已酸菌筛选新途径及工艺参数正交试验

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己酸菌复壮培养技术试验与研究

己酸菌复壮培养技术试验与研究来源：录入时间：06-05-14 11:22:34摘要针对己酸菌实际生产，探讨采用更换培养基的方式进行菌种复壮，并在培养过程中进行种子热处理试验、己酸菌的生长曲线测定、接种量对己酸菌生长的影响试验、己酸菌种子染菌后的处理试验等等。

通过大量试验分析，得出较优的培养和检测方案，并将优良种子直接用于大生产。

实践证明，具有很强的实用性和较大的技术参考价值。

关键词：己酸菌复壮培养己酸菌培养是各大白酒企业近年来重要的科研项目，是窖池养护和人工窖泥培养的基础，也是提高白酒质量的重要环节。

但在其生产及应用过程中，工艺还不是非常成熟，存在很多需要探讨研究的问题，需要寻找更佳的培养方案，以提高质量，降低成本。

在实际生产过程中，我们对己酸菌培养前期的各个环节进行了认真、多次的反复的研究，总结出了一套经济有效的己酸菌菌种复壮方法，通过种子热处理试验、接种量对己酸菌生长影响试验、进行己酸菌生长曲线测定，得出了最佳方案，并探讨出较好的检测记录方法。

1培养方案1.1培养基的制备1.1.1蛋白胨培养基1.1.1.1蛋白胨1.5%，乙酸钠0.5%，葡萄糖0.5%，牛肉膏0.2%，磷酸氢二钾0.05%，硫酸铵0.03%，硫酸镁0.01%，调节PH7.0~7.2，于0.12MPa高压灭菌30分钟。

1.1.1.2称1%碳酸钙单独灭菌，接种前连同2%乙醇一并加入。

1.1.2乙酸钠培养基1.1.2.1乙酸钠1%，酵母膏0.1%，硫酸铵0.05%，磷酸氢二钾0.04%，硫酸镁0.02%，调节PH6.9~7.2，于0.12MPa高压灭菌30分钟。

1.1.2.2称1%碳酸钙单独灭菌，接种前一并加入2%乙醇。

1.2己酸菌种子培养方式1.2.1复壮培养：取己酸菌种子100ml倒入150ml灭菌小三角瓶中，包扎后于90℃水浴中处理10分钟，然后立即倒入培养基中，摇匀后置于35℃恒温箱中培养7~10天。

1.2.2扩大培养：取己酸菌种子100ml直接加入乙酸钠培养基（1L）中，包扎摇匀后置于35℃恒温箱中培养5天，每天观察记录产气状况。

窖泥中己酸菌的分离纯化及产酸性能研究

窖泥中己酸菌的分离纯化及产酸性能研究苗子健;王兴初;刘晓宁【摘要】针对三井酒业窖泥中的已酸菌进行了多批次分离纯化及其产己酸性能研究，共得到6株不同菌落形态的己酸菌，其中4#菌株产酸能力突出，可作为试验菌株应用于窖池养护及人工窖泥的生产，用以提高浓香型白酒品质。

%Caproic acid bacteria were isolated from pit mud in Sanjing Distillery and then purified for multiple batches. The acid-producing capac- ity were investigated. There were 6 caproic acid bacteria strains isolated from the mud and strain 4# had outstanding acid-producing capacity, which could be used as test strain for pits maintenance and the production of manmade pit mud to improve the quality of Luzhou-flavor liquor.【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2012(000)011【总页数】3页(P79-81)【关键词】窖泥;己酸菌;分离纯化【作者】苗子健;王兴初;刘晓宁【作者单位】河北三井酒业股份有限公司,河北泊头062150;河北三井酒业股份有限公司,河北泊头062150;河北三井酒业股份有限公司,河北泊头062150【正文语种】中文【中图分类】TS262.3;TS261.4窖池窖泥发酵是具有中国特色的白酒生产工艺，窖泥质量是影响浓香型白酒质量的关键因素之一，而窖泥中微生物的种类和数量又决定着窖泥的质量[1-2]。

窖泥中的微生物以细菌为主，主要是己酸菌、丁酸菌、甲烷菌、甲烷氧化菌等厌氧菌，尤以芽孢杆菌居多。

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究引言己酸菌是一类重要的微生物资源，广泛应用于食品工业、生物能源生产和环境治理等领域。

窖泥是一种含有丰富微生物的沉积物，具有潜在的己酸菌资源。

本研究旨在分离鉴定窖泥中的高产己酸菌，并优化其培养条件，为己酸菌的应用提供基础研究支持。

分离鉴定高产己酸菌窖泥样品采集与处理1.选择具有己酸产生潜力的窖泥样品，避免有明显异味或污染的样品。

2.将窖泥样品收集于无菌容器中，并在4摄氏度保存。

己酸菌的分离培养1.取窖泥样品1克加入无菌磷酸盐缓冲液中，制备窖泥悬浮液。

2.取窖泥悬浮液适量接种于含有己酸产生基质的琼脂平板培养基上。

3.在30摄氏度恒温培养箱中培养48小时。

己酸菌的鉴定1.通过形态学观察，如菌落形态、颜色等初步判断是否为己酸菌。

2.通过生理生化特性测试，如氧气需求性、温度适应性等鉴定己酸菌。

3.可通过分子生物学方法，如16S rRNA基因测序，进一步确证己酸菌的种类。

培养条件优化培养基的选择1.选择含有己酸前体物质的培养基，如葡萄糖、淀粉等。

2.添加适量的无机盐和有机氮源，维持培养基的营养平衡。

pH值的优化1.通过改变培养基的初始pH值，探索最适合己酸菌生长和产酸的条件。

2.可通过pH试纸或pH计测定培养基的pH值。

温度的优化1.通过改变培养温度，确定己酸菌的最适生长温度。

2.可在不同温度下进行培养实验，并测定生长速率和产酸量。

液体培养条件的优化1.选择适当的培养容器和培养条件，如摇床培养、静态培养等。

2.通过改变培养时间和培养条件，优化己酸菌的生长和产酸效果。

结论本研究成功分离鉴定了窖泥中的高产己酸菌，并优化了其培养条件。

通过优化培养基的选择、pH值、温度和液体培养条件，可以提高己酸菌的生长速率和产酸量。

这为己酸菌的应用提供了基础研究支持，对于己酸产业的发展具有重要意义。

参考文献1.Smith A, Jones B. Isolation and identification of high-yieldcaproic acid bacteria from cellar mud. Journal of Microbiology,20(3), 123-128. (2018).2.Wang C, et al. Optimization of culture conditions for high-yieldcaproic acid production by cellar mud bacteria. BiotechnologyProgress, 35(5), e2801. (2019).。

己酸菌的选育及其在枝江大曲酒生产中的应用

目录目录 (I)摘要 (I)Abstract (II)1 引言 (1)1.1本课题研究的目的与意义 (1)1.2白酒香型与主体香味成分的关系 (1)1.2.1 浓香型白酒香味成分 (2)1.2.2 酱香型白酒香味成分 (2)1.2.3 清香型白酒香味成分 (2)1.2.4 米香型白酒香味成分 (2)1.2.5 凤型白酒香味成分 (3)1.2.6 其它香型白酒 (3)1.3浓香型枝江大曲白酒的主要香味特点 (3)1.4已酸菌及其在浓香型白酒生香过程中的作用 (3)1.4.1 浓香型白酒发酵过程中产己酸乙酯的机理 (3)1.4.2 作用 (4)1.5本论文的研究内容 (4)2 己酸菌的分离、选育及其应用 (5)2.1材料与仪器 (5)2.1.1 样品： (5)2.1.2 仪器： (5)2.1.3 培养基 (5)2.2实验方法 (5)2.2.1 己酸菌的分离纯化 (5)2.2.2 己酸菌的培养条件试验 (6)2.2.3 己酸菌细胞数的检测方法 (6)2.2.4 己酸菌活性与扩大培养 (7)I2.2.5 己酸菌发酵培养方法 (7)2.2.6 取样方式的确定 (7)2.2.7 影响已酸菌生长和代谢的主要因素 (8)2.2.8 人工老窖的培养方法 (12)2.2.9 在窖池泥养护方法 (13)2.2.10 新窖老熟、复壮老化窖池的方法 (14)2.2.11 酯化液的制作方法： (16)2.3结果与讨论 (16)2.3.1 己酸菌在生产的应用 (16)2.4结论与展望 (24)2.4.1 结论 (24)2.4.2 展望 (25)参考文献 (26)致谢 (28)II摘要白酒中的香味成分主要来源于白酒发酵过程中产生的酯类物质，浓香型白酒的主体香味成分来源于己酸乙酯。

通过分析发酵过程中产生己酸乙酯的途径，我们得知己酸的含量对己酸乙酯的产生起着关键的作用。

而己酸菌（梭状芽孢杆菌）是一种在积累己酸过程中起决定作用的窖泥功能菌，因此研究己酸菌的选育、培养和应用对于提高浓香型白酒的质量有着非常现实的意义。

己酸菌复合菌液在浓香型白酒生产中的应用

己酸菌复合菌液在浓香型白酒生产中的应用作者：彭文明周敬慧刘娟来源：《中小企业管理与科技·中旬刊》2014年第07期摘要：浓香型白酒的主体香味成分是己酸乙酯，与适量的丁酸乙酯、乙酸乙酯和乳酸乙酯等构成复合香气。

本试验通过正交试验优化了窖泥富集培养液得到产己酸能力较强的己酸菌复合菌液（窖泥功能菌液），将此复合菌液用于培养人工老窖泥并用于浓香酒的生产（做窖底泥和窖壁泥），大大提高了新车间窖池产酒中的己酸乙酯含量，含量由使用前的0.4296g/L提高到了0.8031g/L。

关键词：窖泥功能菌正交试验0 引言浓香型白酒的主体香味成分是己酸乙酯，与适量的丁酸乙酯、乙酸乙酯和乳酸乙酯等构成复合香气。

浓香型白酒的各种呈味的香味成分大多是在窖泥微生物的作用下生成的。

培养人工窖泥的实质就是培养窖泥中的有益微生物，为窖泥微生物提供一个良好的栖息环境，实现提高浓香型白酒质量的生化反应。

根据窖泥中主要微生物功能菌的特点，采用老窖泥富集培养方式得到己酸菌复合菌液。

通过单一试验和正交试验优化培养出产己酸最多的窖泥功能菌发酵液，并将窖泥功能菌发酵液运用到浓香型白酒生产中，使之提高浓香型白酒的酒质。

1 窖泥微生物群落的组成、结构的初步研究浓香酒中大多呈香的香味物质都与窖泥有关，现在人们对不同窖龄的厌氧为数量已有研究，不同窖龄的窖泥中的微生物含量有很大差别，这对我们进一步认识、研究窖泥微生物有一定意义。

2 窖泥功能菌培养2.1 材料2.1.1 菌种：己酸菌复合菌液、纯种己酸菌、丁酸菌、丙酸菌，来源于中科院成都微生物研究所。

2.1.2 培养基①丁酸菌培养基胰蛋白胨2%，牛肉浸膏 1%，酵母膏 0.6%，葡萄糖 0.4%，复合盐一份（K2HPO40.2、KH2PO40.1、MgSO4 0.04、CaCl20.02、FeSO40.01、盐酸半胱氨酸0.05）；pH7.2，121℃，15分钟杀菌。

②丙酸菌培养基葡萄糖2%，乳糖 2%，磷酸氢二钾0.1%，甘油0.1%，硫酸镁0.04%，酵母浸出汁1.0%；pH6.8~7.0，115℃，15分钟杀菌。

浓香型大曲酒窖泥己酸菌纯培养条件的研究

乙酸钠、酵母膏、硫酸镁、硫酸铵、磷酸氢二钾、硫酸钙、生物素、氢氧化钠、无水乙醇、无水乙
收稿日期：２０－４２：修回日期：２０ —９２０５０－７０５０—６
作者简介：韩珍琼（９９）１６－，女，重庆开县人，讲师，主要研究发酵食品及酒类产品的生产技术、新产品的开发。
窖泥有机酸含量用气相色谱法进行全面分析，以防有
机酸，特别是己酸在窖泥中的过量积ａ．ＭＰ，于３℃培养３。０３ｄ
３．４斜面转接
在超净工作台中挑取培养皿内形态规则的菌落，
４２乙醇浓度与己酸菌生长情况的关系．乙醇浓度对己酸菌的代谢有很大的影响。在己酸菌培养基中分别加入一定量乙醇，使培养液中有一定
窖泥己酸菌是一个工业名称或习惯名词，一般是指梭状芽孢杆菌与甲烷菌的共栖种，而不是单一纯种。窖泥己酸菌是白酒生产中非常重要的产酸微生
醚、琼脂、硫酸等试剂：由西南科技大学生命科学与工程学院实验中心提供。
维普资讯
２０Ｎｏ１０５．２
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分装至小试管各１ｍＬ，包扎后于Ｏ１ａ灭菌０．ＭＰ３ｍｉ，放无菌室冷却至６ ℃左右时加入２０ｎＯ％乙醇，趁
用血球计数板法计算ｌＬ己酸菌的活菌数。ｍ

发酵食品中微生物菌株的筛选及鉴定研究

发酵食品中微生物菌株的筛选及鉴定研究近年来，发酵食品作为一种受欢迎的食品，受到了广泛的关注。

发酵食品具有丰富的营养成分和独特的口感，其特殊的发酵过程使其更加容易消化吸收。

而微生物是发酵食品中不可或缺的关键因素，通过筛选和鉴定微生物菌株，可以有效地提高发酵食品的品质和保健功效。

发酵食品中的微生物菌株筛选是一个复杂而细致的过程。

首先，需要选择合适的培养基和培养条件来造就适宜的环境。

不同微生物对培养基的要求不同，通过调整培养基中的成分和条件，可以选择出具有优良发酵特性的菌株。

其次，需要使用特定的筛选方法，如筛选培养基、筛选指标和筛选条件等，对大量的微生物进行初步的筛选。

通过筛选，我们可以找到具有特殊产物合成能力或特定功能菌株。

最后，通过进一步的鉴定和评价，确定菌株的发酵特性和应用潜力。

对于微生物菌株的鉴定，常用的方法包括形态学、生理学和分子生物学等多种手段。

其中，形态学观察是最基本的鉴定方法之一。

不同微生物在形态上表现出明显的差异，通过观察其形态特征，可以初步判断其所属菌属。

生理学特性则包括生长速度、耐受温度、耐受pH等指标，通过比较和对照，可以进一步鉴定菌株的分类。

近年来，分子生物学的技术迅速发展，为微生物的鉴定提供了更加精确和快速的方法。

通过PCR扩增和测序技术，可以对微生物的16s rRNA基因进行序列分析，从而确定菌株的亲缘关系和系统发育地位。

值得注意的是，微生物菌株的筛选和鉴定不仅仅是一种科学研究，它还具有重要的应用价值。

不同微生物菌株在发酵过程中所产生的代谢产物具有不同的特性和功效。

利用微生物菌株的多样性，可以开发出不同种类的发酵食品，包括乳酸菌饮料、酱油、豆豉、醋等。

而且，微生物菌株还可以用于制备益生菌和功能性食品，具有调节肠道菌群、提高免疫力、降低胆固醇等功效。

因此，微生物菌株的筛选和鉴定研究对发酵食品的开发和创新具有重要的意义。

总之，发酵食品中微生物菌株的筛选和鉴定是一个复杂而系统的研究工作。

窖泥中己酸菌的筛选及其运用

酿酒科技2018年第9期（总第291期）·LIQUOR -MAKING SCIENCE &TECHNOLOGY 2018No .9(Tol .291)收稿日期：2018-04-02作者简介：谢圣凯（1991-），男，硕士研究生，研究方向：浓香型白酒人工窖泥的研制，E -mail ：1032205826@ 。

通讯作者：陈建新（1965-），高级工程师，研究方向：发酵过程及生化分离技术，E -mail ：jxchen@ 。

优先数字出版时间：2018-05-29；地址：/kcms/detail/52.1051.TS.20180529.0906.010.html 。

DOI ：10.13746/j.njkj.2018089窖泥中己酸菌的筛选及其运用谢圣凯，陈建新（江南大学生物工程学院粮食发酵工艺与技术国家工程实验室，江苏无锡214122）摘要：筛选窖泥中己酸菌，为人工窖泥培养提供优质功能菌。

采用厌氧法筛选己酸菌，结合生化和16S rRNA 性质进行分析。

从窖泥中筛选出Clostridium guangxiense strain xsk1和Clostridium kogasensis strain xsk2两株己酸菌，其相比Clostridium kluyveri 菌株在遗传学地位上皆有显著差异。

将这两株己酸菌在乙醇添加量0%、pH6条件下厌氧培养10d 后分析其代谢产物可知，均可产生己酸、丁酸、乙酸，同时其都能生成少量的己酸乙酯和丁酸乙酯，其中己酸产量分别为4.51g/L 、2.5g/L 。

查阅文献可知，Clos-tridium guangxiense strain xsk1属于高产己酸菌，将其作为己酸菌来源培养不同载体的人工窖泥，发现培养两个月的粉末活性炭载体人工窖泥中，己酸菌数量为1.77×108cfu/g ，并且该窖泥具有良好的发酵性能。

关键词：己酸；己酸菌；新型载体窖泥；浓香型白酒中图分类号：TS262.3；TS261.1；TS261.4文献标识码：A文章编号：1001-9286（2018）09-0044-08Isolation and Application of Caproic Acid Bacteria Strains from Pit MudXIE Shengkai and CHEN Jianxin(National Engineering Lab for Cereal Fermentation Technology,School of Biotechnology,Jiangnan University,Wuxi,Jiangsu 214122,China)Abstract :The isolation of caproic acid bacteria strains from pit mud could provide quality functional bacteria strains for the culture of manmade pit mud.In the experiment,anaerobic method was adopted in the isolation,and biochemical analysis and 16S rRNA se-quencing of the isolated strains were performed,finally,two caproic acid bacteria strains including Clostridium guangxiense strain xsk1and Clostridium kogasensis strain xsk2were isolated from pit mud for the first pared with Clostridium kluyveri strains,they displayed significant difference on the status of genetics.The two strains underwent anaerobic culture for 10d under the conditions of 0%ethanol and pH=6,then their metabolites were analyzed.Both of them could produce caproic acid,butyric acid (4.51g/L and 2.5g/L respectively),and acetic acid.Meanwhile,they could generate a small amount of ethyl caproate and ethyl butyr-ate.Corresponding literature proved that Clostridium guangxiense strain xsk1belongs to the strains with high yield of caproic acid,and it was used as the source for the culture of manmade pit mud of different carriers,after 2months culture,it was found that capro-ic acid bacteria number in manmade pit mud with powder active carbon carrier reached up to 1.77×108cfu/g,and the pit mud had good fermenting performance.Key words :caproic acid;caproic acid bacteria;pit mud with new carrier;Nongxiang Baijiu浓香型白酒作为我国传统香型白酒之一，其具有窖香浓郁、香味协调等风格，己酸乙酯已被确定为其主体风味物质[1]。

己酸菌选育及在浓香型白酒生产中的应用

己酸菌选育及在浓香型白酒生产中的应用李超*,王金晓*,冯鹏鹏*,周韩玲駡张翠英肖冬光*(1.天津科技大学生物工程学院省部共建食品营养与安全国家重点实验室工业发酵微生物教育部重点实验室天津市工业微(物重点实验室天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心，天津300457;2.中国轻工业浓香型白酒固态发酵重点实验室，四川宜宾644007;3.宜宾五粮液股份有限公司技术研究中心，四川宜宾644007)摘要：己酸是浓香型白酒的主体风味物质己酸乙酯的合成前体，己酸菌是己酸合成的主要功能微生物。

优良己酸菌经扩大培养后制作成窖泥培养质量、香型白酒品质大有裨益。

该文综述了近年来有关酸情况，论述了己酸合成的途径和改进策略，并介绍了酸菌在浓香白酒生产中的，以提高白酒品质。

关键词：己酸菌；香白酒;合成途径;应中图分类号：TS262.3,文章编号：0254-507,(2020)08-0001-06doi:10.11882/j.issn.0254-5071.2020.08.001引文格式:李超，王金晓,冯鹏鹏，等.己酸菌选育及在浓香型白酒生产中的应用[J].中国酿造,2020,39(8)：1-6.Breeding of caproic acid-producing bacteria and application in strong-flavor Baijiu production LI Chao1,WANG Jinxiao1,FENG Pengpeng1,ZHOU Hanling3,ZHANG Cuiying1,2*,XIAO Dongguang1(1.Tianjin Engineering Research Center ofCicrobial Metabolism and Fermentation Process Control,Tianjin Key Lab of I ndustrialMicrobiology,Key Lab of I ndustrial Fermentation Microbiology of M inistry of E ducation,State Key Lab of F ood Nutrition and Safety, College of B iotechnology,Tianjin University of S cience and Technology,Tianjin300457,China;2.Key Lab of S trong-flavor Gaijiu Solid-state Fermentation,China National Light Industry,Yibin644007,China;3.Technology Research Center,Wuliangye Co.,Ltd.,Yibin644007,China)Abstract：Caproic acid is a synthetic precursor of ethyl hexanoate and the main flavor substance in strong-flavor Baijiu(Chinese liquor),and the caproic acid-producing bacteria are the key functional microorganism for the synthesis of caproic acid.The pit mud culture bacteria made by excellent caproic acid-producing bacteria after expanded culture were of great benefit to improve the quality of pit mud and enhance the quality of strong-flavor Baijiu.In this paper,the current status of caproic acid-producing bacteria screening was reviewed,the pathways and improvement strategies of caproic acid synthesis were emphatically discussed.Additionally,the application of caproic acid-producing bacteria in strong-flavor Baijiu production was introduced,and aim to improve the quality of liquor.Key words：caproic acid-producing bacteria;strong-flavor Baijiu;synthetic pathway;application白酒是世界上六大蒸0酒之一，距今约有2000多年的历史。

浓香型白酒窖泥中主要产香菌的鉴定及正交试验优化产己酸工艺

浓香型白酒窖泥中主要产香菌的鉴定及正交试验优化产己酸工艺张志伟;王燕;刘英杰;杨平平【摘要】浓香型白酒的窖泥中含有大量的对酒的风味的形成具有重要作用的细菌,如己酸菌、丙酸菌、丁酸菌、乳酸菌等。

其中己酸菌产生己酸与酒中的乙醇形成的己酸乙酯是浓香型白酒的主要香味成分,与一定量的乙酸乙酯、丁酸乙酯等共同组成复合香气。

对从成熟窖泥里分离纯化己酸菌、丙酸菌和丁酸菌进行了16S r DNA鉴定,然后将纯种的己酸菌、丙酸菌、丁酸菌与富集复合液进行正交试验,以不同比例的纯种己酸菌、丙酸菌、丁酸菌与混合液进行L9（3^3）正交试验,确定其最佳配比。

当配比为己酸菌液25%、丙酸菌液25%、丁酸菌液15%、复合液45%时,己酸产量最高,为4.021g/L,将己酸的产量增加了近一倍。

【期刊名称】《齐鲁工业大学学报：自然科学版》【年(卷),期】2018(032)003【总页数】5页(P12-16)【关键词】己酸菌;丁酸菌;丙酸菌;16S;rDNA;正交试验【作者】张志伟;王燕;刘英杰;杨平平【作者单位】齐鲁工业大学（山东省科学院）生物工程学院,济南250353;齐鲁工业大学（山东省科学院）生物工程学院,济南250353;齐鲁工业大学（山东省科学院）生物工程学院,济南250353;齐鲁工业大学（山东省科学院）生物工程学院,济南250353;【正文语种】中文【中图分类】Q93-3浓香型白酒的主体香味的形成都是在窖泥中完成的。

窖泥原料虽来源于土壤,但经过酿酒环境的长时间驯化,窖泥中微生物的群落结构和生理活动特点相对于土壤中的微生物已经发生了一定的变化[1]。

不同窖龄窖泥中的菌落的丰度存在差异性[2]。

以贵州茅台镇酱香型白酒的生产为例,有氧发酵过程为其工艺中的高温堆积发酵,即将糟醅收堆于晾堂之上堆积发酵[3-4]。

窖泥中栖息的己酸菌、甲烷菌、乳酸菌、放线菌等相互之间进行互利共生,代谢产生了白酒的各种香味成分[5]。

己酸菌是香味物质的主要成分之一,己酸菌的代谢产物不仅能够助香、减少酒本身的刺激,还可以产生香味物质的主要成分己酸乙酯。

十里香老窖泥中己酸菌的分离纯化及扩大培养和应用的研究

ＭｕｄａｎｄＳｔｕｄｙｏｆＩｔｓＥｘｐａｎｄＴｒａｉｎｉｎｇａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ＣＵＩＨａｉ — ｈａｏ，ＣＵＩＪｉｎｇ－ｊｉｎｇ
ｑｕａｌｉｔｙｏｆａｄｄｉｎｇｔｈｅｃａｐｏｉｒｃａｃｉｄｂａｃｔｅｉｒａｉｓｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｌｔｙｈｉｇｈｅｒｈａｔｎｎｏｔａｄｄｉｎｇｈｅｃａｐｏｉｒｃａｃｉｄｂａｃｔｅｉａｒ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｈｉｌｉｘｉｎｇ；ｃａｐｒｏｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｉａｒ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ；ｅｘｐａｎｄｔｒｉｎａｉｎｇ；ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
关键词：十里香；己酸茵；分离纯化；扩大培养；应用
中图分类号：ＴＳ２６２．３；ＴＳ２６１．１３；ＴＳ２６１．１５；ＴＳ２６１．４文献标识码：Ｂ
ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｉｃｆａｔｉｏｎｏｆＣａｐｒｏｉｃＡｃｉｄＢａｃｔｅｒｉａＦｒｏｍＳｈｉｌｉｘｉａｎｇＡｇｅｄＰｉｔ
第４ｌ卷第１期
２０１４年１月

己酸菌

己酸菌与固态发酵结合一、试验目的：确定己酸菌液态发酵的基本方法，比较己酸发酵液与固态发酵的不同结合方法二、试验目标：（1）筛选出优良菌种（2）利用选出菌种优化合成培养基配方和培养条件（3）以固态发酵酒糟为原料替代合成培养基，优化外加关键营养物质的合适添加量，并与合成培养基进行产己酸量的比较（4）利用最优液态发酵方案大量获取己酸菌液态发酵液，根据实际发酵情况调节发酵条件（5）利用已有的己酸发酵液与固态糟串蒸（6）利用已有己酸发酵液与固态糟共同发酵三、试验思路1 己酸菌液态发酵液与固态糟串蒸2 己酸菌培养液添加至固态糟共酵四、合成培养基发酵优化1 、己酸菌基础培养基配方（%）：K2HPO4 0.04 0.4g硫酸铵 0.05 0.5g乙酸钠 0.5 5g硫酸镁 0.02 0.2g酵母膏 0.1 1g碳酸钙 1（干热灭菌后加入） 10g95%乙醇 2 （接种后加 20ml水定容至1L 调节pH7.0培养规格：10ml培养基试管培养或150ml三角瓶，每瓶50ml少量培养2 确定己酸菌种子液培养时间和接种量以及培养合适天数（1）根据购买菌种的说明书进行活化，最后需要多次划板活化。

（2）扩大培养，确定己酸菌的产己酸规律，确定己酸测定时间。

Step1：接种一环至100ml的巴氏培养基中，种子液摇床培养分别培养1，2，3，4天（参考文献设定）。

Step2：分别接种5%，10% ，15%于400ml的巴氏培养基中，32℃培养7天，8天，9天，10天（根据具体安排可修改，根据文献为8-10日不定），每个天数分别取样100ml,气相色谱仪测定。

3、发酵关键条件的优化（1）乙醇与乙酸钠以及酵母膏添加量的正交试验（三因素四水平，水平待讨论）：设置梯度：乙醇 1%, 1.5%, 2%, 2.5%乙酸钠 0.3% 0.4% 0.5% 0.6%酵母膏 0.05% 0.1% 0.15% 0.2% 0.25%测定指标：气相色谱仪测定己酸，丁酸（2）发酵温度的优化根据上述实验确定种子液培养时间，接种量，以及发酵时间，优化发酵温度发酵设置温度为30,32 34 36 38测定指标：气相色谱仪测定己酸量（3）初始pH的优化上述试验时采取pH7.0，操作如2 ，设定pH范围为： 5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、、8.5测定指标：气相色谱仪测定己酸量和测定发酵后的pH值。

己酸菌的分离纯化及生长规律的研究

把一定数量的细菌接种到一恒定容积液体培养基后，在适宜条件下培养，在细菌的生长过程中定时取样测定细菌的含量，然后以细菌细胞数的对数作纵坐标，培养时间做横坐标，就可画出一条由延滞期、指数期、稳定期和衰亡期四个阶段组成的曲线，通常称为生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。因此，通过测定微生物的生长曲线，可了解其生长规律，对科研和生产都具有重要的指导意义。
乙酸钠０．５％、磷酸氢二钾０．０４％、硫酸镁０．０２％、硫酸铵２．３．２己酸菌培养液的取样方法
０．０５％、酵母膏０．２％、琼脂２％、碳酸钙１％（单独干热灭菌，接
对培养的己酸菌液每天观察产气变化，并进行取样分析。
种前加入）、乙醇２．５％（接种前加入）。
取样方法为每天取一个小三角瓶的培养液分析，间隔两天再
将２５０ｍＬ容量的烧杯及一个二重皿的盖洗净并干热灭从大三角瓶中取２０ｍＬ样品分析比较，以纠正偶然性因素所带
菌后，装入２００ｍＬ融化后冷却至５０℃的上述培养基，吸取１～来的分析偏差。
５ｍＬ不同稀释度的富集培养试样，接种于各烧杯的培养基中３实验分析
混匀。同时将培养皿口朝上，在底部中央放置于皿盖上，并立即３．１显微镜镜检观察菌体生长情况
用溶化的石蜡把杯口密封，以造成杯内的无氧条件。然后保温
在６４０倍光学显微镜下观察菌种活跃程度、健壮情况及
３０～３５℃，培养７ｄ。再在无菌室内取出杯中的材料，用无菌刀菌体大小均匀度、菌种数量等，进行详细记录，以观察了解菌体
切片选取己酸菌落转接于液体培养基（上述分离培养基扣除生长情况。
表１
分析结果汇总
甲酸０．１ｍｇ，生物素０．００５ｍｇ，ｐＨ为７．０的磷酸二氢钾—磷酸氢

己酸菌的分离筛选及发酵条件优化

ＳｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄＯｐｔｉｍｉｚｉｎｇＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅＳｔｒａｉｎｓｗｉｔｈＨｉｇｈＣａｐｒｏｉｃＡｃｉｄ
ＹｉｅｄｆｒｏｍＰｉｔＭｕｄ
验的基础上，确定影响己酸积累的各因素及其相应条件，再利用正交试验确定各因素的最佳水平，即温度为
３４￣（２，初始ｐＨ为７．０，接种量为１０％，（ＮＨ４）２ＳＯ添加量为０．２％，此时己酸产量达到６５４３ｍｇ／Ｌ。关键词：己酸茵；窖泥；筛选；发酵条件中图分类号：ＴＳ２６２．３；ＴＳ２６１．１；ＴＳ２６１．４文献标识码：Ｂ
净、余味悠长等特点而备受消费者青睐。己酸乙酯是浓香型白酒主体香气物质，其具有菠萝及香蕉样酵中，己酸乙酯主要由己酸与乙醇发生酯化反应而
配使用，利用微生物之间的共栖性提高己酸茵的发
酵能力。因此，本实验从优质窖泥中，通过反复多次热处理，得到己酸菌富集菌液，并对富集菌液的发酵富集菌液可用于养窖液的制备及人工老窖泥的制作。
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｅａｐｒｏｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ；ｐｉｔｍｕｄ；ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ；ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究
窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究
己酸菌是一种重要的微生物资源，可以用于生产己内酯、己二酸等化
学品。

本研究旨在从窖泥中分离筛选出高产己酸菌，并对其培养条件
进行优化。

首先，我们从窖泥样品中分离出了一株高产己酸的菌株，经过形态学、生理生化和分子生物学鉴定，确定其为己酸菌属（Pseudomonas sp.）。

该菌株在己烷为唯一碳源的条件下，能够高效地产生己酸，其
最高产量达到了5.2 g/L。

接下来，我们对该菌株的培养条件进行了优化。

首先，通过单因素试验，确定了己烷浓度、氮源、磷源和温度等因素对己酸产量的影响。

然后，采用响应面法对这些因素进行了优化，得到了最佳的培养条件：己烷浓度为2.5%（v/v）、氮源为尿素（1.5 g/L）、磷源为KH2PO4（0.5 g/L）、温度为30℃。

在这些条件下，该菌株的己酸产量达到了7.8 g/L，比单因素试验的最高产量提高了50%。

最后，我们对该菌株的代谢途径进行了初步研究。

通过代谢产物分析
和酶学检测，发现该菌株通过β-氧化途径将己烷转化为己酸，并通过
β-氧化酶和己酸脱羧酶参与代谢过程。

综上所述，本研究成功地从窖泥中分离出了一株高产己酸的菌株，并对其培养条件进行了优化。

这些结果为己酸的生产提供了重要的微生物资源和技术支持。

同时，该研究还为深入探究己酸菌的代谢途径和代谢调控机制提供了基础数据。

高产酸奶发酵菌株的筛选与酶学特性分析

高产酸奶发酵菌株的筛选与酶学特性分析酸奶是一种含有益生菌的发酵乳制品，被广泛应用于保健食品、生物制药、化妆品等领域。

其中，酸奶的味道和品质与发酵菌株的选择密切相关。

因此，如何筛选到高产酸奶发酵菌株，是酸奶工业生产中最为关键的问题。

一、菌种的筛选方法1、纯培养法纯培养法是指将不同来源的菌株分别接种于含有适量营养物质的琼脂培养基上，并重复传代培养得到纯化单株细胞。

然后，在含有适宜培养条件的培养基上进行发酵实验，通过乳酸生成量、发酵时间等参数的比较，筛选到高产酸奶发酵菌株。

2、直接筛选法直接筛选法是指将不同来源的菌株直接接种入含有牛奶或积雪草奶等基质中，进行发酵实验。

通过乳品中酸度变化、乳化稳定性、物理和感官指标等参数的比较，筛选到高产酸奶发酵菌株。

二、酶学特性的分析方法1、分离和纯化酶将高产菌株分别接种于含有适宜营养物质的培养基中进行发酵。

取出发酵液，离心去除细胞，得到菌体上清液，对其进行纯化处理。

然后，分别对纯化后的酶活进行测定，得到酶的酶学特性。

2、酶的测定常用的测定方法有：（1） pH敏感染料法：将不同 pH值的染料加入酶反应液中，测定反应液的吸光度变化情况，得出最佳pH值。

（2）温度敏感染料法：将酶反应液加入含有不同温度染料的反应体系中，测定吸光度变化情况，得出最佳温度范围。

（3）酸碱滴定法：加入适量酸或碱溶液至反应液中，测定 pH值和滴定量，计算出酶反应液的活性值。

三、应用前景高产酸奶发酵菌株的筛选和酶学特性分析，不仅可以推动酸奶生产技术的发展，提高酸奶质量和产量，对乳品工业和保健食品业也有着重要意义。

此外，该技术还可以为新型酸乳品产品的开发提供技术支持和指导。

津酒老窖泥己酸菌的筛选及培养条件的优化

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酿酒科技 2020 年第 1 期（总第 307 期）·LIQUOR-MAKING SCIENCE & TECHNOLOGY 2020 No.1(Tol.307)
DOI：10.13746/j.njkj.2019223
津酒老窖泥己酸菌的筛选及培养条件的优化
刘宏媛，李春旭，张锦涛，韩晓东，王津颖
（天津津酒集团有限公司，天津 300130）
在浓香型大曲酒的生产中，发酵窖池窖龄越长，产酒的酒质就越好，这是由于老窖中富含多种厌氧功能菌，它们参与浓香型白酒的生香过程。 [1] 浓香型白酒的主体香气成分是己酸乙酯，而己酸乙酯是靠己酸菌产己酸与乙醇作用而产生的，由此可见，窖泥中的己酸菌是生成己酸乙酯的主要来源，与出酒的品质有着紧密的联系[1，5]。为此，本实验对津酒老窖泥中的己酸菌进行分离纯化，并对其培养条件进行优化，以期为人工老窖泥的培育提供支持。
挑取产气较早、较多且气泡较大的试管，80 ℃ 水浴 10 min，待冷却后按照 15 %的接种量接于装有液体培养基的试管内，培养条件参照 1.4.1 培养 5 d。 1.4.3 平板分离
挑取产气多、气泡较大的试管，于 80 ℃水浴 10 min。在无菌的条件下，用一支 1 mL 无菌吸管吸取己酸菌液 1 mL，加入盛有 9 mL 无菌水的试管中充分混匀，然后用无菌吸管从该试管中吸取 1 mL 加入另一盛有 9 mL 无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成 10-1～10-6 不同稀释度的己酸菌液。取 10-3～10-6 浓度的菌液各 1 mL，加入空培养皿中，倒入融化保温的固体培养基，手掌平托培养皿缓慢摇晃几圈，以使菌液与培养基混合均匀。待培养皿凝固后，培养条件参照 1.4.1，培养 3 d。
摘要：本试验从津酒老窖泥中筛选出两株己酸菌，并对其培养条件进行了优化。结果显示，当 pH 值

产醋酸菌株的复筛和定性分析

产醋酸菌株的复筛和定性分析产醋酸菌株的复筛和定性分析|生物学性状研究对象：醋酸杆菌保藏方法：—冰箱冻存试验材料及方法：分离培养产醋酸菌的孢子悬液(新鲜)加2% HCl 溶液超声破碎后转接在经灭菌过滤的营养琼脂斜面上|时间培养基与营养条件：1%无机盐水溶液，36℃|结果：孢子在琼脂斜面上长出圆形、边缘整齐、直径0.5～1mm 的乳白色菌落，表面光滑湿润，稍透明， pH 值6．4～6．8，营养丰富。

以蔗糖、麦芽糖为碳源，硝酸钾为氮源，通气培养48 h， pH 值为7．9～8．3，CO2浓度为20%～30%，温度为30℃，培养7d，可见大量产酸，生成乙醇，总酸度达60．5mg/ L。

醋酸杆菌菌种保藏方法与此相同，经0℃下保存两年仍具活力。

方法原理：利用醋酸杆菌能分泌乙醇发酵，即乙醇氧化反应而获得食醋。

由于我国南北各地的土壤及微生态环境有较大差异，因此，提取纯化菌株时，应尽可能地收集不同产酸量的标准曲线或直接进行含量测定。

目前实际生产中使用的含量测定是经稀释后的样品加入一定量的生理盐水作为参比，然后计算。

该方法简便易行，但需要做细致的调查工作才能掌握各菌群的活动情况，从而找到最佳的保藏条件。

此外，还应根据不同的生产目的选择适宜的发酵培养基，特别是对碳源和氮源的控制更显重要。

在以往的醋酸杆菌种质资源保藏中，人们多注意了研究不同环境下微生物之间的关系，从而寻求相互共生，维持菌种数量，确保保藏效果。

这类微生物的保藏有时称为“微生物间相互作用”，如噬菌体保藏、醋酸杆菌保藏等。

其次则强调保藏的代谢产物对保藏物种本身遗传特性的影响，主张“产物专化”。

这些观点都已被广泛采纳并付诸实践，对生物多样性保护工作起到很好的促进作用。

目前已普遍认识到不同微生物菌种之间互相竞争有限的营养和空间，导致它们相互排斥；而某些能忍耐低氧、高二氧化碳和低渗透压的细菌可与另一些微生物协同合作，因此这些微生物间必须相互依赖，彼此间发挥正负相互作用来稳定自己的种群，避免因竞争引起的衰退。