸都可进行转氨基作用。 ③转氨酶均以磷酸吡哆醛为辅酶。磷酸吡 转氨酶均以磷酸吡哆醛为辅酶。 磷酸吡哆醛为辅酶 哆醛是VB 的衍生物。 哆醛是 6的衍生物。反应中起传递氨 基的作用。 基的作用。
二、氮平衡（nitrogen balance） 氮平衡（ ）
氮平衡 状态 氮的总 平衡 氮的正 平衡 氮的负 平衡 进、出氮 情况 摄入氮= 摄入氮= 排出氮 摄入氮＞ 摄入氮＞ 排出氮 摄入氮＜ 摄入氮＜ 排出氮 常见人群
健康成年人
儿童、青春期青少年、 儿童、青春期青少年、孕妇及 恢复期病人 长期饥饿、 长期饥饿、消耗性疾病患者
COOH R H2N CH COOH α-氨基酸 氨 转氨 酶 R C O COOH α -酮酸 酮 CH2 CH2 C O COOH α -酮戊二酸 酮 COOH H2C CH2 H2N CH COOH L-谷氨酸 谷 NADH + H+ + NH3 L-谷氨酸脱氢酶 谷 NAD+ + H2O
Ala + α-酮戊二酸 酮戊二酸
第二节
蛋白质的消化、吸收与腐败 蛋白质的消化、
Digestion, Absorption and Putrefaction of proteins
一、蛋白质的消化
• 胃蛋白酶 • 胰液中的蛋白酶：对肽键有一定的专一性 胰液中的蛋白酶：
– 内肽酶：胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶 内肽酶：胰蛋白酶、糜蛋白酶、 – 外肽酶：羧基肽酶 和羧基肽酶 外肽酶：羧基肽酶A和羧基肽酶 和羧基肽酶B
NH2
氨 甲 酰磷 酸 2ATP 2ADP + Pi
Pi
(CH2)3 CHNH2 COOH
瓜氨 酸
鸟 氨酸 胞液
• 两步反应均不可逆； 两步反应均不可逆； 不可逆 • 氨甲酰磷酸合成酶 Ⅰ(carbamoyl phos氨甲酰磷酸合成酶-Ⅰ phate synthetaseⅠ，CPS-Ⅰ)为变构酶， 为变构酶， Ⅰ Ⅰ 为变构酶 N-乙酰谷氨酸（N-AGA）为此酶的变构激 乙酰谷氨酸（ 乙酰谷氨酸 ） 活剂； 活剂； • 此阶段消耗2个ATP； 此阶段消耗 个 消耗 ；
α-氨基酸 氨 转氨酶 α -酮酸 酮
α -酮戊 酮 二酸
Asp AST
腺苷酸代 琥 珀酸 延胡索酸 苹果酸
谷氨酸
草 酰 乙酸
二、α-酮酸的代谢
合成非必需氨基酸 转变成糖和脂肪 氧化供能
NH3 氨基酸 α -酮酸 酮
脱掉氨基后的α 酮酸可转变成： 脱掉氨基后的α-酮酸可转变成：
α-酮戊二酸 酮戊二酸 琥珀酰 CoA 三羧酸循环中间产物 延胡索酸 草酰乙酸 丙酮酸 乙酰CoA 乙酰 乙酰乙酰 CoA 脂肪酸 酮体 PEP 葡萄糖
COOH
Gln
Glu
NH4 随尿排出
二、氨的转运
• 氨是有毒物质，血中的NH3主要是以无 氨是有毒物质，血中的 两种形式运输的。 毒的Ala及Gln两种形式运输的。 及 两种形式运输的 毒的
（一）丙氨酸-葡萄糖循环 丙氨酸 葡萄糖循环
肌肉 α-酮戊 酮 二酸 谷氨酸 血液 肝 α-酮戊 酮 二酸 谷氨酸 NADH + H+ + NH3 尿素 α-酮酸 酮 丙酮酸 G G 丙酮酸 G NAD+ + H2O
转氨基作用机制
体内重要的转氨酶
①丙氨酸氨基转移酶（alanine amino-transferase, 丙氨酸氨基转移酶（ ALT或glutamic pyruvic transaminase, GPT）： 或 ）： 肝中活性最高 ②天冬氨酸氨基转移酶（aspartate amino天冬氨酸氨基转移酶（ transferase, AST或glutamic oxalo-acetic 或 transaminase, GOT）：心肌中活性最高 ）：心肌 ）：心肌中活性最高 临床意义
实验根据如下： 实验根据如下：
保温数小时， ①大鼠肝切片与NH4+保温数小时，NH4+↓， 大鼠肝切片与 ， 尿素↑； 尿素 ； ②加入鸟氨酸、瓜氨酸和Arg后，尿素 ； 加入鸟氨酸、瓜氨酸和 后 尿素↑； ③上述三种氨基酸结构上彼此相关； 上述三种氨基酸结构上彼此相关； ④早已证实肝中有精氨酸酶。 早已证实肝中有精氨酸酶。
第四节
氨的代谢
Metabolism of Ammonia
氨的来源去路
氨基酸脱氨基 肠道吸收氨 肾脏泌氨 血氨
合成尿素 合成Gln 合成氨基酸 及其它含氮物
一、体内氨的来源
1. 氨基酸脱氨基作用：是主要来源。还有少 氨基酸脱氨基作用：是主要来源。 量胺的氧化。 量胺的氧化。 2. 肠道吸收的氨：4g/日 肠道吸收的氨： 日 ①蛋白质的腐败作用 ②肠道尿素的水解
丙酮酸 + Glu 酮戊二酸+ α-酮戊二酸 NADH + NH4+ 酮戊二酸
Glu + NAD+ + H2O
Ala + NAD+ + H2O
丙酮酸 + NADH + NH4+
（四）嘌呤核苷酸循环
• 肌肉中的脱氨基反应 • 是一种特殊的联合脱氨基作用
嘌呤核苷酸循环
IMP
NH3
H2O AMP
腺 苷酸 脱氨 酶
氨基酸
Ala
Ala
Ala
• 是肌肉与肝之间氨的转运形式。 肌肉与肝之间氨的转运形式。 之间氨的转运形式 • 意义：既使肌肉中的氨以无毒的Ala形式运到肝， 意义：既使肌肉中的氨以无毒的 形式运到肝， 形式运到肝 肝又为肌肉提供生成丙酮酸的葡萄糖。 肝又为肌肉提供生成丙酮酸的葡萄糖。
（二）谷氨酰胺的运氨作用
Gln
• Gln即是氨的一种解毒形式，也是氨的储存 即是氨的一种解毒形式， 即是氨的一种解毒形式 和运输形式。 和运输形式。
CONH2 COOH CH2 CHNH2 COOH CH2 CH2 CHNH2 COOH COOH
ATP AMP + PPi CONH2
CH2 CHNH2 COOH
CH2
+
+ CH2
三、必需氨基酸
•人体营养需要，而又不能自身合成，必须 人体营养需要，而又不能自身合成， 人体营养需要 由食物供应的氨基酸。 由食物供应的氨基酸et、Trp、Thr、Lys。 、 、 、 、 、 。 •蛋白质的互补作用 蛋白质的互补作用 混合食用营养价值较低的蛋白质， 混合食用营养价值较低的蛋白质，则 必需氨基酸可以互相补充， 必需氨基酸可以互相补充，从而提高营养 价值。 价值。
Ala
α-酮戊二酸 酮 ALT
丙酮酸 Asp
Glu α-酮戊二酸 酮 AST
草酰乙酸
Glu
（二）L-谷氨酸氧化脱氨基作用 谷氨酸氧化脱氨基作用
、 C OOH ATP、 GTP ADP、GDP 、
C OOH CH 2 CH 2 +H O CH 2 2 L-谷 氨 酸 脱 氢 酶 谷 CH 2 CH 2 + NH 3 CH 2 -H 2O C O CHNH 2 C NH + COOH NADH+H + COOH COOH NAD + L-谷氨酸 (NADP +) (NADPH+H ) 谷 α -酮 戊 二 酸 酮 COOH
氨基酸代谢
Amino Acid Metabolism
The biochemistry and molecular biology department of CMU
第一节
蛋白质的营养作用
Nutritional Function of Proteins
一、蛋白质的主要功能
①维持组织细胞的生长、更新和修补； 维持组织细胞的生长、更新和修补； ②参与催化、运输和代谢调节； 参与催化、运输和代谢调节； ③提供能源。 提供能源。
• 主要是从脑、肌肉等组织向肝或肾运氨。 主要是从脑 肌肉等组织向肝或肾运氨。 等组织向肝或肾运氨
NH3 + ATP
COOH CH2 CH2 CHNH2 COOH
ADP + Pi
CONH2 CH2 CH2 CHNH2 COOH
Gln合成酶 合 （ 脑 、 肌肉 ）
Glu
谷 氨酰 胺 酶 （ 肝、 肾 ） NH3 H2O
氨基酸的来源和去路
NH3 食 物 蛋 白质
消 化 吸 收
肝
尿素 酮体 氧 化 供能 糖
作用 氨基 脱
组 织 蛋白 质
分解 合成
α -酮酸 酮 氨 基酸 代 谢 库 转变 其 他 含氮 化 合物
脱羧 基作 用
体 内 合 成的 非 必 需 氨基 酸
CO2
胺类
一、氨基酸的脱氨基作用
• • • • 转氨基 氧化脱氨基 联合脱氨基 非氧化脱氨基
第三节
氨基酸的一般代谢
General Metabolism of Amino Acid
• 蛋白质降解
– 不依赖 不依赖ATP的过程 的过程 – 依赖 依赖ATP和泛素的过程 和泛素的过程
• 泛素：是一种参与蛋白质降解的小分子蛋 泛素： 白质。 白质。
氨基酸代谢库
• 食物蛋白质经消化吸收产生的氨基酸（外 食物蛋白质经消化吸收产生的氨基酸（ 源性氨基酸） 源性氨基酸）与体内组织蛋白质降解生成 的氨基酸以及其它物质经代谢转变而来的 氨基酸（内源性氨基酸）混在一起， 氨基酸（内源性氨基酸）混在一起，分布 于体内各处，参与代谢，称为氨基酸代谢 于体内各处，参与代谢， 库（metabolic pool）。 ）。
R1
R2
转 氨酶
R1
R2
CHNH2 + C O COOH COOH
C O + CHNH2 COOH COOH
要点： 要点： ①反应可逆。 反应可逆。 和羟脯氨酸外， ②体内除Lys、Pro和羟脯氨酸外，大多数 体内除 、 和羟脯氨酸外 氨基酸都可进行转氨基作用。 氨基酸都可进行转氨基作用。 ③转氨酶均以磷酸吡哆醛为辅酶。磷酸吡 转氨酶均以磷酸吡哆醛为辅酶。 磷酸吡哆醛为辅酶 哆醛是VB 的衍生物。 哆醛是 6的衍生物。反应中起传递氨 基的作用。 基的作用。
二、氮平衡（nitrogen balance） 氮平衡（ ）
氮平衡 状态 氮的总 平衡 氮的正 平衡 氮的负 平衡 进、出氮 情况 摄入氮= 摄入氮= 排出氮 摄入氮＞ 摄入氮＞ 排出氮 摄入氮＜ 摄入氮＜ 排出氮 常见人群
健康成年人
儿童、青春期青少年、 儿童、青春期青少年、孕妇及 恢复期病人 长期饥饿、 长期饥饿、消耗性疾病患者
COOH R H2N CH COOH α-氨基酸 氨 转氨 酶 R C O COOH α -酮酸 酮 CH2 CH2 C O COOH α -酮戊二酸 酮 COOH H2C CH2 H2N CH COOH L-谷氨酸 谷 NADH + H+ + NH3 L-谷氨酸脱氢酶 谷 NAD+ + H2O
Ala + α-酮戊二酸 酮戊二酸
第二节
蛋白质的消化、吸收与腐败 蛋白质的消化、
Digestion, Absorption and Putrefaction of proteins
一、蛋白质的消化
• 胃蛋白酶 • 胰液中的蛋白酶：对肽键有一定的专一性 胰液中的蛋白酶：
– 内肽酶：胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶 内肽酶：胰蛋白酶、糜蛋白酶、 – 外肽酶：羧基肽酶 和羧基肽酶 外肽酶：羧基肽酶A和羧基肽酶 和羧基肽酶B
NH2
氨 甲 酰磷 酸 2ATP 2ADP + Pi
Pi
(CH2)3 CHNH2 COOH
瓜氨 酸
鸟 氨酸 胞液
• 两步反应均不可逆； 两步反应均不可逆； 不可逆 • 氨甲酰磷酸合成酶 Ⅰ(carbamoyl phos氨甲酰磷酸合成酶-Ⅰ phate synthetaseⅠ，CPS-Ⅰ)为变构酶， 为变构酶， Ⅰ Ⅰ 为变构酶 N-乙酰谷氨酸（N-AGA）为此酶的变构激 乙酰谷氨酸（ 乙酰谷氨酸 ） 活剂； 活剂； • 此阶段消耗2个ATP； 此阶段消耗 个 消耗 ；
α-氨基酸 氨 转氨酶 α -酮酸 酮
α -酮戊 酮 二酸
Asp AST
腺苷酸代 琥 珀酸 延胡索酸 苹果酸
谷氨酸
草 酰 乙酸
二、α-酮酸的代谢
合成非必需氨基酸 转变成糖和脂肪 氧化供能
NH3 氨基酸 α -酮酸 酮
脱掉氨基后的α 酮酸可转变成： 脱掉氨基后的α-酮酸可转变成：
α-酮戊二酸 酮戊二酸 琥珀酰 CoA 三羧酸循环中间产物 延胡索酸 草酰乙酸 丙酮酸 乙酰CoA 乙酰 乙酰乙酰 CoA 脂肪酸 酮体 PEP 葡萄糖
COOH
Gln
Glu
NH4 随尿排出
二、氨的转运
• 氨是有毒物质，血中的NH3主要是以无 氨是有毒物质，血中的 两种形式运输的。 毒的Ala及Gln两种形式运输的。 及 两种形式运输的 毒的
（一）丙氨酸-葡萄糖循环 丙氨酸 葡萄糖循环
肌肉 α-酮戊 酮 二酸 谷氨酸 血液 肝 α-酮戊 酮 二酸 谷氨酸 NADH + H+ + NH3 尿素 α-酮酸 酮 丙酮酸 G G 丙酮酸 G NAD+ + H2O
转氨基作用机制
体内重要的转氨酶
①丙氨酸氨基转移酶（alanine amino-transferase, 丙氨酸氨基转移酶（ ALT或glutamic pyruvic transaminase, GPT）： 或 ）： 肝中活性最高 ②天冬氨酸氨基转移酶（aspartate amino天冬氨酸氨基转移酶（ transferase, AST或glutamic oxalo-acetic 或 transaminase, GOT）：心肌中活性最高 ）：心肌 ）：心肌中活性最高 临床意义
实验根据如下： 实验根据如下：
保温数小时， ①大鼠肝切片与NH4+保温数小时，NH4+↓， 大鼠肝切片与 ， 尿素↑； 尿素 ； ②加入鸟氨酸、瓜氨酸和Arg后，尿素 ； 加入鸟氨酸、瓜氨酸和 后 尿素↑； ③上述三种氨基酸结构上彼此相关； 上述三种氨基酸结构上彼此相关； ④早已证实肝中有精氨酸酶。 早已证实肝中有精氨酸酶。
第四节
氨的代谢
Metabolism of Ammonia
氨的来源去路
氨基酸脱氨基 肠道吸收氨 肾脏泌氨 血氨
合成尿素 合成Gln 合成氨基酸 及其它含氮物
一、体内氨的来源
1. 氨基酸脱氨基作用：是主要来源。还有少 氨基酸脱氨基作用：是主要来源。 量胺的氧化。 量胺的氧化。 2. 肠道吸收的氨：4g/日 肠道吸收的氨： 日 ①蛋白质的腐败作用 ②肠道尿素的水解
丙酮酸 + Glu 酮戊二酸+ α-酮戊二酸 NADH + NH4+ 酮戊二酸
Glu + NAD+ + H2O
Ala + NAD+ + H2O
丙酮酸 + NADH + NH4+
（四）嘌呤核苷酸循环
• 肌肉中的脱氨基反应 • 是一种特殊的联合脱氨基作用
嘌呤核苷酸循环
IMP
NH3
H2O AMP
腺 苷酸 脱氨 酶
氨基酸
Ala
Ala
Ala
• 是肌肉与肝之间氨的转运形式。 肌肉与肝之间氨的转运形式。 之间氨的转运形式 • 意义：既使肌肉中的氨以无毒的Ala形式运到肝， 意义：既使肌肉中的氨以无毒的 形式运到肝， 形式运到肝 肝又为肌肉提供生成丙酮酸的葡萄糖。 肝又为肌肉提供生成丙酮酸的葡萄糖。
（二）谷氨酰胺的运氨作用
Gln
• Gln即是氨的一种解毒形式，也是氨的储存 即是氨的一种解毒形式， 即是氨的一种解毒形式 和运输形式。 和运输形式。
CONH2 COOH CH2 CHNH2 COOH CH2 CH2 CHNH2 COOH COOH
ATP AMP + PPi CONH2
CH2 CHNH2 COOH
CH2
+
+ CH2
三、必需氨基酸
•人体营养需要，而又不能自身合成，必须 人体营养需要，而又不能自身合成， 人体营养需要 由食物供应的氨基酸。 由食物供应的氨基酸et、Trp、Thr、Lys。 、 、 、 、 、 。 •蛋白质的互补作用 蛋白质的互补作用 混合食用营养价值较低的蛋白质， 混合食用营养价值较低的蛋白质，则 必需氨基酸可以互相补充， 必需氨基酸可以互相补充，从而提高营养 价值。 价值。
Ala
α-酮戊二酸 酮 ALT
丙酮酸 Asp
Glu α-酮戊二酸 酮 AST
草酰乙酸
Glu
（二）L-谷氨酸氧化脱氨基作用 谷氨酸氧化脱氨基作用
、 C OOH ATP、 GTP ADP、GDP 、
C OOH CH 2 CH 2 +H O CH 2 2 L-谷 氨 酸 脱 氢 酶 谷 CH 2 CH 2 + NH 3 CH 2 -H 2O C O CHNH 2 C NH + COOH NADH+H + COOH COOH NAD + L-谷氨酸 (NADP +) (NADPH+H ) 谷 α -酮 戊 二 酸 酮 COOH