2011。5。24药敏
药敏试验方法
一、纸片扩散法该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。
同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
二、稀释法稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。
实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.2.1 琼脂稀释法首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。
再接种待测菌株，然后是结果判读。
2.2 肉汤稀释法三、抗生素浓度梯度法四、自动化仪器法一、实验材料普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头二、实验准备2.1 药敏片的准备：购买或自制2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
药敏试验判定标准
测肠球菌高水平耐药 300 6 7—9 ≥10
测其他细菌 10 ≤11 12—14 ≥15
妥布霉素 10 ≤12 13-14 ≥15
大观霉素
测淋病奈瑟菌 100 ≤14 15—17 ≥18
新霉素 30 ≤12 13-16 ≥17
大环内酯类
阿齐霉素 15 ≤13 14-17 ≥18
测嗜血杆菌 -- -— ≥12
针对病原菌 ug/片 耐药R 中介I 敏感S
抗生素 纸片含量 抑菌环直径
针对病原菌 ug/片 耐药R 中介I 敏感S
庆大霉素
测肠球菌高水平耐药 120 6 7—9 ≥10
测其他细菌 10 ≤12 13-14 ≥15
卡那霉素 30 ≤13 14-17 ≥18
乙基西梭霉素（奈替米星） 30 ≤12 13-14 ≥15
测肺炎链球菌以外的
其他链球菌 ≤13 14—17 ≥18
克拉霉素 15 ≤13 14—17 ≥18
测嗜血杆菌 ≤10 11—12 ≥13
测链球菌 ≤16 17—20 ≥21
红霉素 15 ≤13 14-22 ≥23
测链球菌 ≤15 16-20 ≥21
麦迪霉素 30 ≤13 14—17 ≥18
四环素类
四环素 30 ≤14 15-18 ≥19
测淋病奈瑟菌 -- -— ≥36
萘啶酸 30 ≤13 14—18 ≥19
诺氟沙星（氟哌酸） 10 ≤12 13-16 17
氧氟沙星（奥复星） 5 ≤12 13-15 ≥16
测淋病奈瑟菌 —- —- ≥31
测肺炎链球菌和β—
溶血型链球菌 ≤12 13-15 ≥16
氯霉素 30 ≤12 13—17 ≥18
灭滴灵（甲硝唑 5 ≥16mm敏感
药敏_精品文档
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质量控制
若高稀释度菌液（10-4mg/ml,低接种菌 量）在对照培养基上生长的菌落数少于 20个菌落，则应从对照管传代培养，重 复试验。
每批实验均需增加H37Rv标准菌株，若 标准菌株生长异常，则本批实验结果全 部无效。
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注意事项
选择新鲜、生长旺盛的菌落进行药 敏试验，生长不良或陈旧菌株应传 代后再进行试验
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取菌液*
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结果报告
按以下方式记录菌落生长情况：
少于50个菌落：
实际菌落数
50-100个菌落：
1+
100-200个菌落：
2+
大部分融合（200-500个菌落）： 3+
融合（大于500个菌落）：
4+
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结果报告
计算耐药百分比：
含药培养基上生长的菌落数 耐药百分比= -------------------------- × 100%
分装至螺旋盖无菌培养管, 每管7ml, 斜置培养基蒸 汽凝固灭菌器内, 85℃凝固50分钟，即制成含药培养 基。
凝固灭菌后的培养基自然冷却后，置35-37℃孵育24 小时。检查培养基污染情况后置4℃保存，1个月内用 毕。
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菌悬液制备
准备磨菌瓶 磨菌瓶为带有可密封螺旋盖的玻璃小瓶，装
入约10个直径3mm的玻璃珠，高压灭菌后待 用。
非结核性分枝杆菌病的症状可有肺内、肺外
之分，肺外感染可涉及皮肤、骨骼和淋巴结
等。
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非结核分枝杆菌特点
NTM广泛分布于自然界的土壤、尘埃 、流水和生牛奶中。显微镜下NTM形 态与结核杆菌相似，抗酸染色呈红色， 但在培养、生化特性与结核杆菌不同。
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药敏试验科普
药敏试验怎么做
E试验
E试条是一条5mm*50mm无孔试剂载体, 一面固定有预先制备, 浓度呈连续指数增 加稀释抗生素, 另一面有读数和判别刻度。 将E试条放在细菌接种过琼脂平板上, 经孵 育过夜, 围绕试条显著可见椭圆形抑菌圈, 圈边缘与试条交点刻度浓度即为抗生素抑 制细菌最低浓度。
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药敏试验方法对比
• 青霉素（R） 苯唑西林（R） 万古霉素（S）：对所有青霉素类、头孢类、和其他β- 内酰胺
类抗生素均耐药 ，此外对喹诺酮类和大环内酯类抗生素交叉耐药 ，严重感染唯一有效抗生 素是万古霉素 。因此 ，对于轻症感染可选择喹诺酮类、 四环素类、复方磺胺、磷霉素等联 合用药； 重症感染可选择糖肽类 ，如万古霉素或替考拉宁联合利福平； 尿路感染可以选择 呋喃妥因、复方磺胺、环丙沙星。
药敏试验科普
目录
一 、什么是药敏试验 二 、药敏试验怎么做 三 、药敏试验结果代表什么 四 、常见致病菌药敏结果
一 、什么是药敏试验
药敏试验概念
经过模拟体内环境条件, 测试分离自病 人体内感染部位病原菌对常见抗生素敏 感性, 即抗生素对目标细菌抑制能力, 从而估计抗生素诊疗效果一个体外试验 方法。
优点 : 操作简单, 反复性好 ; 成本低, 无需特殊设 备 ; 灵活选择抗菌药 品 ; 结果轻易了解
缺点 : 不适合生长缓慢或者 生长速率不一样菌株 以及一些苛养菌
纸片扩散法
稀释法
优点 : 标准化方法, 结果可 靠 ; 检测菌范围更广 ; 定量检测 ; 愈加好反 应菌株耐药情况
缺点 : 操作费事费力
√ 抗生素的选择： • 青霉素（S） ：表示对青霉素类、头孢菌素类均敏感 。因此 ，青霉素为首选抗生素 ，可选择
药敏试验方法简介
药敏试验误差来源及控制
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合理设置对照组
在药敏试验中，应设置对照组以排除干扰因素对结果的影响，确保结果的可靠性。
药敏试验对环境、温度、湿度等条件要求较高，需要严格控制才能保证结果的准确性。
药敏试验的局限性
试验条件限制
对于一些低浓度药物或间歇性发作的病原体，药敏试验可能会出现假阴性结果。
检测灵敏度不高
药敏试验只能检测药物对病原体是否敏感，无法预测患者使用药物后是否会出现不良反应。
应用范围
操作步骤
分子生物学药敏试验需要对细菌基因进行提取、扩增和测序等操作，然后根据测序结果分析细菌对抗菌药物的敏感性。
定义
分子生物学药敏试验是一种基于分子生物学技术的药敏试验方法，通过检测细菌基因序列的变化，判断细菌对某种抗菌药物的敏感性。
应用范围
分子生物学药敏试验适用于一些特殊类型的细菌感染性疾病，如耐药菌感染等。
微生物耐药性的传播方式
微生物耐药性可以通过多种方式传播，如基因突变、质粒传递、细胞重组等。
要点三
抗生素的抗菌谱和抗菌活性
抗生素的抗菌谱是指其能够抗菌的微生物种类范围，而抗菌活性则是指抗生素对特定微生物的抑菌或杀菌能力。
抗生素的耐药机制
微生物对抗生素产生耐药性的机制包括抗生素泵出机制、药物靶点改变机制、药物修饰机制等。
药敏试验的实验方法
药敏试验的种类及方法
03
常规药敏试验
定义
常规药敏试验是一种测定细菌对抗菌药物敏感性的经典方法，通过在体外培养基上测定细菌生长情况，从而判断细菌对物稀释、细菌培养和结果观察等步骤。
应用范围
常规药敏试验适用于各种需要进行抗菌治疗的感染性疾病。
药敏试验的原理
药敏试验的原理药敏试验原理药敏试验是一种用于确定细菌的抗生素敏感性的检测方法，主要用于指导临床上的抗菌治疗，以提高治疗效果和避免抗生素的滥用。
药敏试验的原理是通过将不同种类的抗生素与细菌进行反应，观察细菌的生长情况，来确定其对抗生素的敏感性或耐药性。
具体步骤包括以下几个方面：1. 培养细菌药敏试验前需要先从患者的样本中分离出目标细菌，并在培养基上进行培养，使其生长到所需的数量。
通常使用的培养基包括莫乃基、大肠杆菌平板以及血琼脂等。
2. 制备药物药敏试验所使用的药物通常是常见的抗生素，如青霉素、头孢菌素、氨基糖苷类等。
这些药物需要提前配置好，以确保其浓度的准确性和稳定性。
3. 稀释药物将药物稀释成不同的浓度，这些浓度范围从最小浓度开始，逐渐递增至最大浓度，通常会制备8个不同的浓度。
4. 加入细菌将药物加入到已经培养好的细菌中，让其在固定时间内进行吸收。
可以采用不同的方案，如将药物加到固定体积的培养基中，或是通过切开莫米德瓶，在其中加入药物溶液来进行。
5. 观察细菌的生长情况将稀释好的药物加入细菌中后，将其分配到不同的培养基上，通常使用微量进针或是延伸半硬质琼脂板法进行。
然后，将培养基放到恒温箱中进行培养，观察细菌的生长情况和形态。
6. 解读结果并进行分析根据细菌的生长情况来判断其对抗生素的敏感性或耐药性。
根据不同的药物浓度、细菌生长情况和形态，可以简单地确定细菌对药物的敏感性或耐药性。
药敏试验不仅可以指导临床上的抗菌治疗，而且可以在重要疾病爆发时，对于了解不同城市/城镇之间的细菌耐药率变化有帮助。
在药敏试验中，测定细菌对某种药物的敏感性或耐药性的方法有许多种，目前中国临床上主要采用两种常规药敏试验：纸片扩散法和微量进针法。
纸片扩散法纸片扩散法是一种常见的药敏试验方法，主要用于检测各种抗生素对细菌的敏感性。
该方法将已经稀释好的药物加在一个标准莫莫尼格琼脂板上，然后在细菌感染区域中放置一张含有药物的纸片，在培养室中孵化。
药敏结果的判断
表示该菌所致的感染，采用药物常用剂量治疗有效，即常规剂量时达到的平均血药浓度超过该药对细菌MIC的5倍或5倍以上
中度敏感（I）
表示该菌所致的感染需要用高剂量药物时才有效，或细菌处于体内抗菌药物浓缩的部位或体液（如尿、胆汁、肠腔等）中时才能被抑制，釆用常规剂量时达到的平均血药浓度相当于或略高于该药对细菌的MIC。毒性较小的抗菌药物，适当高剂量可获得临床疗效
药敏结果的判断
表8药敏结果的判断
抗菌药物敏感试验
（AST）
是测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法，目的是检测可能引起感染的细菌对一种或多种抗菌药物的敏感性临床微生物实验室通常采用美国临床与实验室标准化委员会公布的药敏结果判断标准，采用三级划分制，即高度敏感（S）、中介（I）、耐药（R）
耐药（R）
表示药物对某种细菌MIC高于治疗剂量的药物在血或体液内可能达到的浓度；或该菌能产生灭活抗菌药物的Байду номын сангаас，则不论其MIC值大小如何，仍应判定该菌为耐药
药敏试验全文职业教育在线文档
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24-hr AUC/MICCorrelation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibiliof an organism
24-hr AUC/MIC is correlated with outcome of infection, magnitude required for success and MIC at which thisoccurs becomes the PD breakpointSlide no
• 纸片法有独特之处– 选药灵活、便宜、 易懂• MIC法： 商品肉汤法 (自动化法)↑– 可用于厌氧菌、苛氧菌– 计算机管理– 快速 ， 但可能有错误（如诱导型菌）– 新药的评价
• 材料： 浸有一定Abs的干燥的园滤纸片• 步骤： 制备菌悬液 －涂平板 －贴纸片 －孵育 - 卡尺测量抑菌圈直径 －判定R 、 I 、S• 优点： 选药灵活 、便宜 、一个平皿可测多 个药• 缺点： 影响因素多• 适用于快生长菌 、部分苛养菌
ATime above MIC
of an organism
Time
B
efficacy in animal infection models100 ● ●●●● Penicillin s80 ●o ▲ ▲ Cephalosporin s60 ▲y after 4 days of therapy (%)
葡萄球菌
肠球菌
一级
苯唑 ， 青霉素
青霉素 ， 氨苄
二级
红霉素类克林 ， 万古
万古霉素
三级
氯霉素
庆大
常规测试并报告的药物分组(2)
流感嗜血杆菌
肺炎链球菌
如何进行药敏试验
如何进行药敏试验抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了巨大的经济损失。
随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。
并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。
长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效。
这就需要利用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。
但由于药敏试验要求比较严格，条件比较高，仅仅在大中专院校或科研单位有条件的可以操作，一些养殖厂或一些门诊难有条件进行药敏试验的操作。
针对这个问题，经过几年的总结和实践，逐渐总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。
一、实验步骤1、实验材料：（1）普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
（2）药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）（3）细菌：待做药敏试验的细菌或病料（4）接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯等（5）移液器、滴头等2、实验准备：（1）药敏片的准备：购买或自制① 药敏片的制备：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15～20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
② 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
各种属细菌药敏试验解释标准
各种属细菌药敏试验解释标准1.1 常见非苛养菌和苛养菌的药敏试验解释标准因判定折点每年更新一次，常见非苛养菌（肠杆菌科、铜绿假单胞菌、不动菌属、洋葱伯克霍尔德菌、嗜麦芽窄食单胞菌、其他革兰阴性杆菌、葡萄球菌属和肠球菌属）和常见苛养菌（肺炎链球菌和其他链球菌、流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌）的药敏试验解释标准参照CLSI M100的每年更新版文件。
1.2 不常见苛养菌和不常见非苛养菌的药敏试验解释标准1.2.1 乏养球菌属和颗粒链球菌属乏养球菌属和颗粒链球菌属属于苛养菌，是感染性心内膜炎的重要致病菌。
首选检测药物为青霉素、头孢噻肟或头孢曲松和万古霉素。
来自呼吸道或伤口的分离株不必进行药敏试验，来自无菌部位如血液、深部组织、植入的假体装置，特别是免疫缺陷患者，应进行药敏试验。
药敏试验解释标准见表1。
表1 乏养球菌属和颗粒链球菌属的药敏试验解释标准1.2.2 其他革兰阳性球菌（气球菌属、孪生球菌属、乳球菌属和微球菌属）气球菌属首选检测药物为青霉素、头孢曲松和万古霉素；孪生球菌属首选检测药物为青霉素、头孢噻肟或头孢曲松、万古霉素；乳球菌属首选检测药物为青霉素或氨苄西林、头孢曲松、万古霉素、克林霉素和红霉素，格氏乳球菌对克林霉素天然耐药。
微球菌属首选检测抗菌药物为青霉素和万古霉素。
微球菌属常为污染菌，多次血培养阳性或植入假体装置分离的菌株可进行药敏试验。
这些菌属药敏试验解释标准见表2。
表2 气球菌属、孪生球菌属、乳球菌属和微球菌属的药敏试验解释标准1.2.3 对糖肽类药物天然耐药的革兰阳性菌（无色藻菌属、明串珠菌属、片球菌属、猪红斑丹毒丝菌和乳杆菌属）无色藻菌属、明串珠菌属和片球菌属无色藻菌属、片球菌属和明串珠菌属为苛养菌，对万古霉素天然耐药。
首选检测抗菌药物为青霉素或氨苄西林。
分离自无菌部位如血培养、深部组织的菌株，尤其是免疫缺陷患者无菌部位分离的菌株可进行药敏试验。
药敏结果解释标准见表3。
药敏试验操作方法
制作步骤：
1、纸片的准备 2、药液的配制 3、抗菌药敏纸片制作
质控：标准菌株的抑菌 圈直径应落在预期范围 内，如果超出该范围， 应视为失控而予以纠正。
简易药敏片的制法
纸片的准备：
1、取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆 形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中， 瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后， 放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
3、为经验用药提供所选药物的参考依据，可预测抗菌 治疗的效果。“敏感”治疗可能有效；“耐药” 肯定 失败
4、新抗菌药的研究
以下情况不需进行药敏测定：
标本污染细菌，非致病菌引起 已知某些抗菌药对某菌有良好的抗菌作用且很少
有耐药菌产生 已知细菌全部耐药的药物 对营养要求高而不易生长的细菌
二、常用的药敏测定方法
3、E测定法（E test）：
与扩散法相似，但药物包被于长塑料条上，能够精确测定 MIC值。适于一些特殊病原菌的药敏测试，但价格较为昂贵。品（单品药、药厂的成品药、中药）、恒温培养箱、药敏片、 培养基、平皿（直径90mm）、烧杯、蒸馏水、滤纸、打孔器（文 具店有售）、
1、纸片琼脂扩散法（3/3）
3、培养观 察
将平 皿培养基 置于37℃ 温箱中倒 置培养24 小时后， 观察效果
2、牛津杯法
第一步同“纸片法”细菌涂抹平板。 以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、
高10 nm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、 瓷管），放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接 触无空隙，并在小管处标记各种药物名称。每个平板可 放4-6支小管。待分钟后，分别向各小管中滴加一定数 量的各种药液，勿使其外溢。
病原药物敏感实验报告
一、实验目的本实验旨在通过病原药物敏感试验，了解病原微生物对不同抗生素的敏感性，为临床合理选择抗生素提供科学依据，指导临床治疗，提高治疗效果。
二、实验原理病原药物敏感试验是通过观察病原微生物在含有不同浓度抗生素的培养基上生长情况，来判断病原微生物对某种抗生素的敏感性。
根据抑菌圈的大小，可以判断病原微生物对药物的敏感程度。
三、实验材料1. 病原微生物样本：疑似感染部位的组织或分泌物。
2. 抗生素纸片：含有不同浓度抗生素的纸片。
3. 琼脂培养基：用于培养病原微生物。
4. 微量移液器：用于定量加样。
5. 镜头：用于观察病原微生物的生长情况。
6. 温箱：用于培养病原微生物。
四、实验方法1. 样本处理：将疑似感染部位的组织或分泌物进行稀释，取适量加入琼脂培养基中，混匀。
2. 制备菌悬液：将处理后的样本在显微镜下观察，选择生长良好的菌落进行稀释，制备成一定浓度的菌悬液。
3. 贴纸片：将制备好的菌悬液均匀涂布在琼脂培养基表面，然后将抗生素纸片贴在培养基表面，确保纸片与培养基充分接触。
4. 培养观察：将培养皿放入温箱中，在适宜温度下培养24-48小时。
5. 结果观察与记录：观察并记录抑菌圈的大小，根据抑菌圈的大小，判断病原微生物对各种抗生素的敏感性。
五、实验结果与分析1. 病原微生物对青霉素的敏感性：抑菌圈直径为15mm，表明病原微生物对青霉素表现为低敏感。
2. 病原微生物对头孢菌素的敏感性：抑菌圈直径为20mm，表明病原微生物对头孢菌素表现为中敏感。
3. 病原微生物对喹诺酮类的敏感性：抑菌圈直径为25mm，表明病原微生物对喹诺酮类表现为高敏感。
4. 病原微生物对氨基糖苷类的敏感性：抑菌圈直径为10mm，表明病原微生物对氨基糖苷类表现为不敏感。
六、实验结论根据病原药物敏感试验结果，病原微生物对青霉素表现为低敏感，对头孢菌素表现为中敏感，对喹诺酮类表现为高敏感，对氨基糖苷类表现为不敏感。
临床治疗时，应优先考虑使用喹诺酮类药物，同时可根据病情变化调整治疗方案。
药敏试验程序及步骤
用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。但由于药敏试验要求比较严格，条件比较高。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法(包括琼脂和肉汤稀释法)，抗生素浓度梯度法(E-test法)，和自动化仪器等。 一、 纸片扩散法
该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，而抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
E 安全采集
2) 标本处理
2h送到检验处，部分菌应保温于一定环境中保存 注意安全尤其对烈性传染病。有时可
以直接用抽取标本的注射器
如尸检组织、支气管洗液、心包液、痰、尿等标本要保存于4?环境中，脑脊液保存于
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3) 各部位标本的采集及注意事项
A 血液
皮肤消毒 采血部位 采血量 采血次数采血时间不同动物有所不同 血液应马上送检 室
二、稀释法
稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度(MIC)，一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点(敏感、中介和耐药)的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.
application; infection and antibacterial drug of clinical application; transfusion refers to levy; nutrition support of adapted card and clinical application; common life support technology (as cycle breathing support, and nutrition support,) and emergency technology of application; common guardianship instrument using. Look: shock, cardiac respiratory arrest and acute organ failure, systemic inflammatory response syndrome and severe infection and multiple organ dysfunction syndrome (MODS), severe disturbance of body fluid environment such as critical theory and progress of the illness. 2. basic requirements (1) species and cases of study requirements: severe pneumonia in disease-disease myocardial infarction ... 3. high requirements (1) learning disease species: disease species disease species image radiation: rheumatic heart congenital heart intestinal Crohn's (Crohn) disease intestinal tuberculosis bile duct cancer chronic pancreatic inflammatory urinary system stone urinary system tumor adrenal disease thyroid disease cranial within infection nervous system tumor nuclear medical: Digest road bleeding explicit like brain blood flow perfusion explicit like testicular blood pool explicit like salivary glands explicit like (2) clinical knowledge, and skills requirements: understand various image check
药敏试验方法简介ppt
02
药敏试验基本原理
药敏试验的基本原理
药敏试验定义
药敏试验是测定细菌对药物敏感性的实验方法，通过药敏试验可以指导临床 合理使用抗生素，及时有效的控制感染。
药敏试验原理
药敏试验的原理是药物对细菌生长的抑制作用，通过在体外培养细菌，并观 察细菌生长情况来判断细菌对药物的敏感性。
抗生素稀释
为了检测抗生素对不同浓度下细菌的效果，需要对抗生素进行稀释处理。
稀释方法：连续稀释法、棋盘法等。
稀释步骤：计算抗生素的初始浓度→将抗生素溶液按比例稀释至所需浓度→将不同浓度的抗生素溶液分 装到不同的试管或培养皿中。
培养及结果观察
1
将接种细菌的培养基和含有不同浓度抗生素的 培养基一同放入培养箱中，按照不同的时间点 进行培养和观察。
药敏试验方法简介ppt
目 录
• 药敏试验概述 • 药敏试验基本原理 • 药敏试验操作流程 • 药敏试验结果解读 • 药敏试验注意事项及改进建议 • 研究展望
01
药敏试验概述
定义与目的
定义
药敏试验是测定细菌对抗生素药物敏感性的实验方法，通过 药敏试验可以了解致病菌对不同抗菌药物的敏感性，为临床 合理选择抗生素提供依据。
加强新型药物筛选
加强基于药敏试验方法的抗菌新药物筛选工作，提高抗菌药物的研发和应用水平。
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理等。
常见问题及处理
试验结果异常
如果得到的结果与预期差距较大，需要检查每一步操作，寻找可能的原因。
试剂失效
对于试剂的保存和使用需要注意有效期和质量，如发现试剂失效需及时更换。
细菌药敏试验重要课资
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3.需要修订的结果：耐庆大霉素的革兰 阳性菌即使出现对阿米卡星、奈替米星 敏感，也要报告耐药；耐甲氧西林葡萄 球菌，应报告对所有β-内酰胺类药物耐 药。
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用折点解释药敏试验结果的意义
1.预测抗菌药物的临床治疗效果，如果某种药物 敏感，则该药治疗可能有效。如果耐药，则可能 导致治疗失败。 2.指导临床医生选择使用抗生素，避免用药不当， 延误治疗，并诱导产生耐药菌株。 3.提供选择药物的依据。 4.监测耐药性，掌握耐药菌的流行趋势。
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3.所选药物具有代表性：实验室不 需要也不可能对每种抗菌药物均进 行测试。原则上在各类抗菌药物中 选择一种代表性药物作测试，可反 映一类药物的抗菌特性。如大环内 脂类选红霉素，喹诺酮类选环丙沙 星或氧氟沙星，头孢菌素选1、2、 3代头孢菌素的代表药物，同时还 应考虑价格因素。
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试验结果的评价与报告
感染的可疑病原菌，又不能从该菌的种属特征 可靠地推测其对抗菌药物的敏感性时，则需要 进行药敏试验。
2.从同一患者体中同部位连续分离到相同的菌株， 为检测它们是否已经发展为耐药，应重新进行
药敏试验。尤其是在第四代头孢菌素治疗肠杆
菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷氏菌属，所有抗菌
药物治疗铜绿假单胞属，喹诺酮类治疗葡萄球 菌属3-4天后，起初对某种抗菌药物敏感的菌株 易发展位耐药。
一、药敏试验概念
1.抗菌药物敏感试验：简称药敏实验，是指在体 外测定抗菌药物抑制或杀灭微生物的能力。
2.最低抑菌浓度（MIC)：指抗菌药物能够抑制 微生物生长所需要的最低浓度。用Mg/ml表示。
药敏试验及药敏试验结果介绍
与NCCLS
PDM－ASM MIC相关值
药敏试验的错误来源一
• 每个系统特有的局限性 快生长菌〕 • 培养基成分、厚度、pH、离子浓度 • 各种材料的正确保存 纸片－20℃ • 操作步骤
– 纯菌、35℃、16－28h – 葡萄球菌、肠球菌 24h
药敏试验的错误来源二
• 体内、体外试验的不一致性 • 某些菌测某些药;结果有误
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Antibiotic concentration ug/ml
6
Drug A
4
Drug B
2
B
0
A
Time above MIC
Time
Drug A present at concentration of 2 ug/ml for 50% of dosing interval Drug B present at concentrationSloidef n2o ug/ml for 30% of dosing interval 40
40
60
80
100
Time above MIC %
Craig. Diagn Microbiol Infect Dis 1996; 25:213–217
24-hr AUC/MIC
Correlation of serum pharmacokinetics with MIC susceptibility of an organism
肠球菌 青霉素;氨苄 万古霉素
庆大
常规测试并报告的药物分组3
一级 二级 三级
流感嗜血杆菌 氨苄;青霉素 TMP/SMZ 头孢肤肟;噻肟 他啶;氯霉素 阿奇;头孢克罗 环丙;亚胺培南
肺炎链球菌 青霉素;红霉素
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作用于细菌细胞壁的抗菌药
• β-内酰胺类一: 1青霉素类,
*天然青霉素（青霉素G，青霉素V）
*耐青霉素酶的青霉素（苯唑西林，氯唑西林，双氯 西林，氟氯西林） *广谱青霉素
（氨苄西林，阿莫西林）
• 抗假单胞菌广谱青霉素（替卡西林，哌拉西林） • 作用于革兰阴性菌的青霉素（美洛西林，匹美西林， 替莫西林）
谁是罪魁祸首？？
• 滥用抗生素被国际医学界视为致使耐药 性“超级细菌”出现的罪魁祸首。拥有13 亿人口的中国是世界上滥用抗生素最为严 重的国家之一，细菌整体耐药率远远高于 发达国家。 根据调查研究，中国真正需要 使用抗生素的病人数量仅约占20％；中国 的抗生素原料人均年消费量是美国的10倍。 然而，真正需要使用抗生素的病人人数不 到20%，80%以上属于滥用抗生素
纸片扩散法－影响因素
• • • • • • MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度，预孵育时间
药敏试验质控要求
• （1）用质控菌株按标准方法与临床标本分离 菌株同步进行药敏试验。 （2）更换药物或培养基时必须用相应质控菌 株测试。 （3）三级医院每天用质控菌株进行常规监控， 二级医院每周监测1次。每次测试结果应作记 录。 （4）如出现抑菌环直径超出可接受范围，应 从培养基、抗菌药物、接种浓度等方面寻找原 因，并及时纠正。
5.阻断RNA 2..阻断核糖体蛋白合成 DNA的合成 4.影响叶酸代谢 如氨基糖苷类、四环 喹诺酮类、利福平 如磺胺类、异菸肼、 素、红和氯霉素 阿糖腺苷、新生霉素 乙胺丁醇 甲硝唑
抗菌药的分类
• 一 依据其作用靶位或抗菌药在靶位 上发生的生理过程进行分类 • 1 作用于细菌细胞壁的抗菌药 • 2 作用于细菌胞质膜上的抗菌药 • 3 作用于细菌细胞质代谢过程的抗菌 药，如蛋白质合成、DNA复制或同时 作用于两者。
超级细菌”究竟是一种什么样的细 菌？它是怎样产生的？
• 钟南山：“超级细菌”是革兰氏阴性杆菌、肺炎克雷 伯菌、大肠杆菌或不动杆菌里含有一些酶的基因。大多数 抗生素对这种所谓“超级细菌”没有效果。这种细菌的来 源常常都是由于人们太多使用抗生素，特别是一般的感冒 或流感。另一原因是用得(抗生素)不合适，这些细菌常是 用比较高级的抗生素产生的。比如，第三代头孢霉素或碳 青霉烯等药用得太多，就会产生。 • “超级细菌”目前主要是指革兰氏阴性杆菌。假如这 个趋势发展下去，可能也会产生革兰氏阳性菌。现在有一 种叫甲氧西林金黄色葡萄球菌，目前还有一两种药对它有 效。假如人们一直不注意，老是滥用抗生素，迟早会产生 对革兰氏阳性杆菌的超级耐药菌。耐药菌是需要全球关注 的问题。
104 cfu
mg/ml
4
2
1
0.5
0.25
0.12
0
微量液体稀释法
药敏试验方法2－肉汤稀释法
4 混
8
16
32 混
64 清
128
256 ug/ml
抗生素倍比稀释，种菌105CFU/ml ， 孵育35℃， 16-20h，判读
• 宏量肉汤法（2ml, 13x100mm ） 微量肉汤法 （ 0.1ml, 微量板） 自动化 仪 • 优点：准确，可靠，可用于研究 • 缺点：
3 3、接种物浊度调整好后,最好在15分钟内接种,用无 菌棉拭子蘸取调好的菌液 ,在液面上方管壁处旋转并用力 挤压几次,以从中挤出过多的接种菌液。 4 、棉拭子在无菌的稍干燥的 M-H 琼脂表面划线接 种，再重复操作两次，每次将平板转动约 60 度，每次接 种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹琼脂的 边缘。 5、在加含药的纸片之前，可以将培养皿盖半开 3-5 分钟，但不超过15分钟，以使表面过多的水分被吸收。
抗菌药物敏感性试验目的
• 1为临床合理用药提供依据. • 2做耐药监测和流行病学调查. • 3评价新药. • 4细菌耐药谱的分析和分型.
纸片扩散法(KB法) • 是半定量方法,是CLSI推荐的 标准方法.,是目前公认的标准 方法.
纸片扩散法
• 原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已 接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的 药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周 围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围 抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从 而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。
• 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏 感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相 关关系
一、纸片扩散法
试验器材及抗菌纸片 1.菌种 2.培养基 K-Br法指定用MH琼脂（水解酪蛋白琼脂） 3.抗菌纸片 哌拉西林（PIP）、哌拉西林/他唑巴坦 (TZP)、头孢噻肟（CTX）、头孢曲松（CRO）、头孢 他啶（CAZ）、头孢吡肟（FEP）、阿米卡星 （AMK）、环丙沙星（CIP）、亚胺培南（IMP）、 青霉素（PEN）、苯唑青霉素（ OXA ）、氨苄西林\ 舒巴坦（AMS）、头孢唑啉（FZN）、氨曲南 （ATM）、万古霉素（VAN）、克林霉素（CLI）、 复方新诺明（SXT）、红霉素（E）、庆大霉素(GEM)、 氨苄西林（AM）。 4.其他:无菌生理盐水、0.5麦氏比浊管1.5×108cfu/ml) 无菌棉签 \镊子\ 刻度尺 \接种环 \9mm无菌平板
试验药物的选择
在进行体外药敏试验时，应根据不同抗菌药物 的特点和耐药谱，结合患者的临床特点选择试验药 物，选择药物的基本原则如下： （1）代表性：药敏试验所选药物应具有代表性及对 同类药物有提示作用。 （2）预报性：选择合适的药物作药敏试验，可对抗菌 药物使用有提示作用。如金黄色葡萄球菌对苯唑西 林耐药提示对目前所有β－内酰胺类抗生素耐药； 革兰阳性菌耐庆大霉素提示对氨基糖甙类耐药；克 雷伯菌属及大肠埃希菌对头孢泊肟、头孢他啶或氨 曲南耐药，提示菌株可能产超广谱β－内酰胺酶 （ESBLs）。
• 1 \
M-H琼脂：在维持细菌正常发育，不拮抗抗菌药物 活性及商品的批间差等方面优于其他培养基，测肺炎链 球菌的敏感性时在培养基中加5%的脱纤维羊血，测嗜血 杆菌及淋病奈瑟菌的敏感性时，在培养基中加入10克/L 血红素和2。5克/L辅酶I。校正PH7.2-7.4
• 2\ 抗菌药物纸片直径约为6.35MM,每片的吸水量为 20ul,药物纸片必需在有干燥剂 的容器内低温(-10度以下) 保存,只拿少量放在4度备日常工作用.装纸片的容器从冰 箱取出后,必须在室内温暖10min以上才可打开.如果立即 打开,空气中的水分会冷凝在纸片上从而潮解 • 含药纸片与平板边缘至少相距15mm，纸片与纸片间 中心点至少相距24mm。 • 含药纸片贴在琼脂上不得再移动，否则会因部分药 液渗入琼脂而影响试验结果。
药敏纸片选择原则：
• 1抗菌作用 • 2依据FDA组合原则(ABCU) • 3标本来源 • 4疾病,年龄 • 5药物的组织分布.
细菌药敏试验-宏量稀释法
•Minimal inhibitory concentration (MIC) •Reference method. Add standard inoculum to dilutions of antibiotic. Incubate overnight. MIC is lowest concentration that inhibits growth (can also be performed by agar dilution). Interpretation (S or R) is based on achievable drug levels
②头孢菌素：四代头孢
• 头孢菌素与青霉素比较：对B-内酰胺酶的 稳定性高于青霉素，抗菌谱较青霉素广， 毒性小，变态反应少 • 对于阳性菌：一代头孢菌素>二代>三代 • 对于阴性菌:一代头孢菌素<二代<三代 • 四代头孢对于革兰阳性菌和革兰阴性菌的 效果几乎相同,并具有抗假单胞菌的作用.
作用于细菌细胞壁的抗菌药
青霉素与B-内酰胺酶抑制剂
• 氨苄西林-舒巴坦(对不动杆菌作用强) • 阿莫西林-克拉维酸 • 哌拉西林-三唑巴坦
意义:减少头孢菌素的用量，增加β-内酰 胺/β-内酰胺酶抑制剂(哌拉/他唑巴坦) 可减少MRSA的产生
作用于细菌细胞壁的抗菌药
• -内酰胺类
•
–
一代 二代 三代 四代
–
–
• 2.头孢类 头孢唑啉、 头孢拉定、 头孢氨苄 头孢呋辛、 头孢呋辛酯 、 头孢克洛 头孢孟多 头孢噻肟、头孢曲松、 头孢地嗪、 头孢他啶、 头孢哌酮 头孢吡肟、 头孢匹罗、 头孢吡兰
实验步骤
5.孵育：放置3~10分钟后贴上标准抗生素纸片，放置培 养箱内孵育。经过35℃16~24h孵育后量取抑菌圈直径 （检测肺炎链球菌、嗜血杆菌及淋病奈瑟菌敏感性的 平板应放在5％～7％二氧化碳孵箱中孵育），平板最 好单独摆放，重叠最多不能超过2个。孵育18～24h， 读取结果。 6.结果判读：刻度尺量（卡尺）取抑菌圈直径，根据 CLSI标准，报告测试菌对抗生素是敏感(S)、耐药 （R）、还是中介（I）如变形杆菌抑菌环内出现蔓延 生长，磺胺类药物抑菌环内出现微量生长，均忽略不 计。判读药敏试验结果应参考CLSI 最新公布的折点表。
纸片扩散法结果的判定
1. 先看菌名（鉴定到种〕 2. 不同的药物使用不同的折点
药名 CAZ 菌名 绿脓 R ≤17 ≤14 S ≥18 ≥18 菌株1 菌株2 16R 16I 30S 19S Pip/Taz 绿脓
3. 同是S时，偏离敏感折点越高的药, MIC越低，活性也越高
试验平板的接种注意事项
– 劳动强度大 – 细菌生长情况不可查
抗生素、细菌、人体
抗生素
PHARMACOKINETICS
RESISTANCE
PHARMACODYNAMICS SIDE EFFECTS INFECTION
细 菌
IMMUNITY
人 体
抗菌药的分类(抗生素的作用机制)
1.阻断细胞壁的合成 如B内酰胺类、万古、 杆菌肽 3. 损伤细胞浆膜影响通透性 如多粘菌素、两性霉素和制 霉菌素